毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析

利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由10个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,得到的样品经过MALDI TOF MS和N末端测序,证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象,并对产生不均一性的原因进行了分析。实验同时证实,利用毕赤酵母得到的胰岛素前体,经胰蛋白酶酶切后,生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30,且C末端未发生降解,这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路。     

基于RNA-Seq技术的毕赤酵母基因组重注释及新型强启动子的发现与序列分析

使用RNA-Seq技术,对毕赤酵母进行了转录组测序。基于测序结果,对现有毕赤酵母基因组进行了重注释,修正了基因组序列中的错误位点861处,发现了新转录本249个及可变剪切现象83个,并更正了553个转录本的错误注释。经过表达谱分析,在毕赤酵母中发现了2个新型强启动子,分别命名为P437和P1431,其驱动的转录本的最高转录水平分别为AOX1基因的1.78倍和3.40倍。序列分析显示,P437和P1431序列中存在着多个酵母转录因子的结合位点。     

基于网络药理学探析复方阿胶浆辅助治疗肿瘤的作用机制研究

近年来,复方阿胶浆在临床上常用于癌症患者的治疗,疗效十分确切,在该文中,首先,通过从中药化学成分数据库和文献收集,建立了复方阿胶浆的化学成分库,然后,采用MetaDrug软件对复方阿胶浆进行靶标预测,获得“成分-靶标”网络,再次,通过与肿瘤的靶标网络进行比对、分析,获得“成分-靶标-肿瘤靶标”异质网络,并通过进一步地基因功能分析和代谢通路分析。结果发现,复方阿胶浆既能直接调节癌症细胞分化、生长、增殖和凋亡,具有直接的抗肿瘤作用,同时通过补血、提高免疫力,对肿瘤具有辅助治疗作用。     

近红外光谱分析技术在复方阿胶浆生产全程中的应用进展及相关思考

该文报道了东阿阿胶股份有限公司将近红外(NIR)光谱技术应用于复方阿胶浆生产全程质量控制中的实例。具体应用包括原料药材的质量控制、提取工艺和碱沉工艺的在线监控、以及复方阿胶浆成品的快速分析和不开瓶检验技术。通过以上技术的应用,初步实现了复方阿胶浆生产过程的可视化,增强了生产过程的可控性,有助于提高不同批次产品之间的质量一致性。同时还对NIR光谱技术用于复方阿胶浆生产过程的相关问题进行了相关思考,以期为其他中药品种开展类似研究提供参考。     

鲑鱼降钙素前体多肽在毕赤酵母中的分泌表达

将鲑鱼降钙素前体多肽（sCTGly）基因克隆到表达载体pPIC9K上,然后转化毕赤酵母营养缺陷型菌株GS115,利用酿酒酵母分泌信号肽α-factor将目的产物分泌到发酵上清液中.经组氨酸缺陷筛选、G418高拷贝筛选及摇瓶表达筛选,获得较高水平表达菌株GS115-sCTGly.酶联免疫反应检测上清液中酶的活性,表明sCTGly产量在10mg/L以上.通过5L发酵罐发酵条件优化,表达水平提高到200mg/L上.     

海洋灰绿曲霉AgveA基因响应盐度胁迫的功能分析

通过染色体步移方法克隆了基因AgveA、AgfphA、AglreA和AglreB的上下游侧翼序列,并通过逆转录确定了各个基因的内含子序列。通过实时荧光定量PCR发现,基因AgveA转录受盐度胁迫的作用下调较明显,而AgfphA、AglreA和AglreB上调较明显。通过构建打靶质粒以敲除AgveA,最终成功构建了基因缺失株ΔAgveA,并从菌丝形态、菌落形态、菌丝生长速率和细胞发育表型4个方面进行了基因功能分析。结果表明,菌株ΔAgveA的菌丝形态并未产生明显变化,而菌落的边缘存在残缺,菌丝生长速率在生长后期加快;细胞发育模式产生明显改变,AgveA基因的缺失导致海洋灰绿曲霉在高盐度胁迫条件下子囊果的合成完全受阻,而在低盐度胁迫条件下产生分生孢子的同时也形成了极少量的子囊果。     

UPLC-QTOF-MS结合主成分分析法用于龟甲胶、鹿角胶中添加牛皮源成分的检测研究

目的:建立龟甲胶、鹿角胶中非法掺入牛皮源成分的检测方法。方法:采用胰蛋白酶对龟甲胶、鹿角胶、牛皮源成分进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)进行测定,采用Markerlynx软件对3种胶类的液质数据进行主成分分析,找出鉴别牛皮源成分的专属性特征肽段,并对特征肽的序列进行确认。结果:对19批样品进行检测发现,其中8批龟甲胶及8批鹿角胶中可检出牛皮源成分的特征肽段。结论:所建立的方法经验证,专属性较强,可用于龟甲胶、鹿角胶中非法掺入牛皮源成分的检测。     

两种融合蛋白的亲和柱上酶切

对两种融合表达的药物蛋白尝试了固相柱上酶切的方法,即Trx-r-PA、GST-IL-11融合蛋白分别在ETI-SepharoseFF、GST-Agarose亲和柱上酶切,酶切效率均高于液相酶切法.     

龟鹿二仙口服液质量标准研究

目的:通过对龟鹿二仙口服液的质量标准进行再研究,建立更简便易操作的定性、定量方法,提高产品的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对龟鹿二仙口服液中龟甲、鹿角、党参、枸杞子进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)对甜菜碱进行含量测定,以丙基酰胺键合硅胶为填充剂,以乙腈-水(80∶20)为流动相,用蒸发光散射检测器检测,理论板数按甜菜碱峰计算应不低于4000。结果:薄层鉴别均斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:建立的方法操作简便、专属性强、重复性好、结果准确,可作为龟鹿二仙口服液的质量控制标准。     

粟酒裂殖酵母细胞絮凝研究

利用一株具有自身絮凝能力的粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ）变异株作为进行无载体固定化细胞酒精发酵的出发菌株，对影响其絮凝的环境因子和诱导操作条件进行了研究，并利用响应面分析技术（ＲＳＡ）对此菌株的絮凝诱导操作工艺进行优化，建立了经验模型和快速高效絮凝细胞颗粒技术的最佳工艺条件。