生物医学新兴学科与中药现代化——现代组合成分药物的研究

中药的特色是通过多成分、多靶点的整体调控作用来系统纠正疾病造成的机体失衡。中药在治疗多基因、多因素引起的某些复杂疾病方面相对西药(通常是单一化学成分药物)有独到优势。但以天然动植物为来源的中药在质量控制和疗效科学依据方面的不足严重影响了中药在现代社会的应用。目前,组合治疗现代医学和系统生物学的发展为中药现代化提供了新的机会。提出应用现代组合成分药物和组合治疗新概念,科学阐明中药药效的学术观点;并提出综合应用蛋白质组学和化学生物学等生物医学新兴科技从中药中开发现代组合成分新药的技术。     

珍稀中草药金线莲的RAPD研究

为了鉴别金线莲的品种,探索同属植物之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,并制定正品金线莲的DNA指纹图谱,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall．)．Lindl．、台湾开唇兰A.formosanus Hay．进行了鉴定,结果选择的7个引物对3个品种共扩增出98个位点,其中3个引物为高特异性引物。结论 RAPD技术不仅能鉴别种间差异,而且能揭示同种不同产地植物的遗传变异。     

珍稀中草药金线莲的RAPD研究

为了鉴别金线莲的品种,探索同属植物之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,并制定正品金线莲的DNA指纹图谱,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall．)．Lindl．、台湾开唇兰A.formosanus Hay．进行了鉴定,结果选择的7个引物对3个品种共扩增出98个位点,其中3个引物为高特异性引物。结论 RAPD技术不仅能鉴别种间差异,而且能揭示同种不同产地植物的遗传变异。     

双波长薄层扫描法测定地骨皮中莨菪亭含量

本文用双波长薄层扫描法首次测定了５种商品地骨皮药材中莨菪亭的含量，以山西２产地骨皮的含量最高。     

非线性化学指纹图谱技术结合高效液相色谱法鉴别天麻产地及活性成分测定

目的:利用非线性化学指纹图谱技术结合HPLC对天麻的产地进行鉴别,并对不同产地天麻中天麻素及整体活性成分进行定量分析。方法:采集了云南、湖北、贵州和东北三省4个产地天麻,利用非线性化学指纹图谱及HPLC指纹图谱对其产地进行鉴别。采用硫酸+硫酸锰+溴酸钠+丙酮+样品成分振荡体系,以天麻样本作振荡底物,建立天麻的非线性化学指纹图谱,结合图谱显著的直观差异及系统相似度模式识别对不同产地天麻进行鉴别评价,并测定不同产地天麻活性物质相对整体含量。同时,建立4个产地天麻的高效液相色谱指纹图谱,进行模糊聚类分析,并测定不同产地天麻的天麻素含量。结果:非线性指纹图谱法与HPLC指纹图谱分类结果一致,均能把天麻的产地给予溯源。活性成分相对含量的比较结果显示不同产地的天麻存在品质差异,两种方法相结合,既能对单个活性组分进行定性定量分析,又可获得活性成分整体含量的结果。结论:该研究为天麻的产地鉴别提供了一种简单、经济、快速的新方法,为科学表征天麻活性成分含量提供了新的技术手段。     

旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX的克隆表达及免疫学特性初步分析

目的克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX,初步探讨其免疫学特性,为研究新的防治方法奠定科学基础。方法从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列。使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列。半定量RT—PCR分析该基因的转录。构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX,大肠杆菌中IPTG诱导表达,His—tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX;将纯化的重组蛋白40斗g／只免疫BALB／c小鼠,免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清,间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度。结果RACE—PCR克隆出TsCPX全长基因序列,共1227bp;RT．PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380bp扩增条带,条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期。E．coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX;重组蛋白免疫小鼠二次后,免疫血清总IgG迅速上升,三次免疫后达到峰值（P〈0．001）;IgG亚类IgGl抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升,亚类IgG2a无明显上升,两者间差异有统计学意义（P〈0．001）。结论成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达,TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性,能引起宿主（小鼠）Th2型为主的免疫应答．具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值。     

TERT基因启动子区域突变与神经胶质瘤的相关研究进展

正肿瘤的一个重要特性就是肿瘤细胞的无限增殖,这一特性可以通过基因变异实现端粒长度的维持,从而解除细胞周期的限制来实现[1-2]。对黑色素瘤的研究表明,体细胞端粒长度的维持主要有两种机制:端粒酶依赖性机制(85%)和端粒酶非依赖性机制(15%)[3],后者依靠ATRX和DAXX变异介导的端粒替代延长机制(ALT)实现端粒的延长;而对前者,虽然有研究发现TERT基因启动子区域高甲基化可以     

成人脑室胶质瘤患者预后列线图模型的构建与评价

  目的   探究成人脑室胶质瘤（adult ventricle glioma, AVG）患者的预后因素,进一步构建和评价预后列线图模型,为该类患者的临床管理提供一定的参考。   方法   本研究纳入SEER数据库（1973–2016）中经组织学明确诊断的AVG患者,用随机数字表法按2∶1比例分为训练集和验证集进行分析。使用Kaplan-Meier进行生存分析,Cox回归分析确定总生存（OS）和癌症特异性生存（CSS）的独立预后因素,结合患者基本特征,分别构建训练集中针对OS率和CSS率的生存相关列线图预测模型,再依次通过训练集和验证集进行模型的内部交叉验证和外部验证。C指数（C-index）用来评估列线图模型的真实性和可靠性,校准图用来评估训练集和验证集中预测值和观察值之间的一致性。   结果   本研究共纳入369例AVG患者,其中男性218例,女性151例,所有患者中位年龄为53岁。根据WHO分级,66例（17.9%）为Ⅱ级胶质瘤,73例（19.8%）为Ⅲ级胶质瘤,230例（62.3%）为Ⅳ级胶质瘤。根据手术切除程度,59 例（16.0%）为肿瘤全切,145例（39.3%）为次全切或部分切除。所有患者中,167例（45.3%）术后接受了放疗,143例（38.8%）术后接受了化疗。患者随机分为训练集 （n=246） 和验证集（n=123）,训练集和验证集之间的基本临床特征的差异均无统计学意义（P>0.05）。训练集中Cox回归分析显示,年龄≥65岁、肿瘤分级III级和Ⅳ级、未接受放疗均是OS和CSS的独立预后因素。在训练集中,使用5个变量（年龄、性别、WHO 分级、手术和放疗）分别构建用于预测术后6个月、1年和2年OS率和CSS率的列线图模型。训练集内部交叉验证结果显示,OS率和CSS率的C指数分别为0.758和0.765;验证集外部验证结果显示,OS率和CSS率的C指数分别为0.733和0.719。训练集中6个月、1年和2年OS率的校准图均表现出良好的一致性,而在验证集中一致性相对较低。6个月、1年和2年CSS率的校准图与OS率校准图具有相似的结果。   结论   OS率和CSS率的列线图预测模型具有中等可靠的预测效能,可为临床医生简易评估AVG患者的生存概率提供参考。      

旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX的克隆表达及免疫学特性初步分析

目的克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX,初步探讨其免疫学特性,为研究新的防治方法奠定科学基础。方法从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列,使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列。半定量RT-PCR分析该基因的转录。构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX,大肠杆菌中IPTG诱导表达,His-tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX;将纯化的重组蛋白40μg/只免疫BALB/c小鼠,免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清,间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度。结果 RACE-PCR克隆出TsCPX全长基因序列,共1227bp;RT-PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380bp扩增条带,条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期。E.coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX;重组蛋白免疫小鼠二次后,免疫血清总IgG迅速上升,三次免疫后达到峰值(P<0.001);IgG亚类IgG1抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升,亚类IgG2a无明显上升,两者间差异有统计学意义(P<0.001)。结论成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达,TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性,能引起宿主(小鼠)Th2型为主的免疫应答,具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值。     

后基因组时代的蛋白质组学及其在药学研究中的应用

直接为人类自身健康服务的药学研究一直是现代高新技术应用的前沿领域。近十几年来 ,随着“组合化学”[1] 和“高通量活性筛选”技术的发展[2 ] ,建立在生化与分子生物学基础上的现代生物医学的进步 ,以新药开发为中心的药学研究也不断取得新的突破。但与此同时 ,一些严重威胁人类健康的重大疾病 (心脑血管病 ,糖尿病 ,癌症等 )的致病机理迄今仍未完全阐明 ,更缺少有效的治疗药物。处于自然界进化树顶端的人体生命奥妙无穷 ,疑难疾病更往往是多因素相关的和动态变化的 ,因而异常复杂。而现有的多偏重于局部和静态的研究手段 ,在面对这些难题…