抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白在荷瘤裸鼠体内的预定位显像

目的：研究^153Sm-生物素和抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白（CEA ScFv-core-streptavidin）在荷人直肠癌裸鼠体内的两步法预定位显像和体内分布。方法：对23只荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEA ScFv-core-streptavidin进行预定位，24h后腹腔注射^153Sm-生物素，其中20只于1、4、8和24h进行体内分布研究，余3只于8和24h进行定位显像。结果：在荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEA ScFv-core-streptavidin预定位后24h，注射^153Sm-生物素后1h，肿瘤/血比值为0.49，4和8h达1.21和1.56，24h达最高，为3.09。裸鼠定位显像示，8h肿瘤部位放射性明显浓聚，24h本底明显降低，肿瘤呈放射性“热“区。结论：^153Sm-生物素和CEA ScFv-core-streptavidin预定位显像能提高靶/非靶比值，缩短显像时间，改善图像质量。     

高活力人降钙素类似物vhCT的免疫原性研究

本研究用固相多肽合成法合成人降钙素类似物vhCT ,产物纯度达到等电聚焦均一 ,质谱测定分子量精确。生物活性为天然人降钙素的 2 0～ 2 5倍。用放射免疫法测定vhCT能与识别天然人降钙素的抗体起反应 ,产生IgG抗体的免疫原性随偶联的不同载体而有差异。但在BALB/C5 7小鼠体内不引起IgE增高。提示vhCT不产生IgE介导的过敏反应 ,具有药物应用前景。     

幽门螺杆菌HspA和UreB双价侯选疫苗株的构建

目的 构建表达幽门螺杆菌的组成成分热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）和尿素酶Ｂ亚单位（ＵｒｅＢ）的重组蛋的白质的侯选菌株。方法 用ＰＣＲ方法从幽门螺杆菌的染色休ＤＮＡ上分别扩增出ＨｓｐＡ和ＵｒｅＢ基因片段,将它们融合插入原核表达载体ｐＥＴ－２３ｂ（＋）中,并在ＢＬ２１（ＤＥ３）大肠杆菌表达。结果 经测序,ＨｓｐＡ－ＵｒｅＢ（ＨＵ）事例基因片段由２０６１ｂｐ组成,为编码６８７个氨基酸残基的多肽。ＳＤＳ－     

BMP-4cDNA的克隆表达及活性的初步测定

目的：利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白－4（BMP－4），方法：应用RT－PCR技术，从成熟人的胎盘组织中扩增出长0．34Kb编码入骨形态发生蛋白－4成熟肽的基因序列，经测序证实后，装入表达载体pET-22b，诱导表达后SDS－PAGE显示在14kd处有一明显的表达条带，经初步鉴定，证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中，部分以包涵体的形式存在于沉淀中，将沉淀中的包涵体蛋白纯化，变性和复性处理，和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后，植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性。结论：第14d和21d，组织切片可见骨细胞和骨基质的形成，结论：大肠杆菌表达的BMP－4的经复性处理后具有诱骨活性。     

BMP-4cDNA的克隆表达及活性的初步测定

目的利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白-4(BMP-4). 方法应用RT-PCR技术,从成熟人的胎盘组织中扩增出长0.34Kb编码人骨形态发生蛋白-4成熟肽的基因序列,经测序证实后,装入表达载体pET-22b,诱导表达后SDS-PAGE显示在14kd处有一明显的表达条带.经初步鉴定,证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中,部分以包涵体的形式存在于沉淀中.将沉淀中的包涵体蛋白纯化、变性和复性处理,和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后,植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性. 结果第14d和21d,组织切片可见骨细胞和骨基质的形成. 结论大肠杆菌表达的BMP-4经复性处理后具有诱骨活性.     

抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达

制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 41kD ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。表明融合蛋白能特异性地与生物素结合 ,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在 41kD处可见表达条带。说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合。     

日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区cDNA核酸疫苗的研究

目的　为研究血吸虫性别特异性表达基因的核酸免疫特性。方法　本研究将所克隆的编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因保守区cDNA片段克隆到真核表达载体 pcDNA3中 ,得到的重组质粒直接免疫昆明系小鼠 ,感染血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小鼠冲虫 ,进行成虫和虫卵计数。结果　其减虫率为 32 4 % ,肝脏减卵率为 4 6 9% ,与对照组比较差异显著。结论　初步显示血吸虫抱雌沟蛋白基因DNA疫苗具有一定的核酸免疫保护功能     

CEA微型抗体载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

目的制备适合放免显像的抗癌胚抗原微型抗体。　方法在已获得的抗癌胚抗原重链可变区 (VH)及轻链可变区 (VL)基因的基础上将重链可变区 (VH)与轻链可变区 (VL)基因直接连接制成微型抗体基因 ,并在大肠杆菌进行表达。　结果大肠杆菌高效表达了微型抗体C端 6×His的融合蛋白 ,表达量达菌体总蛋白的 15 % ,SDS -PAGE和Western印迹显示表达物分子量为 2 6kd与基因编码蛋白的理论推算值相符 ,RIA表明表达物与CEA特异性结合。结论大肠杆菌表达是制备抗癌胚抗原微型抗体的有效途径     

抗癌胚抗原微型抗体基因在昆虫细胞中的表达

目的获得生物活性更高的癌胚抗原(CEA)微型抗体用于放免显像。方法将抗癌胚抗原微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,经大肠杆菌DH10Bac体内转座,产生重组杆状病毒BacHT-VH-L,将其转染粉纹夜蛾(Tn-5B1-4)细胞,经扩增后在细胞内进行表达。结果SDS-PAGE分析结果表明,在Tn-5B1-4细胞中表达产生一条特异性蛋白质,其分子量为26kd左右;以Westem blot分析表明,该特异条带即为VH-L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH-L蛋白能特异性的结合CEA,较大肠杆菌表达物活性更高。结论昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。