黄芪提取物对大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用

目的:观察黄芪提取物对大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用,并分析其可能作用机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎造模方法成功复制大鼠心肌梗死模型后,随机将大鼠分为模型组、黄芪提取物低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1·d^-1),另设假手术组,各组大鼠数量均为8只。黄芪提取物各治疗组给予上述对应的各药物剂量ig给药,模型组及假手术组大鼠ig给予20 mL·kg^-1·d^-1的生理盐水,连续饲养4周后采用苏木精-伊红(HE)染色,Masson染色,电镜法分析心肌梗死大鼠左心室心肌组织和血管病理学变化,免疫组化染色分析心肌组织中血管内皮生长因子(VEGF)及CD34蛋白的表达变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织结构紊乱,心肌细胞坏死严重,完整的微血管数量明显减少(P<0.05),胶原含量显著增加(P<0.01),内皮细胞缺失明显(P<0.05)。与模型组比较,黄芪提取物各组大鼠心肌组织结构相对规整,胶原含量明显下降(P<0.05),新生的血管数量明显增多(P<0.05),内皮细胞形态相对完整,数量也明显增多(P<0.05),VEGF及CD34蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:黄芪提取物可明显改善大鼠心肌梗死后心肌组织的紊乱状态,促进受损心肌组织中新生血管数量的增加。     

黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化检测

目的研究黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化状态,探讨其作为肝细胞肝癌(HCC)肿瘤标志物的可行性。方法利用重亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析HCC细胞株HepG2和健康对照者来源白细胞基因组中MAGE-A3基因5′端CpG岛异常甲基化状态,寻找HCC细胞MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点。结果 HepG2细胞和健康对照者来源白细胞基因组MAGE-A3 5′端CpG岛存在不同的甲基化状态,前者存在特异性去甲基化位点。结论 MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点的检测可用于HCC的早期诊断。     

蛋白激酶D1促血管新生的体内外实验分析

 目的: 探讨蛋白激酶D1(PKD1)促血管新生的作用,为心肌梗死等缺血性疾病以PKD1为治疗靶点提供新的思路。方法: 体外培养、分离和鉴定内皮祖细胞(EPCs),观察PKD1及其特异性阻断剂CID755673对EPCs中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR表达的影响。复制大鼠心肌梗死模型,分析PKD1及CID755673干预对大鼠心肌梗死后受损心肌组织病理形态学、微血管和内皮细胞变化以及VEGF、KDR表达的影响。结果: EPCs体外细胞培养实验表明,PKD1可明显上调EPCs中VEGF和KDR的表达水平。大鼠心肌梗死动物实验结果表明,PKD1干预后的大鼠心肌组织排列较为有序,结构较为清晰,内皮细胞胞膜光滑、完整,周细胞可见,心肌组织中的VEGF和KDR表达水平显著上调。结论: PKD1有明显的促血管新生作用,该作用可能是通过VEGF介导而实现的。     

温阳化浊通络方含药血清对硬皮病成纤维细胞 胶原分泌和TGF-β1表达的影响

目的:运用血清药理学方法,探讨温阳化浊通络方对系统性硬皮病(SSc)皮肤成纤维细胞胶原分泌和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法:对SSc患者分别采用强的松(每日20 mg)和青霉胺(每日0.25 g)(西药组),温阳化浊通络方每日1剂,分早晚2次服用(中药组),西药加中药(中西药结合组)治疗1个月后,制备含药血清,加入皮肤成纤维细胞培养体系中。培养72 h后,采用比色法和ELISA法分别测定成纤维细胞培养基中羟脯氨酸(Hyp)和TGF-β1含量。结果:与对照组相比,浓度为5%,10%,20%的西药组、中药组、中西药结合组含药血清均能明显抑制正常人和SSc皮肤成纤维细胞胶原分泌(P<0.05或P<0.01);与西药组相比,中西药结合组抑制作用更加明显(P<0.01)。浓度为5%,10%,20%的西药组、中药组、中西药结合组含药血清能显著抑制SSc皮肤成纤维细胞TGF-β1的表达(P<0.01),且中西药结合组比西药组的抑制作用更强(P<0.01)。同时,对照组SSc皮肤成纤维细胞培养基中胶原含量与TGF-β1呈直线正相关性(r=0.895,P<0.05)。结论:温阳化浊通络方能有效减少体外培养的SSc皮肤成纤维细胞胶原和TGF-β1的分泌,可能是其治疗SSc的药理作用机制之一。     

更郁方对更年期抑郁症大鼠甘丙肽及性激素含量的影响

目的:研究更郁方对更年期抑郁症模型大鼠区甘丙肽及性激素含量的影响,探讨其作用机制。方法:从80只4月龄雌性大鼠中随机选12只为空白对照组,其他进行造模,选择60只去势完全的小鼠随机分为5组,分别为模型对照组、更郁方组(10g/kg、5g/kg、2.5g/kg)、盐酸氟西汀组各12只。各组大鼠均灌胃给药,剂量为10ml/kg。更郁方组高、中、低剂量分别给混合水提浓度10g/kg、5g/kg、2.5g/kg;盐酸氟西汀组,按0.002g/kg每天剂量标准;模型组和空白组给予同体积的蒸馏水。于造模后第5天给予相应药物,各组均每天2次,连续21d。采用放射免疫法测定血浆、下丘脑、海马区甘丙肽、血清雌二醇(E2)、卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)含量。结果:更郁方(10g/kg、5g/kg、2.5g/kg)、盐酸氟西汀均可明显提高抑郁症大鼠24h的糖水摄入量及水平-垂直运动积分;更郁方(10g/kg、5g/kg)与盐酸氟西汀均可显著升高模型大鼠的血浆、下丘脑、海马区甘丙肽的含量,上调血清E2含量,下调FSH、LH含量(P0.01);更郁方10g/kg作用更加显著,更郁方2.5g/kg则无明显作用。结论:更郁方(10g/kg、5g/kg、2.5g/kg)可显著提高抑郁症大鼠24h的糖水摄入量、水平-垂直运动积分,更郁方(10g/kg、5g/kg)升高大鼠的血浆、下丘脑、海马区甘丙肽的含量,上调模型大鼠的血清E2含量,下调FSH、LH含量,推测可能是通过调节血浆、下丘脑、海马区甘丙肽的含量进而影响性激素的分泌。     

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病患者NF-κB、MCP-1及IL-6的影响

目的:观察益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)患者血清核因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白介素-6(IL-6)的影响。方法:选取2013年9月—2014年12月南阳理工学院附属医院、邓州市第二人民医院收治的DKD患者70例,按照随机数字表法分成对照组和治疗组,每组35例。治疗组因治疗上有变动等退出2例。对照组给予糖尿病饮食、运动、降血糖等常规对症治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加服益气养阴化浊通络方治疗。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组患者治疗前后血清NF-κB、MCP-1和IL-6水平,同时观察CRP、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、24 h尿蛋白、尿微量白蛋白排泄率(UAER)的变化情况。结果:治疗组有效率93.94%,对照组有效率74.29%,治疗组优于对照组(P0.05);两组治疗后Hb A1c、24 h尿蛋白、UAER、CRP、NF-κB、MCP-1和IL-6水平均较治疗前明显降低(P0.05或P0.01),且治疗组治疗后24 h尿蛋白、UAER、CRP、NF-κB、MCP-1和IL-6水平优于对照组(P0.05或P0.01);早期DKD患者NF-κB、MCP-1、IL-6、CRP水平与UAER呈正相关性(P0.05或P0.01)。结论:益气养阴化浊通络方能够减轻早期糖尿病肾病患者炎症反应,减少蛋白尿,延缓病情进展。     

黄芪提取物对大鼠心肌梗死后心肌组织PKD1蛋白表达的影响

目的探讨黄芪提取物对大鼠心肌梗死后心肌组织蛋白激酶D1(PKD1)蛋白表达的影响。方法成功构建大鼠心肌梗死模型后,随机分为模型组、黄芪提取物3个不同剂量组,每组8只大鼠,另设假手术组8只。术后48 h,黄芪提取物组分别给予低、中、高10,20,40 mg.(kg.d)-1灌胃;模型组和假手术组给予生理盐水20 ml.(kg.d)-1灌胃。8周后测定大鼠的血流动力学变化;应用HE染色分析左心室心肌细胞组织形态学变化;采用Masson染色法检测左心室心肌胶原纤维变化;应用免疫组化法和免疫印迹法分析左心室心肌组织PKD1蛋白的表达情况。结果血流动力学检测结果表明,和模型组相比,假手术组、各治疗组心脏左室收缩压(LVSP)、左室内压曲线最大上升和下降速率(±dp/dt)均明显升高(P<0.05),左室舒张末压(LVEDP)均明显降低(P<0.05)。HE染色分析,模型组大鼠心肌细胞坏死严重,成纤维细胞增生明显,伴有炎症细胞浸润;黄芪提取物低、中剂量组大鼠心肌细胞淡染,界限欠清晰,部分细胞核肥大,伴有成纤维细胞增生和少量炎症细胞浸润;高剂量组大鼠心肌细胞形态较清晰,成纤维细胞和炎症细胞少见。Masson染色表明,模型组大鼠心肌以胶原组织为主,各治疗组大鼠以红色心肌组织为主,间杂以胶原组织。免疫组化和免疫印迹分析表明,模型组大鼠心肌组织胞质中PKD1蛋白的表达明显;和模型组相比,各治疗组大鼠心肌细胞胞质中PKD1蛋白的表达明显下调(P<0.05),但仍清晰可见。结论黄芪提取物可明显改善大鼠心肌梗死后异常的血液流变学指标、组织病变及胶原纤维构成比例,其作用机制可能与下调心肌组织PKD1蛋白的表达相关。     

基于网络药理学和生物信息学模式预测白花蛇舌草抗非小细胞肺癌关键靶点和分子机制

目的应用网络药理学和生物信息学方法预测白花蛇舌草抗非小细胞肺癌(NSCLC)的关键靶点,并探讨其可能的分子机制。方法通过TCMSP数据库检索白花蛇舌草活性成分和靶点,利用GeneCards、DigSee和DisGeNET数据库获取NSCLC靶点并与药物靶点映射,使用Cytoscape软件构建"白花蛇舌草-活性成分-靶点-非小细胞肺癌"网络;采用String数据库和Cytoscape构建靶标蛋白互作(PPI)网络,筛选关键靶点,运用R软件对靶标基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,利用ClueGO+CluePedia插件分析关键靶点和信号通路的关联。结果获取到白花蛇舌草中槲皮素和β-谷甾醇等4个抗NSCLC活性成分、63个潜在靶标和5个关键靶点MYC、AKT1、EGFR、CASP3及CCND1;GO富集主要涉及细胞增殖与凋亡调节、抑制肿瘤转移和侵袭、物质代谢和基因表达等多个生物学过程与功能;KEGG通路富集主要涉及多种癌症通路、蛋白多糖、AGE-RAGE信号通路、microRNAs、人巨细胞病毒(HCMV)感染、PI3K-AKT信号通路和MAPK信号通路等。关键靶点与APAF1、CDK4/6、AKT2和TRIB3等在相关信号通路存在关联。结论本研究初步预测和揭示了白花蛇舌草抗NSCLC的关键靶点和可能的作用机制,体现了中药多组分、多靶点、多途径交互协作的特点,为白花蛇舌草抗肿瘤研究及临床应用奠定了基础。