鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1基因克隆与表达分析

目的 克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1（DXS1）基因并分析其表达差异。方法 根据已经获得的鱼腥草DXS1转录本序列设计1对引物,采用RT-PCR方法获得DXS1基因cDNA序列并对DXS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了DXS1基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果 克隆获得的DXS1基因长为2 172 bp,编码723个氨基酸。生物信息学预测DXS1蛋白不含跨膜区,不含信号肽,具有定位肽。DXS1基因在鱼腥草的花中表达丰度最高,其次是叶片,再次是地下茎,地上茎中表达量最低。结论 首次从鱼腥草中克隆了DXS1基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。     

羊耳菊水提取物体外抑菌活性研究

目的 探讨羊耳菊不同器官水提取物的体外抑菌活性.方法 以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌等10种微生物为试验菌株,采用药敏纸片扩散法、试管二倍稀释法,对羊耳菊水提取物进行抑菌试验.结果 羊耳菊全株各器官都具有较强的抑菌作用,其中根对10种供试菌种都有抑制作用,抑制范围最广;茎对9种供试菌种有抑制作用,叶对8种供试菌种有抑制作用.羊耳菊各器官对金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌的抑制作用最强.羊耳菊根、茎、叶对金黄色葡萄球菌的MIC值分别为15.63,62.5,62.5 mg/ml,而其抑菌圈直径分别为14.3,13.8,13.5 mm;羊耳菊根,茎,叶对铜绿假单胞菌的MIC值分别为15.63,31.25,62.5 mg/ml,其抑菌圈直径分别为15.8,15.5,14.0 mm.结论 羊耳菊水提取物体外试验证实了该民间药物具有抗菌活性,也表明了羊耳菊是一种有开发潜力的新抗菌药物资源.     

18种抗炎症中草药的抑菌作用研究

目的观察部分中草药的抑菌作用。方法通过对湖南新化民间中医药资源进行深入调查，采集并选用了18种具有消炎、抗菌、杀毒作用的中草药，进行抑菌实验。通过药敏纸片法初步筛选出5种对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、粪肠球菌及鸡沙门氏杆菌有较强抑菌效果的中草药。通过试管二倍稀释法测定5种中草药的MIC值（最低抑菌浓度），筛选出香薷、千里光2种押菌效果最强的中草药。研究了在不同pH值条件下2种中草药提取物抑菌效果以及用MIC、2MIC、4MIC浓度作用不同时间的抑菌效果。结果千里光在pH值为8—9的范围内，抑菌效果最好，香薷在pH值为7—9的范围内，抑菌的效果最好；中草药的抑菌效果与作用时间呈正相关。     

鱼腥草转录组SSR位点信息分析及其多态性研究

目的分析鱼腥草Houttuynia cordata转录组中的SSR位点信息,并设计简单重复序列(SSR)引物,以期为鱼腥草分子标记辅助育种提供有力工具。方法利用MISA工具筛选了鱼腥草转录组测序获得的63 954条unigenes,对其SSR位点信息进行了分析;在此基础上利用Primer 3设计SSR引物,并随机选择50对SSR引物对16株不同来源的鱼腥草进行多态性扩增分析。结果在鱼腥草的转录组中,共搜索到4 800个SSRs,分布于4 413条unigenes,SSR位点出现频率为7.51%。SSRs位点中三核苷酸重复是主要类型,占总SSRs的41.54%;其次是单核苷酸重复基序(占27.35%)。SSRs所包含的重复基元中,单核苷酸重复基元A/T是优势重复基元类型,占总SSRs的27.0%。利用Primer3共设计出3 068对SSR引物。随机选择50对引物进行PCR扩增,其中43对(86.0%)扩增出清晰、可重复的条带,且表现出多态性。利用UPGMA作图,将16个样品分为2类。结论鱼腥草转录组中SSR位点出现频率高,类型丰富;大量的SSR为其遗传多样性分析和遗传图谱构建奠定基础。     

跟骨骨折切开复位刀口迟愈原因与对策

目的分析闭合性跟骨骨折外侧入路术后出现刀口迟愈甚至坏死的原因,归纳总结,并简述防治体会。方法回顾56例闭合性跟骨骨折患者,骨折线累及跟距或跟骰关节,采用外侧改良型"L"切口,术后放置引流管24-48小时,1-2天换药一次,术后2-3周拆线,对于术后皮缘红肿,有炎性渗出,甚至坏死者,加强护理并及时对症治疗,直至切口愈合。结果 39例患者切口正常愈合,2周拆线;9例患者因术后肿胀及渗出延迟2-3天愈合、拆线;5例出现炎性渗出、化脓,延迟3-5天愈合;3例患者出现切口拐角处干性坏死,坏死长度1.5cm,宽1cm,经换药逐步清除坏死痂皮,均于1月内愈合、拆线。结论受伤严重程度、局部解剖特点、围手术期准备、手术操作方法、术后处理等对闭合性跟骨骨折术后皮肤愈合不良关系密切。     

抑菌实验优选鱼腥草生物检定法的提取方法和菌株

目的 为鱼腥草的生物检定法研究提供合适的提取方法和菌株.方法 鱼腥草提取液用正交实验提取,采用体外抑菌实验,用二倍稀释法,观察鱼腥草提取液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、产气肠杆菌的抑菌作用.结果 鱼腥草生物检定法的最佳提取方法为:用40%的乙醇,80℃提取二次,第一次加10倍量溶剂,提取80min,第二次加8倍量溶剂,提取60min;枯草芽孢杆菌作为鱼腥草的生物检定法研究的标准菌株较为适宜.结论 优选出的提取方法和标准菌株科学合理.     

鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因克隆与差异表达

目的 克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因,并分析其差异表达.方法 采用RT-PCR方法获得DXR基因cDNA序列,并对DXR蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了DXR基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况.结果 克隆获得的DXR基因长为1 416 bp,编码471个氨基酸.生物信息学预测DXR蛋白不含跨膜区,不含信号肽.DXR基因在鱼腥草的叶片中表达丰度最高,其次是地下茎,再次是地上茎,花中表达量最低.结论 首次从鱼腥草中克隆了DXR基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础.     

翻白草提取物的抑菌作用研究

方法:选用不同的提取溶剂提取翻白草的活性成分;运用二倍稀释法,以大肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、八叠球菌为供试菌种,对翻白草的不同药用部位抑菌作用进行了抑菌试验。结果:翻白草不同药用部分的抑菌作用存在差异,其带根全草抑菌作用最强,地上部分次之,根部的抑菌作用最小;不同提取液的抑菌效果存在差异,70%乙醇提取液的抑菌作用最强;对金黄色葡萄球菌和八叠球菌等革兰氏阳性菌的抑菌效果好于革兰氏阴性菌。     

苍耳与灰白毛莓的体外抑菌作用对比研究

目的比较苍耳和灰白毛莓的体外抑菌作用以及二者配伍制剂的抑菌效果。方法采用滤纸片法测定抑菌圈直径,二倍稀释法测定最低抑菌浓度。结果灰白毛莓的抑菌范围较苍耳广,且灰白毛莓全株对金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏菌的抑制作用较苍耳强,苍耳的茎叶对铜绿假单胞菌的抑制作用较灰白毛莓强。结论灰白毛莓的抑菌范围比苍耳的抑菌范围更广,二者的配伍制剂有协同作用。     

鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶基因克隆、表达及生物信息学分析

目的通过克隆鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)基因c DNA全长,并展开生物信息学分析和表达分析,为解析鱼腥草萜类次生代谢产物的生物合成机制奠定基础。方法采用RT-PCR方法获得AACT基因c DNA序列并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR方法检测了AACT基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的AACT基因c DNA全长为1 218 bp,编码405个氨基酸。生物信息学预测AACT蛋白不含跨膜区,不含信号肽。AACT基因在鱼腥草地上茎中的表达量最高,达到1.49,其次是地下茎0.96,花和叶中的表达量相对较低,分别为0.20和0.10。结论首次从鱼腥草中克隆了AACT基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。