p53表达在石英诱导的细胞周期改变及DNA损伤修复中的作用

目的 探讨p53表达在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变及DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DSBs)修复中的作用.方法 3种方式分组处理细胞:(1)不同浓度(0、25、50、100、200、300、400μg/ml)的石英刺激HELF细胞12 h;(2)200 μg/ml石英刺激HELF细胞O、1、2,6、12、24 h;(3)200μg/ml石英刺激H-CMV和H-p53细胞O、12、24 h.用中性彗星试验检测石英所致的DSBs损伤强度,并计算DNA修复能力(DNA repair compentence,DRC),用免疫印迹法检测蛋白表达和磷酸化水平,用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 (1)200μg/ml的石英作用HELF细胞不同时间,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平随着作用时间的延长逐渐升高,12 h达峰值,24 h较12 h略有降低;不同浓度的石英作用HELF细胞12 h,随着石英浓度的增加,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平逐渐增强,呈现剂量-反应关系.(2)石英作用于p53 siRNA的阴性对照细胞H-CMV,DRC为57.19%:石英作用沉默p53表达的H-p53细胞后,DSBs的修复能力增强,DRC为87.68%.(3)石英作用p53siRNA的阴性对照细胞24 h后,S期细胞比例由(24.3±3.8)%增加到(31.8±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);沉默p53表达后,石英诱导的HELF细胞S期细胞比例[(41.4±0.6)%]与同期对照组[(25.4±1.9)%]相比有明显增加.差异有统计学意义(P<0.05).结论 石英可诱导p53表达及磷酸化水平的增加,p53表达上调可抑制石英所致S期细胞百分比的增加及石英所致DNA双链断裂的修复.     

过量氟对大鼠体内、外I型胶原蛋白的影响

为研究过量氟对大鼠骨中I型胶原蛋白的影响 ,经饮水投氟复制大鼠氟中毒模型 (NaF 2 2 1mg L) ,测定氟中毒大鼠血清中骨钙素含量 ,骨中无机质、胶原含量和胶原交联度 ;酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞 ,经 0 5mmol L和 1 0mmol LNaF染毒 4 8h后 ,用免疫组化方法观察过量氟对成骨细胞I型胶原表达水平的影响。结果表明 :大鼠染毒两个月后 ,氟中毒大鼠血清骨钙素含量、骨中无机质百分含量较对照组显著增加 (P<0 0 5 ) ;骨中胶原含量、胶原交联度较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ;体外成骨细胞染氟后 ,I型胶原蛋白分泌明显减少。提示过量氟可抑制I型胶原蛋白的合成 ;胶原蛋白减少是导致氟骨症的原因之一     

石英和石棉的致癌、致纤维化及其机制研究

石英和石棉是两种危害严重的粉尘，均可导致肺纤维化，又均具有致癌性。石棉是国际癌症研究机构（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡｇｅｎｃｙｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＣａｎｃｅｒ，ＩＡＲＣ）早已确定的人类致癌物。石英近年被ＩＡＲＣ宣布由动物致癌物升级为人类致癌物...     

石英所致ROS的产生及核转录因子活化

石英粉尘能引起肺纤维化和肺癌，近年其机制研究进展较快。本文将从活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)、核转录因子以及细胞因子的角度综述石英所致疾病的发病机制。石英粉尘进入机体后，可释放ROS，也可刺激机体产生ROS，包括硅氧自由基和羟自由基等。ROS能激活核转录因子NF-kB和AP-1。核转录因子活化后，可进而导致多种细胞因子高表达。研究表明，核转录因子和细胞因子在环氧化酶Ⅱ(coxⅡ)和肿瘤坏死因α(TNF-α)的产生、细胞无限增生和肿瘤形成过程中都起着非常重要的作用。     

矽肺及其治疗后胶原基因表达改变的研究

矽肺及其治疗后胶原基因表达改变的研究刘秉慈，尤宝莱，何玉先，缪庆，王海华，李玉瑞中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所（北京ｌ０００５０）在矽肺纤维化过程中，肺组织中胶原纤维大量沉积，胶原类型的正常比例亦发生改变。我们使用α１（Ⅰ）、α２（Ⅰ）、及...     

石棉及矽尘相关肺癌p53基因突变与肿瘤病理学分类

石棉是国际公认的致癌物“’，但其诱导肺上皮细胞转化的机制尚不清楚，矽上与肺癌的关系目前尚有争议‘’·‘’，有大量流行病学研究数据支持矽尘与肺癌相关的假说，但对石棉、矽尘相关肺癌的基因变突研究较少。p53基因是目前肿瘤研究中较为深人的基因之一。本文收集了长期保存的矽尘和石棉作业工人肺癌组织蜡块，采用免疫组化和PCR一SSCP对其P53蛋白及P53基因的第5、7、8外显子突变情况进行了分析。1材料和方法1．1样本收集了10例石棉相关肺癌和36例矽尘相关肺癌病例的石蜡包埋组织块。经病理学检验确定，均为原发性肺癌，患者生前均…     

药物治疗矽肺血清Ⅰ型胶原水平的变化

报道了汉防己甲素（汉甲）、克矽平、抗矽一号（即磷酸羟基喹哌）和柠檬酸铝（柠铝）及其联合用药对矽肺大鼠和矽肺病人血清中Ⅰ型胶原含量的变化。在动物实验中，汉甲及克矽平对胶原代谢的作用较强且效果稳定。抗矽一号及柠铝对染尘时血清胶原含量上升也有抑制作用，但停药后有回升。临床观察也显示汉甲和抗矽一号联合用药可抑制矽肺进程中血清Ⅰ型胶原含量的升高     

克矽平对矽肺大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平的影响

克矽平（Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ－Ｎ－ｏｘｉｄｅ，ＰＶＮＯ）是一种较为有效的抗矽肺药物。作者采用编码人Ⅰ、Ⅲ型胶原α１（Ⅰ）及α１（Ⅲ）链的ｃＤＮＡ探针，使用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ斑点杂交技术，观察了染尘２个月、４个月及经克矽平治疗１、３个月的矽肺大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ水平的改变情况。实验结果表明：大鼠染尘后２、４个月，肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ水平较正常鼠肺组织有明显上升（Ｐ＜０．０５），经克矽平治疗后，Ⅰ、Ⅲ型胶原的ｍＲＮＡ水平显著下降。提示：克矽平对矽肺进程中胶原基因表达的增强有抑制作用。     

石棉相关肿瘤p53基因突变的免疫组化及PCR—SSCP研究

为了分析石棉相关肿瘤ｐ５３基因的突变特点，对石蜡包埋的石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变体蛋白的表达进行了免疫组化观察，提取染色体ＤＮＡ，对ｐ５３基因的第５、７、８外显子进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及测序分析。免疫组化观察发现：在分析的１０例病例中有５例阳性。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发现７例（８处）发生突变，其中４处集中在第８外显子上。５例腺癌中有４例发生ｐ５３基因突变。测序发现热点区突变。提示：石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变率高。