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1.
超氧化歧化酶(SOD)是国际公认的自由基清除剂,它在防氧毒性、抗辐射损伤、治疗自身免疫性疾病、防治各种炎性反应等方面都具有重要的作用.  相似文献   
2.
目的 PTD-SOD是含有PTD和SOD的融合蛋白,前人的研究表明它能跨膜进入细胞,具有比SOD更高的生物利用率.但至今为止的表达都是在大肠杆菌中完成的,得到的是没有活性的包涵体.本文将人工合成的PTD-SOD全基因插入含有AOX1基因启动子和分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPICZα中,重组载体转化进入毕赤酵母.结果 表明,经甲醇诱导,配合蛋白PTD-SOD成功得到分泌表达,表达量随诱导时间的延长而递增,诱导8d后活力达到最高,值为301.48U·mL-1.由于本文构建的毕赤酵母表达系统表达的PTD-SOD是有活性的分泌蛋白,这就为下游的工艺操作带来了极大的便利,为PTD-SOD的理化研究和工业化生产提供了物质基础.  相似文献   
3.
类风湿性关节炎是一种常见的致残性疾病之一,病因未明。研究此类疾病的有效方法是建立、研究并应用动物模型。通过对目前国内外类风湿性关节炎模型复制方法、机制和应用的研究,分析各自的特点及不足之处,提出复制更加符合类风湿性关节炎临床特点的动物模型的展望与设想。  相似文献   
4.
目的:对含PTD-SOD重组质粒的工程菌进行诱导表达。方法:通过SOD活性和SDS-PAGE电泳分析,考察了诱导时间和诱导剂浓度对PTD-SOD表达量的影响。同时考察了诱导温度对产物表达形式的影响。结果:表达条件为IPTG浓度0.5mM,诱导时间4h,诱导温度20℃。结论:在上述条件下重组SOD在摇瓶中的表达效果最好。  相似文献   
5.
目的 探讨氧化应激在机械性创伤愈合发展中的地位、作用和抗氧化剂PTD-SOD对创伤愈合的影响.方法 制备机械性创伤小鼠模型和不同浓度的PTD-SOD(1 000 U、3 000 U、6 000 U、10 000 U)和SOD(3 000 U、6 000 U)溶液,分别用上述溶液进行治疗,同时设立模型对照组、等渗盐水对照组和复方碘液对照组,各组均连续治疗13天.观察各组创伤愈合情况,记录创伤收缩率和愈合天数;于创伤后第14天取各组小鼠创伤愈合部位皮肤,一部分制成10%组织匀浆液用于检测抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量,一部分制成病理组织切片用于皮肤组织学观察.结果 (1)与模型对照组、等渗盐水对照组及复方碘液对照组相比,同时相点PTD-SOD各组(10 000 U组除外)和SOD各组的抗氧化酶活性和Hyp含量显著升高(P<0.05或0.01),MDA含量显著降低(P<0.05或0.01),创伤收缩率提高(P<0.05或0.01),创伤愈合时间缩短(P<0.05或0.01).(2)在同等剂量下,从促创伤愈合时间、抗氧化酶活性、MDA含量、Hyp含量等方面比较,伤后同时相点PTD-SOD组明显优于SOD组(P<0.05或0.01).(3)10 000 U PTD-SOD组创伤愈合效果明显不如其他剂量PTD-SOD组(P<0.05或0.01).结论 在创伤愈合的早期特别是炎症期,应考虑氧化应激的存在,抗氧化治疗是一个治疗策略,适时、适当的抗氧化治疗,可以抑制氧化应激态,缩短创面愈合时间,提高创面愈合质量.适当剂量的PTD-SOD在皮肤创伤治疗中具有很好的抗氧化应激损伤、抑制炎症和促进愈合的效果.
Abstract:
Objective To study the role of the oxidative stress in the development of wound healing and observe the effect of the antioxidant PTD-SOD on damage and inflammation reaction after mechanical wound. Methods In this experiment,acute wound healing model by removal the whole layer dorsal skin of the mice was prepared,SOD(3 000 U and 6 000 U)and the fusion protein PTD-SOD with different concentrations(1 000 U,3 000 U,6 000 U and 10 000 U)were used to deal with the wounds continuously for 13 days.The mice were divided into different concentration SOD treatment group and PTD-SOD treatment group,model control group,physiological saline treatment group and compound iodine solution control group.The wound healing situation and healing percentage of the fight and left skin wounds of each mouse in every group was recorded every day.At day 14 after wound,the wound healing skin of each group was removed and some were used to make 10%tissues homogenate for detecting the activities of superoxide dismutase(SOD),catalase(CAT),glutathione peroxidase(GSH-Px)and contents of malondialdehyde(MDA)and hydroxyproline(Hyp);in the meantime,the other removed skin were fixed in 10% formalin for observing the histopathological changes of the tissues. Results Compared with the model control group,the physiological saline treatment group and the compound iodine solution control group,the skin wound healing percentage was significantly(P<0.05 or P<0.01)improved,with increase of the activities of SOD,CAT,GSH-Px and contents of Hyp (P<0.05 or P<0.01)and decrease of MDA(P<0.05 or P<0.01) in the SOD groups or PTD-SOD groups (except for 10 000 U PTD-SOD group).When compared with the physiological saline treatment group or the compound iodine solution treatment group,the effect was similar to the model control group.In comparison to the SOD groups,under the same dosage and environment condition,the PTD-SOD groups were much better than SOD groups with regard to promoting skin wound healing percentage,increasing activities of antioxidases and contents of Hyp,decreasing contents of MDA.Among the PTD-SOD groups,the effect of high dosage 10 000 U on promoting skin wound healing was declined. Conclusions The oxidative stress may playan important role in the development of wound healing.Proper application of treatment with antioxidants is a alternative strategy in the early stage of wound.PTD-SOD is able to prevent the oxidative stress damage,inhibit inflammatory infiltration and promote skin wound healing efficiently.  相似文献   
6.
目的 探讨跨膜递送短肽--TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用.方法 以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这两种含TAT的融合蛋白及作为对照的融合蛋白GST-GFP,一定时间作用后取体内器官和皮肤做冷冻切片,荧光显微镜检测这些融合蛋白的跨膜递送情况;并对分别融合在C端或者N端的TAT介导GFP在活体动物体内和皮肤的跨膜递送作用进行对比.结果 腹腔注射实验结果表明,TAT可以介导不经过蛋白质的变性处理的融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT跨膜递送进入到小鼠的心脏、肝、肾、脾和肺,甚至脑组织;其中GST-GFP-TAT跨膜递送效率比GST-TAT-GFP更高.结构模拟分析提示GST-GFP-TAT与GST-TAT-GFP中的TAT的暴露情况不同可能是造成两种蛋白跨膜递送活性差异的重要因素.皮肤实验的结果则表明TAT不仅介导融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT进入小鼠表皮,而且使其进入小鼠皮肤的真皮层.结论 TAT可以跨膜递送不经过变性处理的融合蛋白进入小鼠皮肤和体内,递送效率可能与TAT的暴露程度相关;这些结果为在蛋白质疗法方面应用TAT提供了进一步的理论依据.  相似文献   
7.
目的 探讨局部应用PTD-SOD、SOD对小鼠皮肤创伤的抗氧化应激损伤保护效果及其差异.方法 制备机械性创伤小鼠模型和不同浓度的PTD-SOD(1000、3000、6000 U)及SOD(1000、3000、6000 U)溶液,分别用上述溶液进行治疗,同时设立模型对照组和生理盐水对照组,各组均连续治疗13 d.观察各组创伤愈合情况,记录创伤愈合率和愈合天数;于创伤后第14天取各组小鼠创伤愈合部位皮肤,一部分制成10%组织匀浆液用于检测抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量,一部分制成病理组织切片用于皮肤组织学观察.结果 ①与模型对照组相比,PTD-SOD各组或SOD各组的抗氧化酶活性和Hyp含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,MDA含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高创伤愈合率、缩短创伤愈合时间;与生理盐水对照组相比,结果类似.②在同等剂量下,从促创伤愈合时间、抗氧化酶活性、MDA含量、Hyp含量等方面比较,PTD-SOD组明显(P<0.05)或极明显(P<0.01)优于SOD组.③适当剂量的PTD-SOD促创伤愈合效果优于高剂量PTD-SOD的促创伤愈合效果.结论 PTD-SOD或SOD在皮肤创伤治疗中具有良好的抗氧化应激损伤效果,这种保护效果在创伤愈合的早期最显著;同等剂量下,PTD-SOD在促创伤愈合的效果上明显优于SOD.  相似文献   
8.
鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用   总被引:11,自引:1,他引:11  
目的 :观察鹿茸粗提液 (PAE)对大鼠成骨肉瘤细胞系UMR 10 6增殖的影响 ,从而为研究鹿茸强筋健骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据。方法 :通过SephacrylS 200HR凝胶过滤色谱对PAE进行初级分离 ,用MTT法检测不同分离组分对UMR 106细胞增殖的影响。结果 :发现SephacrylS 200HR凝胶过滤色谱第 2峰P2次组分 ,当其蛋白质浓度高于 0 .972mg·L-1并低于 97.2mg·L-1时 ,对UMR -106细胞增殖活性的影响表现为抑制 ;若浓度达到 97.2mg·L-1后则会促进细胞的增殖 ,且增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升。当样品蛋白质浓度达到 9.72g·L-1时 ,相应的细胞增殖率为 477.92 % ,接近PAE的增殖水平 (499.62 % )。经SDS PAGE电泳分析第 2峰分子量集中于 59kDa左右。此外 ,发现第 3、第 4和第 5峰对UMR 10 6细胞增殖有显著的抑制作用。结论 :鹿茸蛋白中含有多种双向调控UMR-106细胞增殖的生物活性因子 ,既有剂量双向效应 ,也有与分子量相关的不同调控蛋白 ,这对中药的双向调节作用提供研究线索。  相似文献   
9.
GST-TAT-GFP融合蛋白的表达、纯化及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 获得融合TAT短肽的融合蛋白GST—TAT-GFP,以用于阐明TAT短肽的跨膜递送机理。方法 以质粒pGEX—GFP为模板,扩增目的基因TAT—GFP,将其克隆至质粒pGEX-2T,用所构建的质粒pGEX—TAT—GFP转化大肠杆菌BL21并诱导表达,利用GS-4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及细胞跨膜实验鉴定。结果 大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约54.3kD的蛋白,其相对分子质量与GST—TAT-GFP融合蛋白相符;Western blot显示该融合蛋白能够被抗GFP的抗体特异性识别;细胞实验表明融合TAT短肽的融合蛋白能跨膜进入细胞L-02、SMMC-7721、Hela和BEL-7402。结论 在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GST—TAT—GFP融合蛋白。  相似文献   
10.
目的:利用可实时动态测量超氧阴离子自由基的环状排列黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)构建可实时动态监测活体动物体内自由基的转基因动物模型。方法:应用转基因技术将载有可定位于线粒体内的cpYFP(mitochondria-targeted cpYFP,mito-cpYFP)的载体pRP(Exp)-CAGGmitocpYFP注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,采用PCR及RT-PCR的方法鉴定阳性小鼠,通过荧光观察自由基的分布并辅助鉴定阳性小鼠。结果:PCR、RT-PCR及荧光观察结果表明mito-cpYFP cDNA转基因小鼠构建成功。通过与野生型C57BL/6小鼠交配,得到F1、F2和F3代的新生幼鼠共计494只,其中,阳性幼鼠为255只,阳性率为51.6%。转基因阳性鼠体内出现了绿色荧光,其解剖伤口、肠道、脑部及口腔黏膜等荧光明显,而肾脏、肝脏及胸腺等荧光则较弱,耻骨联合部和膀胱出现绿色荧光,但约0.5 h后消失。结论:我们成功制备了可稳定表达并遗传mito-cpYFP的转基因小鼠品系。在活体动物体内,自由基在黏膜层含量较多。此模型可研究自由基在生物体内的含量及分布规律,为后续生物自由基作为信号分子在机体内传导途径的研究提供有效的工具。  相似文献   
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