球药隔重楼HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析

目的研究球药隔重楼次生代谢产物甾体皂苷甲羟戊酸合成途径的一个关键酶即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的基因,有助于对活性物质的合成进行调控,从而提高产量。方法比较NCBI上公布的11种植物11条HMGR基因mRNA的同源保守区域,设计简并引物,利用RT-PCR技术,以球药隔重楼新鲜茎总RNA反转录的cDNA为模板成功扩增出404 bp的保守区基因片段。结果序列分析表明,球药隔重楼HMGR基因片段与其他7种植物的一致性达到76%～81%,球药隔重楼HMGR氨基酸片段与其他植物有较高的同源性,经Genbank查询为一新的cDNA。结论通过蛋白质特征区、保守区以及进化树分析,初步确定该基因为HMGR基因,这是首次从药用植物球药隔重楼中克隆得到甲羟戊酸途径关键酶HMGR的基因片段,也是百合科植物首次获得的HMGR基因。     

球药隔重楼HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析

目的 研究球药隔重楼次生代谢产物甾体皂苷甲羟戊酸合成途径的一个关键酶即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）的基因，有助于对活性物质的合成进行调控，从而提高产量。方法 比较NCBI上公布的11种植物11条HMGR基因mRNA的同源保守区域，设计简并引物，利用RT-PCR技术，以球药隔重楼新鲜茎总RNA反转录的cDNA为模板成功扩增出404 bp的保守区基因片段。结果 序列分析表明，球药隔重楼HMGR基因片段与其他7种植物的一致性达到76%～81%，球药隔重楼HMGR氨基酸片段与其他植物有较高的同源性，经Genbank查询为一新的cDNA。结论 通过蛋白质特征区、保守区以及进化树分析，初步确定该基因为HMGR基因，这是首次从药用植物球药隔重楼中克隆得到甲羟戊酸途径关键酶HMGR的基因片段，也是百合科植物首次获得的HMGR基因。     

荧光定量RT-PCR检测重楼功能基因表达的差异

目的 检测重楼属植物功能基因表达的差异。方法 通过使用特异性引物和SYBR Green I 结合染料实时荧光定量RT-PCK技术,以管家基因18S rDNA为参照基因,采用相对定量的方法,对重楼属的3个种3部分组织的2个功能基因进行表达差异的研究。结果 两个功能基因包括HMGCoA还原酶基因和鲨烯环氧酶基因在根和茎均高表达于叶,尤以根的表达量最高。结论 成功将KT-PCR技术应用于药用植物的功能基因研究。通过对各种条件的优化探索,建立了准确和简单易行的检测药用植物的功能基因表达的平台。