TGF-β1在肝再生调控中的作用研究

目的 探讨70%肝部分切除后TGF-β1在肝再生调控中的作用.方法 MTT方法 检测TGF-β1对原代肝细胞的作用;建立70%肝部分切除(PH)模型,收集切除后2d的血清,用MTT方法 检测其对IG12细胞的促增殖作用,并用免疫细胞化学方法 观察其对IG12细胞TGFβ1表达的影响;用免疫组织化学和Western blot检测再生肝组织中TGF-β1的表达.结果 TGF-β1能抑制原代肝细胞增殖;PH后大鼠血清不仅对IG12细胞有明显的促增殖作用,还能提高IG12细胞TGF-β1的表达;免疫组化结果 显示大鼠PH后肝细胞TGF-β1表达逐渐下降,至第3天呈阴性结果 ,而后升高,直至再生结束时稳定在正常肝脏表达水平,Western blot显示PH后再生早期TGF-β1表达暂时升高,12 h达到高峰,第1天开始下降,第3天降至最低点,5d开始逐渐升高,至第7天恢复到正常水平.结论 TGF-β1明显抑制肝细胞增殖,在PH后肝再生过程中,肝组织中TGF-β1表达明显下降,有助于肝再生的完成.     

Ⅳ型胶原、MMP-9和TIMP-1基因表达在早期放射性肺纤维化启动中的作用

目的 观察早期放射性肺纤维化启动过程中Ⅳ型胶原、明胶酶B(MMP-9)、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的基因表达特点,探讨其在放射性肺损伤中的作用.方法 C57小鼠于20Gy 60Co γ射线全肺照射后照射后1、2、4周活杀,每个时间点分别配有相应的正常对照组.RT-PCR检测Ⅳ型胶原、MMP-9、TIMP-1 mRNA水平的变化,并应用图像分析仪测定电泳条带的平均光密度值.结果 Ⅳ型胶原mRNA于照射后1周开始增高(0.202),4周达高峰(0.340);MMP-9 mRNA于照射后1周即有明显增高并且达到高峰(0.730),于第2周开始降低(0.592);TIMP-1 mRNA于照射后1周开始轻度增加(0.987),4周时达高峰(2.027).结论 60Co γ射线可刺激Ⅳ型胶原、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达,但随照射后时间的延长呈现不同的变化趋势,它们之间的相互制约导致了放射性肺损伤早期的组织重建,与后来形成的肺纤维化有必然的内在联系.     

小鼠精子发生过程中雄激素受体对靶基因Septin7的表达调控

目的:探讨雄激素受体(AR)对睾丸Sertoli细胞中Septin 7基因表达的影响。方法:分别采用实时荧光定量PCR及Western blot,检测睾丸Sertoli细胞AR特异性敲除(S-AR-/y)和野生型小鼠(WT)睾丸Sertoli细胞中SEPTIN 7的表达,并观察雄激素对过表达AR的Sertoli细胞系TM4中SEPTIN 7表达的影响。结果:与WT小鼠相比,S-AR-/y中Septin 7 mRNA表达水平升高(P0.05);雄激素显著降低TM4中SEPTIN 7表达(P0.05)。结论:Septin 7可能是睾丸Sertoli细胞中AR调控的靶基因。该研究对阐明雄激素及其受体调节精子发生的分子机理具有重要意义。     

β-防御素3在人精子上的表达及功能研究

目的:探讨附睾上皮分泌的β-防御素3(HBD-3)在人精子上的表达和功能,以及是否参与弱精子症的发生。方法:采用间接免疫荧光染色和Western blot检测HBD-3在人精子的定位和表达;采用计算机辅助精子分析(CASA)检测HBD-3是否参与精子活力和前向运动能力。结果:HBD-3在弱精子症精子的表达量较正常生育组下调。精子上HBD-3表达水平与精子活力呈正相关性。抗HBD-3抗体将干扰正常精子活力,而rHBD-3可改善弱精子症精子的活力。结论:在男性生殖系统中,精子表面HBD-3参与精子活力和前向运动能力发生。本研究为男性不育症提供新型诊断靶点和治疗策略。     

巨噬细胞金属弹力蛋白酶表达在放射性肺损伤形成中的变化特点及意义

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12,又称巨噬细胞金属弹力蛋白酶)表达的动态变化,探讨MMP-12在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(不接受照射),照射后1、2、4周组,每组6只.采用60Co γ射线(20Gy)对大鼠进行全肺照射,按照实验分组分别于照射后1、2、4周行肺组织取材.实时荧光定量FCR法检测MMP-12基因表达;Western blotting分析蛋白的表达变化;酶谱分析检测其酶活性;免疫组化观察MMP-12的组织分布;组织特殊染色法观察弹力纤维降解情况.结果 MMP-12 mRNA表达在照射后1周升高,2周下降,4周达高峰;蛋白表达于2周时明显升高,4周略微下降.MMP-12主要表达在肺泡间隔的巨噬细胞和被激活的成纤维细胞中.随着照射后时间的延长,肺组织损伤程度逐渐加重,肺泡壁与间隔增厚,肺泡结构遭到破坏,部分肺泡腔塌陷消失,肺泡基底膜内弹力纤维多发性断裂,呈不规则节段性线条散在分布.结论 60Co γ射线可以刺激MMP-12基因和蛋白的表达,说明MMP-12可能在放射性肺损伤早期起着十分重要的作用,推测可能通过降解弹力纤维,破坏基底膜正常结构,从而启动肺组织重建.     

放射性肺损伤早期肺组织重建机制的探讨

目的 探讨Ⅳ型胶原和MMP-9在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用。方法 用噻唑蓝(MTT)检测1～10 Gy ⁶⁰Co γ 射线照射对人肺成纤维细胞(Fb)增殖的影响;用酶联免疫吸附法测定经5和7 Gy照射后Fb中Ⅳ型胶原和MMP-9的变化;从经25 Gy照射后大鼠肺泡灌洗液中分离巨噬细胞,制备条件培养液(CMAM)并刺激肺Fb,用MTT检测对细胞增殖的影响;同时用ELISA测定对Fb合成Ⅳ型胶原和MMP-9的影响;于照射后不同时间取大鼠肺组织进行Ⅳ型胶原和MMP-9免疫组化染色。结果 1～7 Gy照射能促进肺Fb增生;5和7 Gy照射能促进Fb合成MMP-9,但不能促进Ⅳ型胶原合成;CMAM不但能促进Fb增生和MMP-9合成,也能合成和释放Ⅳ型胶原;受照后1周大鼠肺组织出现Ⅳ型胶原沉积。结论 照射能直接刺激肺Fb增生,但不能产生Ⅳ型胶原;Ⅳ型胶原的合成与照射后肺内巨噬细胞和Fb的相互作用有关,并可导致肺损伤重建的发生。     

RASL11B基因在肾透明细胞癌组织中的表达特征及其临床意义

目的 研究RAS样家族成员11B(RASL11B)在肾透明细胞癌中的表达特征及意义.方法 收集36例肾透明细胞癌患者的癌组织和对应癌旁组织,采用实时荧光定量PCR方法,检测RASL11BmRNA的表达差异,并分析RASL11B mRNA的表达水平与临床病理参数的关系;分别采用Western-blot和免疫组化的方法,确定RASL11B蛋白在癌组织和癌旁组织的表达差异及定位.结果 实时荧光定量PCR结果显示,肾透明细胞癌组织和癌旁组织均表达RASL11B mRNA,与癌旁组织(1.93±0.43)比较,其表达量在癌组织(0.28±0.08)中显著降低,两组比较有显著性差异(P＜0.001);RASL11B mRNA的表达水平下调与肿瘤直径大小、T分期、组织学分级、临床分级及有无大血管浸润呈显著负相关性;而与年龄和性别无显著相关性.Western-blot结果显示,癌组织和癌旁组织均表达RASL11B蛋白,癌组织表达量明显低于癌旁组织,Western-blot条带半定量分析结果分别为0.98±0.06、1.43±0.15,有显著性差异(P＜0.05);免疫组化染色结果显示RASL11B蛋白主要定位于正常肾组织肾小管上皮细胞胞浆;癌组织和癌旁组织的免疫组化染色评分结果分别为0.81±0.16、3.00±0.31,两组比较有显著性差异(P＜0.001).结论 RASL11B在肾透明细胞癌组织中的表达较癌旁组织显著降低,提示该基因的低表达在肾透明细胞癌的发生发展过程中具有一定的促进作用.     

化学趋化因子21高表达参与子宫内膜异位症发生的机制研究

目的研究盆腔子宫内膜异位症(EMS)子宫内膜及腹腔液中化学趋化因子21(CCL21)及其受体7(CCR7)的表达及机制探讨。方法选取38例EMS患和30例子宫肌瘤患者对照组作为研究对象。采用酶联免疫和免疫组化法检测子宫内膜组织中CCL21/CCR7表达变化;ELISA检测腹腔液CCL21水平;MTT和Transwell小室分别检测重组CCL21因子(r CCL21)对人子宫内膜基质细胞(ESCs)增殖和迁移的影响;免疫印迹方法检测r CCL21对ESCs细胞表达Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)2、9和磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸激酶(PI3K/Akt)的变化。结果 CCL21在EMS患者子宫内膜及腹腔液中显著高表达(P0.01),且与EMS病变程度呈正相关。CCL21激活CCR7参与促进ESCs的增殖、迁移及调控下游关键蛋白Bcl2、MMP2和9表达,可被抗CCR7抗体或PI3K/Akt抑制剂显著拮抗;雌激素显著促进ESCs产生和分泌CCL21(P0.01),而孕激素则抑制此过程(P0.01)。结论 EMS患者腹腔液及子宫内膜组织中CCL21水平明显增高,可作为评估EMS严重性的临床指标。CCL21/CCR7通过激活PI3K/Akt信号通路促进ESCs的增殖和浸润,参与盆腔子宫内膜异位症的发生及进展。     

冷冻保存对人类卵母细胞线粒体 DNA 缺失和能量代谢的影响

Objective： To explore the effect of cryopreservation on the mitochondrial DNA （mtDNA） deletions and energy metabolism of human oocyte, so as to investigate the effect of cryopreservation on oocytes preservation. Methods： The dumped oocytes with 0PN, 2PN and 3PN during routine IVF were collected for this cryopreservation study. Those oocytes were randomly divided into two groups, one for vitrification cryopreservation （Group A） and the other as control （Group B, without cryopreservation）. The nested polymerase chain reaction （PCR） was used to detect the mtDNA deletions of oocyte mtDNA before and after cryopreservation. Real-time quantitative PCR was adopted to determine the copy number of oocyte mtDNA. ATP contents were detected using luciferin-luciferase assays. Results： There were not significant differences in the mutation frequency of oocyte mtDNA deletions and the copy number of mtDNA between two groups （P>0.05）. However, The ATP content in the group A was significantly lower than that in the group B. Conclusions： The effect of cryopreservation on the oocyte mtDNA deletions and the copy number of mtDNA was limited, suggesting that cryopreservation can be properly used to preserve oocyte. [ABSTRACT FROM AUTHOR]