TTV DNA在肝组织中表达研究

目的 探索TTV DNA在肝组织表达特点。方法 选择TTV DNA高保守区设计一对引物，采用PCR扩增法，以地高辛标记TTV ORF1部分基因序列，合成Gla，G2b两种亚型的双链TTV DNA探针。应用巢氏PCR法筛选出TTV DNA阳性的慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌病人的肝组织标本共60份，同时用两种探针进行原位杂交。结果 TTV DNA主要见于肝细胞、肝癌细胞的细胞核内，极少数肝细胞胞浆内TTV DNA呈弱阳性。TTV DNA阳性细胞在慢性肝炎、肝硬化、肝癌组织中均呈散在分布。肝癌组织与癌周组织中TTV DNA阳性细胞密集程度差别不明显。结论 TTV是一种嗜肝病毒，TTV DNA在被感染肝组织及肝癌的细胞核内表达及复制。     

树突状细胞表面特异性非整联蛋白外显子4在中国裔丙型肝炎患者中的遗传多态性

目的探讨树突状细胞表面特异性非整联蛋白（DC—SIGN）及其同源物（DC-SIGNR）外显子4遗传多态性在中国裔丙型肝炎患者中是否存在遗传易感性。方法采用PCR结合DNA测序对300例丙型肝炎患者和520名健康人的DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4重复序列多态性进行基因分型和测序分析。结果DC—SIGN外显子4基因型与等位基因频率在丙型肝炎患者和健康人群间差异无统计学意义（P〉0．05）。DC-SIGNR外显子4等位基因的频率差异也无统计学意义（P〉0．05）；但9／5基因型分布频率在丙型肝炎患者和健康人群间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DC-SIGN外显子4遗传多态性与HCV感染易感性无明显相关性；9／5基因型DC-SIGNR外显子4在丙型肝炎患者中的分布频率较高，可能与HCV感染的易感性相关，值得进一步研究。     

乙型肝炎病毒对肝内TGF-β1/Smads信号通路的作用

 目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）对肝内TGF-β1蛋白表达及Smads信号通路的作用,为制定慢性乙肝肝纤维化临床治疗策略提供理论依据。方法：(1)运用免疫组化PV-6000法检测对照组和慢性乙肝组肝组织中TGF-β1、HBsAg和HBcAg的表达,并采用荧光定量PCR法测定慢性乙肝患者血清HBV DNA含量。(2)应用体外细胞培养技术培养HBV刺激的人肝星状细胞系LX-2细胞,Western blotting方法测定其细胞内TGF-β1、Smad3和Smad7的蛋白表达。结果：(1)慢性乙肝组肝组织内TGF-β1的表达高于对照组（P＜0.01）;肝内TGF-β1表达水平与血清HBV DNA含量呈正相关（P＜0.01）,且HBcAg阳性肝组织水平较高（P＜0.01）。(2)体外细胞学实验中,HBV刺激组LX-2细胞内TGF-β1和Smad3蛋白含量高于对照组和HBV+抗-TGF-β1组（P＜0.01）;Smad7蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：(1)TGF-β1在慢性乙肝患者肝组织中的表达与血清HBV DNA含量及肝内HBcAg的表达有关。(2)在TGF-β1/Smads信号通路中,HBV致纤维化作用机制以Smad3的正性调控为主,Smad7的作用不明显。     

PEG-干扰素α-2a治疗低转氨酶乙型肝炎患者的回顾性研究

目的对于PEG-干扰素α-2a（PEG—IFNα-2a）治疗的低转氨酶水平慢性乙型肝炎患者进行回顾性研究。方法对治疗满48周并于治疗前完成肝活检的乙型肝炎患者,取用药后第12周、24周、48周为观察点,记录乙型肝炎病毒血清标志物与HBVDNA的变化情况,并分析其应答与肝组织炎症程度（G分级）、肝细胞HBcAg分布的相关程度。结果按炎症级别分组之HBeAg阳性组：治疗48周时G1组总有效率20％（2／10）,G2组总有效率56．25％（9／16）,G3组100％（6／6）;HBeAg阴性组炎症级别G1组10％（1／10）,G2组62．5％（5／8）,G3组100％（2／2）。按照肝细胞HBcAg表达分组之HBeAg阳性组：48周时浆型表达总有效率80％（8／10）,混合型表达组总有效率42．1％（8／19）,阴性表达组100％（3／3）。HBeAg阴性组：浆型分布组DNA阴转率为37．5％（3／8）,混合型组为28．57％（2／7）,阴性组为60％。结论无论按照炎症还是肝细胞HBcAg表达分组比较,最初统计学处理后发现各个级别分组所得数据未见明显差异（包括HBeAg阳性与阴性组）。加入时间因素后显示随时间延长,高炎症水平、HBcAg的阴性表达和（或）浆型表达会有更高的疗效。     

左旋氧氟沙星对小鼠结核分枝杆菌生长及细胞免疫的影响

目的探讨左旋氧氟沙星对小鼠结核分枝杆菌生长、特异性细胞免疫和病理改变的影响,探讨左旋氧氟沙星联合其他免疫治疗的可行性。方法 38只C57BL/6小鼠尾静脉注射H37Rv结核菌(1×106CFU/只),然后随机等分为两组,一组不作处理(对照组),另一组进行左旋氧氟沙星灌胃治疗(药物组),300mg/kg,每周灌5d,疗程28d。在治疗开始后不同时间点处死小鼠,计数肺组织结核分枝杆菌菌量、观察肺组织病理变化,测定脾细胞特异性细胞因子的产生情况。结果左旋氧氟沙星能有效抑制小鼠肺组织结核分枝杆菌的生长,与对照组比较,药物组小鼠服药期间细菌量减少100倍,停药后30d仍减少10倍,差别有统计学意义(P0.05)。同时药物治疗能减轻肺组织病理变化的程度。药物组小鼠脾细胞分泌卡介苗(BCG)特异性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-10和IL-17水平明显高于对照组(P0.05)。结论左旋氧氟沙星能有效抑制小鼠结核分枝杆菌的生长,同时能改善肺组织的病理变化和促进小鼠脾细胞分泌特异性细胞因子。     

Oct-2、Bob.1在肺结核组织B细胞中的表达及其意义

目的探讨肺结核组织B细胞中Oct-2、Bob.1的表达与机体免疫的关系。方法采用免疫组织化学检测20例肺结核组织B细胞中Oct-2、Bob.1的表达情况。结果 (1)在肺结核组织生发中心的B细胞中Oct-2和Bob.1主要表达在细胞核;在无形成生发中心聚集的B细胞中,细胞核和细胞浆均呈阳性;(2)肺结核组织B细胞中Oct-2阳性的细胞数明显少于Bob.1阳性的细胞数,Oct-2和Bob.1阳性率分别为:10.8%、65.6%;(3)形成生发中心的肺结核组织B细胞中Oct-2和Bob.1阳性的细胞数明显高于无生发中心形成的肺结核组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺结核组织B细胞Oct-2表达低下和/或Oct-2、Bob.1表达不一致可能导致B细胞在发育过程中未能形成生发中心。     

慢性乙型肝炎患者肝再生酶变化与肝纤维化的相关研究

目的 探讨慢性乙型肝炎（下称乙肝）患者血清中β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、单胺氧化酶（MAO）、胆碱酯酶（CHE）的活性变化与肝纤维化的相关性。方法 采用速率法对健康对照组和慢性乙肝疾病组的NAG、MAO、CHE活性进行测定，应用肝穿刺活检对慢性乙肝患者肝组织的纤维化活动度进行观测。结果 慢性乙肝组各种酶的活性与健康对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。NAG、MAO与肝纤维化程度呈正相关，CHE与肝纤维化程度呈负相关。结论 NAG、MAO、CHE与肝纤维化程度相关性显著，可以作为检测肝纤维化程度的良好指标。     

大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究

目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体，并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求，应用在线miRNA设计工具http：//maidesigner．invitrogen．com／maiexpress／，针对大鼠TIMP1基因（GenBank：U06179）的598位点设计、合成Oligo DNA，退火形成双链DNA后，与载体pcDNA TM^6．2-GW／EmGFP-miR连接，转化Top10感受态细胞，构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体。经PCR扩增及测序鉴定正确后，以脂质体Lipofectimine TM^2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6，24、48、72h后收集细胞，应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况。结果经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体正确；将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6，48h即可见TIMP1 mRNA表达量下降，72h检测不到TIMP1 mRNA的表达，而未转染组及转染pLacZ-miR／GFP（阴性对照）组未见此改变。结论成功构建大鼠TIMP1 miR—NA慢病毒RNAi载体pTIMP1-miR／GFP；pTIMP1-miR／GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6TIMP1基因沉默。提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默，为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础。     

HCV-RNA病毒载量和肝脏病理的关系

目的:研究丙肝患者血清HCV-RNA含量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度及肝脏病理之间的关系。方法:采用荧光定量PCR法检测306例疑似HCV感染患者的血清HCV-RNA,ELISA法检测抗-HCV,全自动生化分析仪测定ALT,对部分患者行肝穿刺检查。结果:306例血清标本中,HCV-RNA和抗-HCV均阳性155例,HCV-RNA阳性而抗-HCV阴性36例,HCV-RNA阴性而抗-HCV阳性45例。在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,23例丙肝患者在HCV-RNA检测前后10d内,曾进行过肝脏病理检查,HCV-RNA含量和ALT浓度水平与肝组织病理分级相关性不显著。结论:HCV-RNA和抗-HCV的检测是诊断HCV-RNA感染的重要指标。但HCV-RNA含量和ALT浓度水平与肝组织炎症及纤维化无明显相关。     

TTVDNA在肝细胞中的表达及其致病性研究

1997年12月日本学Nishizawa等最先从一例输血后非甲非庚型肝炎患血清中分离到一种DNA病毒克隆(N22),命名为TT病毒(transfusion transmitted virus．TTV)。并报道感染TTV后表现为一过性或持续性病毒血症,且病毒滴度与ALT升高相关,推测TTV可能是未知病毒致肝损害的病因之一。