不同感染途径的丙型肝炎患者血清HCV RNA及抗-HCV与ALT水平的分析

目的:探讨丙型肝炎(丙肝)患者感染途径与其肝脏病变程度的关系。方法:根据感染途径的不同将210例丙肝患者分输血后丙肝(PTHC组)102例和散发性丙肝(SHC组)108例,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术、酶联免疫吸附方法(ELISA)和自动生化速率法分别检测两组患者血清中HCV RNA含量、抗-HCV及ALT水平。结果:PTHC组HCV RNA阳性率和ALT的异常率均显著高于SHC组(χ2=23.39,P<0.01和χ2=13.73,P<0.01);HCV RNA阳性患者中,PTHC组的HCV DNA含量均值显著高于SHC组(t=4.29,P<0.01);ALT异常患者中,PTHC组的ALT水平均值显著高于SHC组(t=4.30,P<0.01)。HCV RNA的含量与ALT水平呈正相关(r=0.794,P<0.01)。结论:PTHC组患者病毒血症水平和肝脏功能损害的程度均显著高于SHC组,HCV不同的感染途径可导致患者不同的感染结果。     

慢性乙型肝炎患者胃粘膜HBV-DNA检测及临床意义

目的:检测慢性乙型肝炎(乙肝)患者乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA),探讨HBV与胃粘膜病变的关系。方法:选择慢性乙肝并伴有慢性胃炎的患者58例(H组)及慢性胃炎但其血清HBV标志物(HBVM)和HBV-DNA均阴性对照组52名(C组),两组均进行胃镜检查,同时取胃粘膜,H组取空腹静脉血液,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法进行血清、胃粘膜HBV-DNA含量和血清HBVM检测。结果:H组血清和胃粘膜HBV-DNA阳性例数分别为38例(65.52%)和46例(79.31%),两者相比有显著性差异(χ2=6.125,P<0.05);两者HBV-DNA含量显著正相关。H组32例血清HBeAg阳性患者的血清和胃粘膜HBV-DNA均为阳性,而26例血清HBeAg阴性患者的血清和胃粘膜HBV-DNA阳性只有6例(23.1%)和14例(53.8%)。C组胃粘膜HBV-DNA全部阴性。胃镜下观察H组患者广泛存在胃窦炎,C组以慢性浅表性胃炎为主。结论:HBV存在于胃粘膜中,可能引起胃部的炎性损伤。     

类风湿性关节炎患者抗环瓜氨酸肽抗体检测的临床分析

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种以关节滑膜慢性炎症为主的致畸性自身免疫性疾病,在出现症状两年内,50%～90%的患者有关节受损的放射学改变[1].     

SYBR Green Ⅰ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义

目的探索SYBR GreenI联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义。方法选择浓度为108.48、105.70和103.70copies/ml的3种HBV-DNA阳性血清和<1×103.0copies/ml的阴性血清各1份,在TaqMan-PCR混合反应体系中加入SYBR Green I组成双荧光PCR(TaqMan SYBR Green I组),同时进行TaqMan和SYBR Green I的单荧光PCR(分别为TaqMan组和SYBR Green I组),设置同一PCR和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其Tm,每种方法一次检测每份血清5次。结果TaqMan SYBR Green I组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±、105.79±、103.81±,与TaqMan组的108.49±、105.69±、103.72±copies/ml0.320.290.300.310.300.25对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P>0.05);与SYBR Green I组的108.41±、0.35105.21±和103.26±copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和0.340.262.62,P<0.05)。TaqMan SYBR Green I组和SYBR Green I组阳性血清均出现明显熔解曲线,熔解温度(Tm)分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。结论SYBR Green I联合TaqMan-PCR检测HBV-DNA时,具有能维持TaqMan-PCR的高灵敏度、特异性更强,并能同时检测HBV-DNATm的特点,为HBV的DNA多态性分析,尤其是在HBV基因分型方面提供了新的检测思路。     

原发性肝细胞癌患者外周血单个核细胞中HBV-DNA含量检测的意义

目的:了解原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的整合情况,以揭示其在HCC发病机制中的作用。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测32例HCC患者和45例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清和PBMC中HBV-DNA含量,引物和探针设计选择HBVC区的DNA序列。结果:HCC组和CHB组患者血清中HBV-DNA阳性率分别为62.5%(20/32)和46.7%(21/45)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为105.50±1.52和105.05±1.45copies/ml,PBMC中HBV-DNA阳性率分别为87.5%(28/32)和51.1%(23/45)(P<0.01)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为104.51±1.32和104.05±1.05copies/ml;HCC组血清和PBMC中HBV-DNA阳性率相比较有统计学差异(62.5%比87.5%,P<0.05);HCC组和CHB组血清和PBMC中HBV-DNA同时阳性时,其HBV-DNA含量均呈正相关(P<0.01)。结论:HCC患者PBMC中存在HBV-DNA整合的现象;作为临床预测HCC发生的风险指标,PBMC中HBV-DNA含量的检测与穿刺肝组织相比具有轻创或无创的优点。     

ALT正常、HBsAg阴性人群中隐匿型乙型肝炎病毒的感染情况

目的 了解隐匿型乙型肝炎病毒(occult HBV)在ALT正常、HBsAg阴性人群中的感染情况.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测192例ALT正常、HBsAg阴性人群血清中HBV-DNA含量.结果 192例人群中HBV-DNA阳性率为15.6%(30/192),HBV-DNA含量均低于103.6copies/ml.男性和女性人群的HBV-DNA阳性率分别为22.8%(23/101)和7.7%(7/91),差异有显著性(x2=8.26,P＜0.01);50岁以上和50岁以下人群的HBV-DNA阳性率分别为17.6%(3/17)和15.4%(27/175),两者差异无显著性(χ2=0.06,P＞0.05);抗-HBe阳性和(或)抗-HBc阳性和(或)抗-HBs阳性与HBV标志物(HBV-M)全阴性人群的HBV-DNA阳性率分别为18.2%(28/154)与5.3%(2/38),差异有显著性(χ2=3.86,P＜0.05).结论 ALT正常人群中存在隐匿型HBV感染,且与性别有关.提示临床在输血和器官移植时,应结合灵敏度高的HBV-DNA检测方法,方能预防隐匿型HBV的传播.     

丙氨酸氨基转移酶正常人群隐匿型乙型肝炎病毒核酸的检测

[目的]了解隐匿型乙型肝炎病毒(occult HBV)在丙氨酸氨基转移酶(ALT)正常人群中的感染情况。[方法]应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测538例ALT正常、HBsAg阴性人群血清中HBV-DNA水平。[结果]538例人群中HBV-DNA阳性率为15.6%,男性(22.8%)显著高于女性(7.8%)(P<0.01),≥50岁(16.7%)与<50岁(15.5%)差异无统计学意义(P>0.05),有输血史(21.9%)高于无输血史(14.1%)(P<0.05),且HBV-DNA水平均<103.6copies/ml。[结论]ALT正常人群中存在隐匿型HBV感染,且与输血史和性别有关。提示临床进行输血和器官移植等异体成分治疗时,在检测ALT和HBV标志物的同时,应结合灵敏度高的FQ-PCR方法检测HBV-DNA,以杜绝隐匿型HBV传播的可能性。     

时间分辨荧光免疫法定量检测HBV标志物的临床价值

乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）的检测除传统的ELISA法外．近年来发展较快的一种定量的高灵敏度的时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）正被临床广泛应用。为评价TRFIA定量检测HBV-M的临床价值，我们应用TRFIA法与ELISA法对HBV-M5项指标分别进行定量和定性检测，以了解TRFIA的敏感性和特异性，同时采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测其HBV DNA，以了解HBV-M各指标动态变化的临床意义，现报告如下。     

SYBR Green Ⅰ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义

目的探索SYBR GreenⅠ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义。方法选择浓度为10^8.48、10^5.70和10^3.70copies/ml的3种HBV-DNA阳性血清和〈1×10^3.0copies/ml的阴性血清各1份,在TaqMan-PCR混合反应体系中加入SYBR Green Ⅰ组成双荧光PCR（TaqMan＋SYBR Green Ⅰ组）,同时进行TaqMan和SYBR Green Ⅰ的单荧光PCR（分别为TaqMan组和SYBR Green Ⅰ组）,设置同一PCR和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其Tm,每种方法一次检测每份血清5次。结果TaqMan＋SYBR Green Ⅰ组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为10^8.55±0.32、10^5.79±0.29、10^3.81±0.30,与TaqMan组的10^8.49±0.31、10^5.69±0.34、10^3.72±0.26copies/ml0.320.290.300.310.300.25对应浓度值取10对数比较,无统计学意义（t=0.31、0.54和0.27,P〉0.05）;与SYBR Green I组的10^8.41±0.35,10^5.21±0.34和10^3.26±0.26copies/ml（不含未检出的两次血清）比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义（t=2.90和0.340.262.62,P〈0.05）。TaqMan＋SYBR Green I组和SYBR Green Ⅰ组阳性血清均出现明显熔解曲线,熔解温度（Tm）分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。结论SYBR Green Ⅰ联合TaqMan-PCR检测HBV-DNA时,具有能维持TaqMan-PCR的高灵敏度、特异性更强,并能同时检测HBV-DNATm的特点,为HBV的DNA多态性分析,尤其是在HBV基因分型方面提供了新的检测思路。     

FQ-PCR技术在孕妇Ⅱ型单纯疱疹病毒感染中的应用

目的:探讨孕妇血清中Ⅱ型单纯疱疹病毒核酸(HSV 2-DNA)的数量与宫内感染率之间的关系。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法对31例HSV 2-IgG阳性的晚期妊娠孕妇血清及其新生儿脐血HSV 2-DNA含量进行检测。结果:31例HSV 2-IgG阳性孕妇中有27例血清HSV 2-DNA阳性,含量为1.0×103~5.4×105copies/mL,新生儿脐血HSV 2-DNA阳性7例,宫内传播率为25.9%(7/27),7例发生新生儿宫内感染的孕妇血清HSV 2-DNA含量均>5.3×104copies/mL。结论:孕妇血清中HSV 2-DNA含量升高是胎儿发生Ⅱ型HSV感染的重要因素之一。FQ-PCR可以准确检测血清HSV 2-DNA的含量,提示体内复制和宫内感染情况,对于临床诊断与治疗有一定的指导意义。