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1.
2.
1999~2002年,我们观察了针刺内关穴对冠心病心绞痛患者心脏动力学的影响。现报告如下。 临床资料:本文40例冠心病心绞痛患者(其中高压力负荷冠心病心病心绞痛24例,低压力负荷冠心绞痛16例);男16例,女24例;年龄50~79岁,平均61岁。病程2个月至20年,平均6.8年。患者平时服用养心氏、步常脑心通、丹参滴丸、消心痛、降压片中的1~2种药物。 相似文献
3.
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA2的真核表达重组质粒。方法设计合成GRA2引物,运用PCR方法扩增其基因片段,经克隆至pMDl8-T载体后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(-)而构建重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2。脂质体法将构建的重组质粒转染HFF细胞,RT—PCR法检测转染细胞中GRA2的表达情况。结果PCR扩增GRA2基因序列正确,构建的重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2经PCR、EcoRⅠ/HindⅢ双酶切和测序鉴定正确;转染GRA2基因的细胞,RT—PCR可见目的条带。结论成功获得真核表达重组质粒pcDNA3.1-GRA2,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。 相似文献
4.
目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒,为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备。方法 用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组DNA;用PCR技术从基因组DNA中扩增编码表而抗原P30、P22的基因片段,分别重组入pMD18T载体中。将pMD18-T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入pUC18克隆载体中,pUC18-P30-P22中的P30P22片段经酶切、纯化后,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆pUC18-P30P22重组质粒的酶切片段分别与P30、P22基冈大小一敛:经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致。结论 成功构建弓形虫pUC8-P30P21重组质粒和pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,为研制弓形虫DNA疫苗奠定了基础。 相似文献
5.
目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。 相似文献
6.
为获取具有生物学活性的弓形虫P30蛋白,采用定向克隆的方法,自行设计引物通过PCR扩增得到P30基因片段,用EcoRI和SalI双酶切后,连接到同样酸切的原核表达载体(pBV220和pMALP2)上,转化大肠杆菌DH5α,分别得到含重组闰pBV220-P30和pMALP2-P30的工程菌,扩菌提取质粒经过酶切分析和PCR扩增鉴定后,证实P30基因的两个原核表达载体构建成功,为其在原核系统中的表达作 相似文献
7.
8.
弓形虫P30基因非融合蛋白表达的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中进行表达。方法:采用定向克隆的方法。将PCR扩增得到的P30片段,插入原核表达质粒pBV220上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆,经过酶切及PCR扩增鉴定重组子,将含阳性重组子pBV220-P30的工程菌经温度诱导表达,SDS-PAGE电泳及免疫印迹分析。结果:成功构建了pBV220-P30重组质粒;SDS-PAGE电泳及Western-blot显示表达P30非融合蛋白的分子量为29kD,且能被弓形虫高免鼠血清识别。结论:从弓形虫基因组DNA中获取P30基因。并成功构建了pBV220-P30重组质粒,诱导表达了P30非融合蛋白,对弓形虫病基因疫苗研制奠定了基础。 相似文献
9.
10.
高铬酵母的制备及其有机铬含量的研究 总被引:22,自引:0,他引:22
目的 : 通过在培养基中添加无机铬化合物的方法制备有机铬含量较高的高铬酵母 ,并对高铬酵母中总铬和有机铬的含量进行分析。方法 : 以麦芽汁为培养基 ,啤酒酵母菌接种量为 1 0 % ,Cr Cl3的添加浓度为 2 0 .0 mg/L,2 8℃ ,培养 48h。结果 : 所得高铬酵母中的总铬和有机铬含量可分别达到 2 60 .2μg/g和 2 1 6.0μg/g;紫外光谱分析 ,高铬酵母在 2 60 nm处有特征吸收峰 ;红外光谱分析 ,高铬酵母在 478cm- 1 (波数 )处有特征吸收峰 ;用氨基酸自动分析仪对高铬酵母中的 1 7种氨基酸含量进行分析 ,证实高铬酵母中的氨基酸含量大多高于普通酵母 ,尤其是赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等人体必需氨基酸的含量明显提高。结论 : 通过该法可以制备有机铬含量及营养价值较高的高铬酵母 相似文献