中医临证思想在中药现代研究中的应用

中医临证思想决定中药的现代研究实践,同时中药的现代研究也大大丰富充实了中医现代临证思想。中西医汇通,中医临证思想从"宏观辨证思维"向"宏观—微观辨证结合"与"病证结合"思想模式转变,使中医临证思想发生了第三次质的改变,在此指导下的现代中药研究,应用生物信息学、分子生物学、免疫学和蛋白组学的研究技术,从整体、细胞和分子水平,从更高的层次水平来探讨中药研究的现代化。     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的 观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS（1 μg/mL）刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB（NF-κB）核转运的作用,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）的变化。结果 当Tet浓度＜1 μmol/L时,单独或与1 μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度＞10 μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞（红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状）为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

PKCα/COX-2介导人神经胶质瘤细胞中MDR-1活性的实验研究

恶性胶质瘤除手术、基因治疗[1]外化疗是治疗环节中至关重要的一环,而多药耐药是胶质瘤化疗失败的重要原因[2-3]研究表明,蛋白激酶C(PKC)和环加氧酶-2(COX-2)均参与了肿瘤的发生、发展过程,并且可以相互影响[4],而MDR-1是目前公认的与肿瘤耐药密切相关的因素之一[5],本实验拟从细胞分子和信号水平探讨神经胶质瘤多药耐药的机制.     

黄连现代中医临证研究

黄连在现代中医临证中广泛应用于消化系统、呼吸系统、心脑血管、肿瘤以及妇科、儿科、五官、皮肤等疾病中,执繁就简,把黄连现代中医临证应用分为清上、清中以及清下3种,同时,对于黄连现代研究将基础医学、基础药理学的研究进展同临床紧紧结合起来,用生物信息学、分子生物学、免疫学和蛋白组学的研究技术,从整体、细胞和分子水平来探讨,找到更为准确的黄连及其系列方剂的作用靶点,从而使黄连中医临证研究形成一个开放性包容中西医现代中药研究新的体系。     

人宫颈癌组织环加氧酶2mRNA剪接异构体的表达

背景：宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展与环加氧酶2密切相关.目的：探讨人宫颈癌组织中是否存在环加氧酶2选择性剪接异构体的表达及其可能意义.设计：非随机对照实验.单位：重庆医科大学生物化学与分子药理学重点实验室,重庆医科大学附属第一医院妇产科.对象：选择13例重庆医科大学附属第一医院妇产科2002-03/2002-04宫颈癌住院患者的癌组织及正常组织.方法：设计一对全新引物,并采用反转录聚合酶链反应技术,从宫颈癌组织中分离环加氧酶2 mRNA,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析.主要观察指标：①观察癌组织与正常组织反转录聚合酶链反应琼脂糖电泳结果.②分析癌组织与正常组织电泳条带测序结果.结果：①正常宫颈组织未发现环加氧酶2目的条带（252 bp）,而宫颈癌组织则出现两条条带,除环加氧酶2目的条带外,还有一新的电泳带（534 bp）,经克隆和测序证实,该新条带除目的条带的环加氧酶2 DNA的第7、8外显子序列外,还包含第7、8外显子间的内含子序列,即保留的内含子（282 bp）.②根据阅读框推测,在保留的内含子第48～50碱基出现终止密码.结论：发现宫颈癌组织中存在环加氧酶2基因的选择性剪接异构体（Genbank accession number：BU493602）,其所编码蛋白可能较已报道的环加氧酶2酶蛋白小.     

粉防己碱对LPS诱导的大鼠发热模型的解热作用

目的:研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)对脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠发热模型的解热作用及其机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、LPS模型组、对乙酰氨基酚对照组及粉防己碱5,15,45mg/kg组。用LPS100μg/kg腹腔注射建立大鼠发热模型,药物处理后每30min测体温一次,连续监测6h,观察大鼠的体温变化;运用Western-blot检测脑组织中环加氧酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,并用EIA法检测其前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)的含量;髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)试剂盒检测肝组织MPO水平。结果:粉防己碱能有效抑制LPS诱导的大鼠发热反应,显著降低脑组织中COX-2和PGE2的表达,抑制肝脏MPO水平。结论:粉防己碱具有显著的解热作用,其作用机制可能与抑制脑组织中COX-2和PGE2的表达,降低肝组织中MPO含量有关。     

蛋白激酶Cα在人神经胶质瘤耐药细胞株凋亡中的作用

背景与目的：蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）参与肿瘤的发生、发展及预后。本研究探讨蛋白激酶Cα（Protein kinase Cα，PKCα）在人神经胶质瘤耐药细胞株SHG-44／ADM发生细胞凋亡中的作用和机制。方法：应用阿霉素浓度递增和间歇诱导法建立SHG-44／ADM耐药株．采用PKCα激活剂PMA和抑制剂Staurosporine分别干预SHG-44/WT和SHG44／ADM细胞株．激酶分析PKCα活性，荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度．流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：PKCα激活剂PMA增强细胞PKCα和MDR-1的活性．同时降低细胞凋亡率：PKCα抑制剂Staurosporine抑制细胞PKCα和MDR-1的活性．增加细胞凋亡率。结论：PKCα通过MDR-1参与神经胶质瘤耐药细胞的凋亡．     

肾上腺素对小鼠巨噬细胞中促炎／抗炎介质比值的影响

目的：研究肾上腺素对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7中促炎介质［肿瘤坏死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、环加氧酶-2（COX-2）］和抗炎介质［血红素氧化酶-1（HO-1）、白介素10（IL-10）］表达及NF-κB活化的影响。 方法： 以10 μg/L的LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型，加入不同浓度的肾上腺素（1、5、10、50 μmol/L）孵育24 h后，收集培养上清并提取细胞总蛋白，酶联免疫法测定上清中TNF-α、IL-10浓度，Griess法检测上清NO含量(以NO2-/NO3-表示)，免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX-2、HO-1、IκB-α的含量。 结果： 10 μg/L的LPS明显诱导TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2、IL-10及HO-1的产生；LPS+肾上腺素组与LPS单独作用组相比促炎介质TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2的表达量显著下降，而抗炎介质IL-10、HO-1的表达却明显增强；肾上腺素与LPS共同作用组中IκB-α的含量与单独LPS作用组相比无明显差异。 结论： 肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中促炎介质的表达同时促进抗炎介质的表达，这种效应并不通过影响NF-κB的活化来实现。     

积雪草苷对脂多糖诱导急性肺损伤的白细胞介素-10和血红素氧合酶-1影响研究

目的观察积雪草苷对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）白细胞介素-10（IL-10）、血红素氧合酶（HO-1）影响。方法40只Balb／c小鼠随机分为空白组，模型组，积雪草苷5，15，45mg·kg。5组，每组8只。脂多糖（2．5mg·kg^-1）气管滴注造急性肺损伤模型，24h后处死小鼠，免疫印迹法检测肺组织HO—1蛋白表达，ELISA法检测血浆IL-10表达。结果积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性增加脂多糖所致急性肺损伤模型肺组织HO-1蛋白和IL-10表达。结论积雪草苷对LPS诱导急性肺损伤保护效应可能与促进HO-1表达和IL-10含量有关。     

羟基积雪草苷与积雪草苷对LPS诱导大鼠发热模型的影响

目的观察积雪草苷和羟基积雪草苷的解热作用,并比较两者在解热作用上的差异。方法将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组(LPS 100μg/kg)、溶酶对照组(羧甲基纤维素钠)、积雪草苷5,15,45 mg/kg、羟基积雪草苷10,20,40mg/kg、对乙酰氨基酚50 mg/kg组。腹腔注射LPS(100μg/kg)建立SD大鼠发热模型,绘制各组平均体温变化曲线,比较测量体温与基础体温差值ΔT。结果羟基积雪草苷(10,20,40 mg/kg)与积雪草苷(5,15,45 mg/kg)对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温有显著的降温作用(P<0.05)。结论羟基积雪草苷和积雪草苷对LPS诱导的SD大鼠发热模型的体温均有降温作用,积雪草苷在某些时间点(如LPS注射5 h后)降温效应优于羟基积雪草苷。