鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化活性部位的化学成分比较

［摘要］目的探讨鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化活性部位的化学成分。方法运用双缩脲反应、紫外分光光度法和高效毛细管电泳法对鳖甲与醋鳖甲活性部位的化学成分进行比较，并对醋鳖甲进行氨基酸分析。结果鳖甲和醋鳖甲活性部位均含多肽，但吸收光谱有一定的差异；毛细管电泳结果表明醋鳖甲所含成分比鳖甲多；醋鳖甲游离氨基酸含量为1.32%，水解氨基酸含量为58.0%。 结论鳖甲与醋鳖甲活性部位的化学成分存在明显差异，可为临床选择用药以及进一步研究鳖甲的活性成分提供一定的参考依据。     

鳖甲研究概况

鳖甲为传统中药，来源于鳖科动物鳖（Trionyx sinensis Wiegmann）的背甲，被国家卫生部列为药食两用的中药品种。其始载于《神农本草经》，列为上品，历代本草都有收载。鳖甲具有滋阴潜阳，软坚散结，退热除蒸的功效；主治阴虚发热、劳热骨蒸、瘸瘕，虚风内动、久虐虐母、经闭等病症。目前，以鳖甲为君药组方的复方制剂在临床应用较多，且具有较好的疗效，因而有必要对鳖甲的化学成分、药理作用及临床应用进行全面的综述。     

鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的SDS-PAGE凝胶电泳比较研究

摘 要 目的：探讨鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的差异,为鳖甲药材的临床用药提供依据。方法: 运用SDS-PAGE技术,对生鳖甲与醋鳖甲活性部位进行分析比较;采用MTT比色法测定生鳖甲与醋鳖甲对HSC T6增殖的影响。结果: 炮制后的醋鳖甲所含成分增多,一级谱带相对分子质量降低,导致小分子肽类物质产生;生鳖甲和醋鳖甲均具有抗肝纤维化的作用,但醋鳖甲的药效优于生鳖甲。结论: 鳖甲炮制前后活性部位明显差异,为临床选择用药及进一步活性成分研究提供依据。     

等速电泳法测定青风藤中青藤碱的含量

青风藤系木质落叶藤本,广泛分布于华东、西南、华中及陕西等地。为防己科植物青藤及毛青藤的干燥鳞茎。可用来治疗风湿痹痛、鹤膝风、水肿和脚气。青藤碱是青风藤中所含的主要生物碱,具有镇痛和抗炎作用,对类风湿性关节炎有一定的疗效。目前,对青藤碱的测定方法有薄层色谱扫描法(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)和肟化法等。等速电泳法(Isota-chophoresis,ITP)应用于天然药物的分析已有一些报道,本文用于青藤碱含量的测定。     

鳖甲炮制前后抗肝纤维化有效物质部位HPCE指纹图谱的比较研究

目的建立生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效物质部位的高效毛细管电泳（HPCE）指纹图谱,探讨其炮制前后药效物质的差异。方法运用毛细管区带电泳法,75um×57cm未涂层石英毛细管,运行缓冲液为20mmol／L磷酸氢二钠-100mmol／L三羟甲基氨基甲烷（1mol／LNaOH调pH值至12．0）,分离电压为18kV,检测波长为254nm,柱温为20℃,分别建立了10批生鳖甲和10批醋鳖甲有效物质部位的指纹图谱,并进行对比研究。结果生鳖甲指纹图谱共标定了17个共有峰,HPCE图谱相似度均大于0．94;醋鳖甲指纹图谱共标定了19个共有峰,HPCE图谱相似度均大于0．93;而10批生鳖甲图谱与醋鳖甲对照指纹图谱的相似度降低,为0．86～0．92;且10批醋鳖甲图谱与生鳖甲对照指纹图谱的相似度亦降低,为0．86～0．93。结论鳖甲炮制前后化学成分及其含量发生了变化,且炮制后产生了一些新的有效成分。     

鳖甲抗肝纤维化活性多肽的固相合成

目的固相合成鳖甲抗肝纤维化活性多肽,为开发抗肝纤维化多肽药物提供结构明确的受试品。方法采用固相合成法,以Fmoc保护氨基酸和Wang树脂为原料,经1 氧 3 双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐、N 甲基吗啡啉缩合,以20%哌啶的N,N 二甲基甲酰胺溶液进行脱保护,用三氟乙酸切割试剂将多肽粗品从Wang树脂上切割下来。结果经反相高效液相色谱分析纯化,可得纯度>98%的目的肽,经质谱鉴定其相对分子质量与理论值一致。结论该合成方法条件温和、副反应少,操作简便,纯化效率高,可用于大规模合成目的肽。     

鳖甲多肽的全合成及对肝星状细胞的作用

目的 研究鳖甲多肽的合成及对肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)的作用. 方法 根据鳖甲活性多肽的序列结构,采用Fmoc固相 方法 对多肽进行全合成,经反相高效液相色谱法分析、纯化获得合成多肽;不同浓度合成多肽作用肝星状细胞株HSC-T6 24 h,用Annexin V-FITC/PI法检测HSC凋亡. 结果 反相高效液相纯化后合成多肽的纯度＞98.0%,经质谱鉴定其相对分子质量与理论值一致;合成多肽浓度为0.6 mg.mL^-1时,早期凋亡细胞开始增多,至2.5 mg.mL^-1时,坏死细胞开始增多,随合成多肽浓度增高,各组凋亡细胞随之增多. 其中鳖甲合成多肽在1.2,2.5和5 mg.mL^-1浓度下能显著提高HSC早期凋亡率(P<0.05). 结论 鳖甲多肽可以定向合成,并且合成多肽能诱导HSC的早期凋亡.     

浅谈《分析化学》实验教学改革

分析化学是研究物质化学组成、结构和分析方法的学科,是药学[1-3]、检验类[1-2、4]专业高等教育中一门应用性很强的专业基础课,包含化学分析和现代仪器分析两大部分.     

中药鳖甲提取物抗肝纤维化的实验研究

目的 探讨中药鳖甲提取物的抗肝纤维化活性及作用机制.方法 传代培养的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)与从鳖甲中提取分离得到的小组分Dj60-Bj616各浓度组共同培养72 h后,采用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)测定各浓度组Ⅳ型胶原(ColⅣ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的含量,同时设空白对照组和刺激对照组.结果 鳖甲小组...     

鳖甲抗肝纤维化有效部位的初步筛选研究

目的:筛选鳖甲抗肝纤维化的有效部位。方法:传代培养的LX-1与鳖甲提取物的Bj1～Bj8共8个部位共同培养72h后,3H-TdR法检测对TGF-β1刺激的LX-1细胞增殖的影响,再将传代培养的HSC-T6与鳖甲的Bj61～Bj68(为Bj6的进一步的分离部位)共同培养72 h后,采用MTT比色法测定各浓度组HSC-T6的增殖情况。结果:3H-TdR法检测结果表明Bj4、Bj6、Bj7部位抑制LX-1细胞增殖,MTT比色法结果表明Bj66和Bj67部位有较强的抑制HSC-T6细胞增殖的作用。结论:Bj66和Bj67为鳖甲的有效部位。