山茱萸多糖延缓衰老作用的研究

健康长寿是人类经久不衰研究的热门课题之一。尤其是进入21世纪后,社会人口的老龄化进程迫使我们对衰老及衰老相关疾病、有效防治衰老措施的研究有更深刻的理解和阐述。而衰老是内外环境引发的机体各种功能普遍减弱的过程,表现为渐进性、累积性和普遍性。中药以其特有的效果,在抗衰老研究领域占有重要的地位。有关中药及其组分在抗衰老和抗肿瘤研究的众多发现,例如银杏叶、人参皂甙等,不仅推进研究的深入,而且也得到多数学者的认可。     

黄芪多糖对衰老HDF细胞染色体末端限制性片段长度的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)改善衰老人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF细胞)衰老表型的机制。方法 HDF细胞连续传代培养,形成衰老细胞模型;采用MTT法检测细胞活力;免疫组化法检测β-半乳糖苷酶活性;DNA杂交法检测染色体末端限制性片段(TRF)长度。结果 APS提高衰老HDF细胞活力(P<0.05),降低了SA-β-gal表达(P<0.05);衰老HDF细胞TRF长度明显缩短(P<0.05),而APS可使TRF缩短速度降低(P<0.05)。结论 APS可以通过减慢TRF缩短速度,提高衰老HDF细胞活力,发挥抗衰老作用。     

车前子多糖对衰老模型大鼠脑氧化-非酶糖基化影响的实验研究

目的 探讨车前子多糖对D-半乳糖致衰大鼠氧化-非酶糖基化作用的影响,明确车前子抗衰老作用及机制.方法 选用D-半乳糖衰老模型Wistar大鼠作研究对象,观察不同剂量车前子多糖对衰老模型大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(AHR)、脑单胺氧化酶B活性(MAO-B)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSH)比值、羰基化蛋白、醛糖还原酶(AR)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)mRNA表达水平的影响,并与衰老模型组和车前子水煎剂组进行比较. T-AOC、AHR、MAO-B活性、GSH/GSSH、羰基化蛋白含量采用分光光度法,AR mRNA 和RAGE mRNA检测采用RT-PCR法.结果 衰老模型组羰基化蛋白含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P＜0.01),而T-AOC、GSH/GSSG比值降低(P＜0.01),AR mRNA表达明显低于青年组(P＜0.01),而RAGE mRNA表达明显高于青年组(P＜0.01).车前子多糖和车前子水煎剂组各组T-AOC、GSH/GSSG、AHR,AR mRNA表达明显高于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01),而羰基化蛋白含量、MAO-B和RAGE mRNA表达显著低于衰老模型组(P＜0.05,P＜0.01).以车前子多糖大剂量组效果最明显.结论 车前子及其多糖可通过提高机体抗氧化能力和清除羰基能力而发挥抗脑老化作用,车前子多糖是其作用的重要成分.     

半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析

目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5’端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3.1(-)载体。采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达。结果准确快捷地将EFsec-基因补齐了其5’端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFsec,转染哺乳动物细胞后检测到了EFsec基因的显著表达。结论半合成-酶连法可以高效快捷地补齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础。     

人溶菌酶cDNA克隆与CHO/dhfr-细胞中的分泌性表达

目的探讨人溶菌酶(hLYZ)cDNA的克隆及在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO/dhfr-)中的分泌性表达。方法采用RT-PCR的方法,从人胎盘组织中克隆hLYZ cDNA,构建hLYZ真核分泌性表达载体,利用脂质体共转染CHO/dhfr-细胞,筛选得到表达hLYZ的CHO抗性细胞株。结果 hLYZ基因成功连接到真核分泌性表达质粒pSecTag2/HygroB上,hLYZ融合蛋白在二氢叶酸还原酶/CHO-k1表达系统中得到成功表达。结论成功构建真核可溶性表达载体pSecTag 2/Hypro-hLYZ,为规模化、工程化生产hLYZ奠定基础。     

RPL30基因哺乳动物表达载体的构建及其初步表达分析

目的克隆RPL30基因并构建其哺乳动物表达载体,然后将该基因导入人肝癌细胞系HepG2进行初步表达分析,并考察RPL30的超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。方法应用RT-PCR方法扩增出目的基因的全长编码区,并利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)。采用脂质体转染法转染HepG2细胞后应用RT-PCR法检测RPL30基因的表达以及其超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。同时在转染细胞中添加无机硒后研究其对RPL30和硒蛋白P基因转录水平的调控。结果成功地构建了RPL30表达质粒pcDNA3.1-RPL30,转染HepG2细胞后实现基因的超表达,相对于GFP对照转染细胞增加了4～5倍。然而,RPL30基因的超表达并没有显著提高硒蛋白P的转录水平。硒对RPL30基因的表达基本上没有影响,但却显著提高硒蛋白P的表达水平。结论 RPL30哺乳动物表达载体的成功构建以及RPL30超表达后的初步分析为下一步深入研究硒蛋白的生物合成机制打下了基础。     

脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建

目的 利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响.方法 利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达载体上,之后转化、筛选、酶切鉴定.最后脂质体法瞬时转染HK293T细胞,提取RNA检测这四个基因的表达情况.结果 成功构建了含脂肪去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体pcDNA3.1-EF,并在HK293T细胞中成功表达.结论 四基因表达载体pcDNA3.1-EF在HK293T细胞中成功表达,单个基因在表达载体中的次序对基因的表达没有明显影响.     

山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肾组织中Klotho基因表达的影响

目的研究山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肾组纵中Klotho基因表达变化的影响。方法昆明小鼠60只,随机分为青年对照组、衰老模型组、山茱萸多糖组,每组20只。采用D-半乳糖法制作衰老模型,以灌胃法给山茱萸多糖组小鼠灌服山茱萸多糖。采用分光光度法检测总抗氧化能力（T—AOC）和Mn—SOD活性水平,RT—PCR法检测Klotho和Mn—SOD基闪表达水平,Westernblot法检测Klotho蛋白表达最。结果与对照组比较,衰老组小鼠肾组织中Klotho基因、Mn—SOD活性和基斟表达均下降（P〈0．01）,总抗氧化能力（T—AOC）下降（P〈0．01）;与衰老模型组比较,山茱萸多糖组小鼠Klotho基困和蛋白表达明显升高（P〈0．01）、Mn-SOD基因表达和Mn-SOD活性明显增高（P〈0．01）,总抗氧化能力也显著提高（P〈0．01）。结论山茱萸多糖可能通过上调衰老小鼠肾组织中的Klotho表达和提高衰老小鼠抗氧化能力岍发挥抗衰老的作用。     

性交致胎盘早剥11例分析

选取2008年1月~2012年12月我院产科因性交导致胎盘早剥的11例患者,对其临床资料进行回顾性分析。结果 11例均以剖宫产结束分娩,其中死胎1例,死产2例。性交为引起胎盘早剥的重要因素之一,社会应增强人口素质,尤其是农村人员的素质,加强孕期管理,大力进行优生优育的宣传,避免对母婴造成伤害。     

开心丸治疗更年期抑郁症的临床观察

目的比较开心丸与西药治疗女性更年期抑郁症的临床疗效。方法将68例女性更年期抑郁症患者随机分为2组,分别应用开心丸与西药治疗,疗程4周,用抑郁自评量表(SDS)评定临床疗效。结果 4周末2组总有效率、SDS评分及E2、FSH、LH水平均有显著性差异。结论开心丸治疗抑郁症的临床效果优于西药。