海洋纤溶活性化合物FGFC1和FGFC2影响血小板聚集特性的研究

目的：研究新型海洋双吲哚纤溶活性化合物FGFC1对血小板聚集的影响,发现纤溶活性化合物FGFC1与血小板相关因子变化的关系,同时比较双吲哚化合物FGFC1和单吲哚化合物FGFC2作用于血小板的异同。方法：从新鲜兔血收集血小板,调整反应体系血小板密度,以乙酰水杨酸为阳性对照,采用微量比浊法分析FGFC1和FGFC2对血小板聚集率的影响,用酶联免疫法测定FGFC1和FGFC2对血小板生理因子含量的变化。结果：FGFC1对ADP和AA诱导的血小板聚集具有抑制作用,最大抑制率分别达到42.58%±1.7%和47.82%±2.18%;FGFC2对ADP、AA和胶原诱导的血小板聚集均具有抑制作用,最大抑制率分别为50.12%±1.02%、45.28%±1.09%和50.28%±2.12%。FGFC1与FGFC2均能提升血小板内环磷酸腺苷含量,且FGFC2能明显降低血小板内血栓素A2含量。结论：海洋双吲哚纤溶活性化合物显著抑制血小板聚集,FGFC1通过影响血小板环磷酸腺苷的含量实现抑制血小板聚集,FGFC2可能通过不止一种途径抑制血小板聚集。吲哚化合物抑制血小板聚集与分子结构密切相关。     

一株产类胡萝卜素海洋细菌的分离及系统分类学研究

目的 对一株分离自我国东海海域160 m深处产类胡萝卜素的海洋细菌进行形态学、生理生化特性及分子水平的系统分类学研究.方法 通过细菌形态学特征观察、生长条件、生理生化特征测定、全细胞脂肪酸成分分析、16S rRNA序列扩增、测序、比对及构建系统发育进化树,研究了该菌株的系统分类学特性;并通过高效液相色谱对该菌株的类胡萝卜素产出特性进行了分析.结果 该菌株与考克氏菌属(Kocuria sp.)相似度最高,顺-7-棕榈油酸/顺-6-棕榈油酸为该菌株的主要脂肪酸组分.结论 该菌株属于考克氏菌属,暂定名为考克氏菌CAR-red(Kocuria sp.CAR-red)株.     

水鲨头皮胶原蛋白分离及其部分特性研究

目的从水鲨头皮分离得到胶原蛋白并研究其部分生化特性。方法水鲨头皮用不同浓度的氢氧化钠溶胀，去离子水清洗至中性，经胃蛋白酶限制性酶解，离心，上清液经透析后冷冻干燥，得到胶原蛋白制品。用聚丙烯酰胺凝胶电泳、差式扫描量热仪（DSC）、圆二色谱仪等研究了分离得到的胶原蛋白的特性。结果胶原蛋白的回收率为鲜重的2．9％-4．1％；在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电脉（SDS—PAGE）上呈现清晰的3条谱带，相对分子质量分别为205000、134000、118000，热变性温度为69℃。结论分离得到的胶原蛋白可进一步用于微囊剂、纳米材料等生化材料的研究。     

盐效应分离纤溶活性化合物FGFC1

目的探索通过盐效应分离长孢葡萄穗霉FG216(Stachybotrys longispora 216)发酵液中纤溶活性化合物FGFC1(fungi fibrinolytic compound 1)的方法。方法长孢葡萄穗霉FG216经过种子液培养和发酵培养获得的发酵液经浓缩后添加氯化钠、氯化铵和氯化钙至不同饱和度,用乙酸乙酯萃取,通过HPLC检测FGFC1的分离效果,并分析FGFC1的质谱和光谱特性。结果随着氯化钠、氯化铵和氯化钙的饱和度从20%升高到90%,氯化钠和氯化钙的盐效应分离作用效果呈现逐渐增强的趋势,60%饱和度的氯化钠能达到18.8 mg/mL的FGFC1提取率,是甲醇分离方法的118%,采用盐效应分离和用甲醇分离获得的FGFC1的质谱和光谱特性一致。结论用氯化钠盐效应分离长孢葡萄穗霉FG216发酵液中FGFC1是一种有效的分离方法,该盐效分离结果符合盐效分离的基本理论。     

一种新型合成水蛭肽纤溶动力学研究

目的 研究水蛭肽Hirulog-s影响单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用考察新型合成水蛭肽的纤溶作用特性。方法 构筑单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（pro-uPA）和纤溶酶原（plg）相互活化反应体系,添加Hirulog-s成反应体系不同浓度,比较pro-uPA和plg相互活化反应体系中纤溶酶（plm）作用于pro-uPA反应的酶促反应动力学常数（Km,kcat）,分析Hirulog-s对plm作用于pro-uPA反应的催化速率及亲和性。纤溶活性作用检测采用底物酶促反应法,酶促反应动力学常数的测定基于基于单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的反应。 结果 在plm作用于pro-uPA的反应体系中,30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat值增大了3.1倍,Km值减小了1.6倍,表明Hirulog-s可以显著提高plm的最大催化速率同时增强亲和性。30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat/Km值增大了4.75倍,表明Hirulog-s明显提高了plm的催化效率。通过活性对比表明Hirulog-s的纤溶活性强于水蛭肽Hirulog-1。 结论 Hirulog-s促进单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用而发挥纤溶作用,新型合成水蛭肽从酶促反应动力学参数显示出优良的纤溶作用特性。     

温和条件下分离马胶鲨皮胶原蛋白的方法及其部分特性研究

目的探讨分离马胶鲨皮胶原蛋白的方法以及马胶鲨皮胶原蛋白的部分生物化学特性。方法马胶鲨皮经清洗、浸泡、匀浆、离心得上清液。沉淀重复上述的提取过程，合并上清液，加硫酸铵沉淀胶原蛋白，回收的沉淀溶于磷酸盐缓冲液，经葡聚糖凝胶过滤后，蛋白溶出液被冷冻干燥。用聚丙烯酰胺凝胶电泳法、差示扫描量热仪法、圆二色谱仪法表征了通过上述磷酸盐缓冲液溶胀分离法获得的胶原蛋白的特性。结果用磷酸盐缓冲液溶胀分离法从马胶鲨皮分离得到胶原蛋白，胶原蛋白的回收率为鲜重的3．2％～3．4％；分离的胶原蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现清晰的三条谱带，分子质量分别为205000、134000、118000；马胶鲨皮胶原蛋白的最高热变性温度为47℃；分离的马胶鲨皮胶原蛋白在空间结构上以β-折叠为主，并包含有大量的无规卷曲。结论本研究所制备的高纯度胶原蛋白可用于生物医学材料的进一步研究。     

海洋微生物来源纤溶活性化合物的筛选及其分离

目的 从海洋微生物的次生代谢产物中分离具有纤溶促进作用的化合物.方法 采用选择性培养基从海水样品中分离细菌、真菌和放线菌,利用发色底物法筛选产纤溶活性化合物的菌株和确定菌株发酵培养基,通过HPLC分离活性化合物.结果 从离岸100 m处采集的31个海水样品中获得分离菌株936个,从霉菌FG216的次生代谢产物中,发现了具有纤溶促进作用的活性化合物,采用改良的察氏培养基作为发酵培养基,代谢产物的纤溶促进效果最好,并从FG216的发酵液中分离和精制了活性化合物.结论 从海洋微生物的代谢产物中得到了具有纤溶促进作用的活性化合物.     

美洲不同品种海参营养成分的比较分析

摘要：目的 比较美洲不同品种干海参营养成分的差异,发现美洲海参的不同品质特性。方法 基本理化指标采用国标法;胶原蛋白含量采用羟脯氨酸试剂盒法;皂苷采用紫外分光光度法;岩藻聚糖采用Discher法;硫酸软骨素采用高效液相色谱法。采用综合评分法,判断7种海参的优劣。结果 7种美洲干海参的含沙量,水分含量,盐分,复水干重率,蛋白质含量分别在0.61%～6.48 %,2.04%～9.26%,8.58%～43.74%,50.39%～77.18%和38.09%～68.45%之间。水溶性还原糖,皂苷,岩藻糖含量分别在0.55 g/100 g ～ 1.08 g/100 g,0.40 g/100 g ～3.70 g/100 g和1.46 g/100g ～5.57 g/100g之间。胶原蛋白,硫酸软骨素含量分别在42.18 mg/g ～ 66.27 mg/g和0.63 mg/g ～1.02mg/g之间。综合评分的结果显示,7种美洲干海参以乌皱辐肛参和小黑米刺的品质较优。结论 7种海参在营养成分上存在一定的差异,但均含胶原蛋白、皂苷、岩藻聚糖、硫酸软骨素等活性物质。7种美洲干海参品质评价的综合顺序是乌皱辐肛参＞小黑米刺＞白底辐肛参＞黑玉参＞加拿大海参＞阿拉斯加红参＞智利瓜参。     

海洋长孢葡萄穗霉菌生物合成纤溶活性化合物的研究

目的 基于FG216（Fungus stachytotrys longispora）产生纤溶化合物FGFC1（Fungi fibrinolitic compound 1）的可能生源途径,调控其次生代谢过程,获得新型纤溶活性或者其他活性化合物。方法 FG216经过种子培养和发酵培养,在发酵培养结束前24 h,添加ADP、色氨酸、柠檬酸三钠、赖氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺等8种代谢产物调节剂（metabolite regulator,MTRL）,添加量为发酵液的1%,用HPLC（High-pressure liquid chromatogram）检测FG216代谢产物产出情况。结果 添加鸟氨酸为MTRL的FGFC1的产量增加至950 mg/L,苯丙氨酸为MTRL的FG216代谢产物的HPLC图谱出现2个新的化合物峰。色氨酸为MTRL的FG216代谢产物的HPLC图谱出现3个新的化合物峰。ADP、柠檬酸三钠、赖氨酸、组氨酸、天冬酰胺为MTRL的FG216代谢产物的HPLC图谱未出现新的化合物峰。分离纯化5种目标化合物CA、CB、CC、CD、CE在纤溶活性评价反应体系（10 μg/mL）,其纤溶活性分别是FGFC1的30%、90%、50%、110%、17%。结论 采用恰当的FG216发酵MTRL,能产生新型的纤溶活性化合物,推测通过调控代谢生源途径,能从FG216挖掘出活性更强或结构新颖的纤溶化合物。     

大青鲨Ⅱ型胶原蛋白灌胃诱导免疫耐受治疗类风湿关节炎

目的:研究大青鲨Ⅱ型胶原蛋白(shark typeⅡcollagen,SCⅡ)灌胃诱导免疫耐受治疗类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)的疗效和机制。方法:60只大鼠随机分为6组,除空白对照组以外的其他大鼠以弗式完全佐剂诱导RA模型。模型对照组大鼠灌服0.2ml浓度为0.05mol/L的乙酸溶液,其余各组大鼠分别灌服0.2ml 1mg/ml牛源Ⅱ型胶原蛋白(bovine typeⅡcollagen,BCⅡ)、1和3mg/ml SCⅡ、10mg/ml雷公藤多苷溶液(均以0.05mol/L乙酸溶液为溶剂)诱导免疫耐受。以迟发型超敏反应、循环免疫复合物、白介素-10血清水平、踝关节组织形态学和软骨表面修复状况共5个指标来评价SCⅡ治疗RA的疗效。通过体外细胞实验研究SCⅡ诱导免疫耐受的机制。结果:SCⅡ能通过灌胃诱导免疫耐受,减少迟发型超敏反应,使循环免疫复合物呈阴性,显著提高白介素-10的水平,修复踝关节软骨表面损伤,显著增加CD4+T淋巴细胞Fas/Apo-1的数量。SCⅡ治疗RA的疗效优于雷公藤多苷和BCⅡ,最佳剂量为3mg.kg-1.d-1。结论:RA大鼠模型灌胃SCⅡ可诱导免疫耐受,对RA有较好疗效。