16个产地地乌药材的系统鉴定及质量评价

目的:构建地乌药材基原物种系统鉴定体系,并对全国16个产地的地乌药材进行综合品质评价,为地乌药材产地选择及临床用药安全奠定基础。方法:使用传统鉴别方法结合DNA条形码核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2)序列分子鉴定技术快速鉴别地乌药材真伪,并基于HPLC-UV对地乌药材中5个有效成分进行含量测定,采用Welch Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.01%三氟乙酸溶液(30∶70),检测波长210 nm,柱温30℃,流速1.0 mL·min-1。结果:传统鉴别及DNA条形码快速鉴别技术均能准确鉴别地乌药材真伪。BLAST比对分析发现,16个产地地乌药材均与林荫银莲花Anemone flaccida具有最大相似度;基于多指标成分含量测定表明湖北恩施板桥镇的地乌药材中5个三萜皂苷类成分含量之和最高(10.59%),其次为贵州毕节赫章(6.28%)和湖北长阳都镇湾(5.64%)。结论:DNA条形码技术可作为地乌药材传统鉴定技术的有效补充,该鉴别体系可保障地乌药材基原准确及临床用药安全。HPLC多指标成分综合评价及聚类分析结果表明在本研究所涉及的产地中,湖北恩施、长阳、五峰,贵州毕节和重庆金佛山的地乌药材质量较优,可作为地乌药材的重要产地。     

矿物药阳起石XRD Fourier指纹图谱研究

目的：建立矿物药阳起石的X射线衍射（X-Ray Diffraction,XRD） Fourier指纹图谱,为阳起石药材的鉴定提供新方法。方法：采用粉末XRD技术对矿物药阳起石进行分析,测定其XRD Fourier指纹图谱;以指纹图谱为对照,根据不同样品XRD图谱中各特征峰相对强度,以夹角余弦法和相关系数法计算各样品XRD图谱的相似度,并做聚类分析。结果：获得10批正品、3批掺杂阳起石药材和2批伪品的XRD图谱,其中10批正品图谱几何拓扑特征基本一致;利用该10批正品阳起石样品XRD图谱得到由18个共有特征峰组成的阳起石XRD指纹图谱;相似度分析显示,15批样品中,不同正品样品XRD图谱共有峰相似度均较高（>0.98）,掺杂样品相似度略低（0.85-0.97）,伪品样品相似度最低（<0.2）,三者相似度具有明显差异,可加以区分;聚类分析结果与相似度分析结果一致。结论：X射线衍射指纹图谱分析方法专属性强,准确可靠,可实现对矿物药阳起石的鉴别和质量评价。     

基于NIRS和PCA-SVM算法快速鉴别4种含铁矿物药

目的基于NIRS和PCA-SVM算法快速鉴别磁石、自然铜、蛇含石、赭石。方法采集各样品的近红外光谱(NIRS),分别采用不同方法进行光谱预处理及PCA降维,通过网格搜索法寻优建立SVM模式识别模型。对比不同预处理方法及所建PCA-SVM模型的预测准确率,确定最佳预处理方法和最佳主成分,建立4种含铁矿物药快速鉴别模型。结果光谱最佳预处理方法为矢量归一化法(VN),最佳主成分为PC1和PC2。所建模型对训练集和验证集样品预测准确率均达到100%,模型五折交叉验证准确率亦达100%。结论所建的4种含铁矿物药NIRS的PCA-SVM鉴别模型预测能力强,可用于上述4种含铁矿物药的快速鉴别。     

冬凌草IrCYP71基因的克隆和功能

目的:克隆冬凌草二萜类化合物生物合成途径下游关键酶基因Ir CYP71,进行序列特征分析,对此基因编码的蛋白进行原核表达分析以及亚细胞定位,并对蛋白在宿主细胞表达的条件进行了优化。方法:根据转录组测序所得的Ir CYP71基因片段,克隆出全长c DNA序列;构建p ET28a(+)-Ir CYP71重组质粒,转化到Rosetta感受态细胞,小量表达和大量表达蛋白并鉴定,进行包涵体蛋白的纯化与复性,再对复性蛋白纯化鉴定分析。基于gateway克隆技术构建出PCR8/GW/TOPO-Ir CYP71载体之后与改造Pearleygate104载体重组,之后与农杆菌GV3101重组,转入烟草中瞬时表达,从而进行蛋白亚细胞定位。结果:克隆得到的Ir CYP71基因全长c DNA为1 593 bp,编码530个氨基酸,并在Gen Bank注册(登录号MG800628)。经大肠埃希菌表达系统表达的重组蛋白相对分子质量正确,在62 k Da左右,纯化后的重组蛋白总量有1 mg,蛋白纯度为85%。此蛋白亚细胞定位在细胞核。结论:对冬凌草Ir CYP71基因进行了初步验证,并对基因表达的蛋白进行原核表达和亚细胞定位,使该基因在冬凌草二萜成分的生物合成过程中的作用得到了进一步的阐述。     

利用SEM图和XRD指纹图谱鉴别矿物类中药生石膏与玄精石

摘要：目的:采用性状鉴别、理化鉴别等传统方法结合扫描电子显微镜（SEM）及粉晶X-射线衍射（XRD）等现代分析技术,对矿物类中药生石膏和玄精石进行系统鉴别。方法:采集生石膏和玄精石样品,记录原药材及其粉末性状特点,进行理化鉴别,确定样品真伪及品种。在上述基础上,采集各药材样品SEM显微图,对比生石膏与玄精石各显微图之间的差异,总结两者SEM鉴别特征;同时采集各样品粉末的XRD图谱,分别计算并绘制生石膏与玄精石的XRD平均图谱,确定共有指纹峰,并对共有指纹峰相对强度数据分别进行相似度评价、聚类分析和主成分分析（PCA）,验证生石膏与玄精石的XRD共有指纹峰用于两者鉴别的可行性。结果:生石膏和玄精石碎屑的SEM特征具有差异,玄精石均呈疏松层片状堆叠,细小碎屑均成沙粒状;而生石膏呈紧密聚合的长纤维状,且细小碎屑或粉末具碎裂状纤维特征。生石膏和玄精石粉末的XRD图谱峰位相似,但玄精石各峰相对生石膏各峰略左移,相同峰位衍射峰的相对强度存在差异。相似度评价显示生石膏与玄精石明显分离,聚类分析及主成分分析均可将两者准确区分。结论:SEM和XRD技术均可准确鉴别生石膏和玄精石及其粉末,传统鉴别方法结合SEM和XRD分析技术能够为生石膏和玄精石及其粉末的快速鉴别和质量控制提供快速准确的新方法。     

刺络放血疗法治疗过敏性紫癜性肾炎的临床研究

目的：分析中西医结合用药治疗脑出血后脑积水的临床效果。方法：选取64例脑出血后脑积水患者,平均分成试验组和对照组各32例,对照给予单纯西药治疗,试验组给予中西医结合治疗,比较两组的临床疗效和神经功能缺失情况。结果：试验组患者总有效率明显高于对照组患者,P〈0.05,差异有统计学意义;两组患者治疗后的神经功能缺损评分均明显低于本组治疗前,P〈0.05,差异有统计学意义;治疗后试验组患者神经功能缺损评分明显低于对照组患者,P〈0.05,差异有统计学意义。结论：中西医结合治疗脑出血后脑积水效果明显好于单纯应用西药治疗,神经功能缺失情况也大有改善,建议临床广泛推广使用。     

Box-Behnken响应面法优化姜半夏产地加工炮制一体化工艺

目的：优化姜半夏产地加工与炮制一体化工艺,为姜半夏一体化饮片生产规范的建立提供参考。方法：采用Box-Behnken响应面法设计分析,以外观性状、水溶性浸出物、白矾含量、草酸钙含量的综合评分为评价指标,考察鲜半夏干燥失水率、加水量、煮制时间3个因素,对姜半夏产地加工炮制一体化工艺进行优选;同时对最佳工艺条件的一体化姜半夏祛痰药效进行验证。结果：姜半夏一体化生产的最佳工艺为半夏去皮后,趁鲜加入2倍量的水,与生姜、白矾共煮4 h,取出,干燥。该工艺生产姜半夏饮片可显著增加小鼠气管酚红排泄量（P<0.01）。结论：响应面法优选的姜半夏产地加工炮制一体化工艺简易可行、质量稳定,可用于姜半夏一体化饮片生产。     

半夏白绢病病原菌鉴定、生物学特性测定及防治药剂筛选北大核心CSCD

湖北省多个半夏种植基地在2020年夏季发现严重的白绢病病害,导致植株叶片黄化枯萎,块茎腐烂。为明确半夏白绢病致病菌及其生物学特性,并筛选有效的防控药剂,该研究按照科赫法则对其病原菌进行分离、纯化、菌株鉴定及致病性测定,并研究病原菌的生物学特性,在此基础上,结合平板和活体2种药剂筛选方法确定最有效的防控药剂。结果表明,半夏白绢病病原菌菌丝体为白色羽毛状,菌丝层上可产生大量白色至黑褐色菌核。结合形态学鉴定和基于LSU、TEF基因序列的分子鉴定,将该致病菌鉴定为罗耳阿太菌Athelia rolfsii。最适生长温度为30℃、最适生长pH为5~8;菌核的最适萌发温度为25℃,最适萌发pH为7~9。平板药剂筛选中对白绢病病原菌具有良好抑制作用的杀菌剂分别为枯草芽孢杆菌、苯醚甲环唑、氟硅唑,三者EC均小于5 mg·L^(-1);活体药剂筛选结果显示具有较好杀菌效果的杀菌剂为噁霉灵和苯醚甲环唑,综合筛选试验结果,苯醚甲环唑可作为防治半夏白绢病的主推使用药剂。     

酸枣仁汤镇静催眠作用的有效部位筛选

目的筛选出酸枣仁汤具有镇静催眠作用的有效部位。方法昆明小鼠随机分为17组,每组10只,每日1次灌胃给药7d,观察酸枣仁汤及其挥发油、脂肪油、多糖、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、其它部位对小鼠自主活动和对阈下、阈上剂量戊巴比妥钠所致睡眠动物数和睡眠时间的影响,并考察各供试物对小鼠血清NO、NOS含量及胸腺、脾脏指数的影响,以地西泮进行平行对照实验。结果与空白组相比,脂肪油、挥发油、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和酸枣仁汤组能使小鼠的自主活动次数均明显减少;挥发油、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和酸枣仁汤组能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠入睡小鼠只数;脂肪油、挥发油、乙酸乙酯部位、正丁醇部位能缩短小鼠睡眠潜伏期,氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和酸枣仁汤组能明显延长戊巴比妥钠阈剂量小鼠的睡眠时间。结论酸枣仁汤中脂肪油、挥发油、乙酸乙酯部位、正丁醇部位均具有镇静催眠作用,氯仿部位仅具有催眠作用。