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1.
背景 恶性黑色素瘤是体表肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤,高度侵袭转移性是其重要的生物学特征之一,亦是其预后不良的主要因素。肿瘤转移相关因子RhoC可通过多种转移相关机制参与肿瘤的侵袭与转移,是控制肿瘤转移的分子开关,RhoC有望成为抑制肿瘤转移的重要靶位。目前应用RNAi技术靶向RhoC基因对黑色素瘤侵袭转移能力的影响尚未见报道。本研究拟利用RNAi技术,以慢病毒作为基因载体,以人黑色素瘤A375细胞作为研究对象,以转移相关基因RhoC作为靶基因,研究靶向RhoC基因慢病毒干扰载体的构建并检测对RhoC的沉默效应。
方法 根据RhoC编码区基因信息设计构建三条pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,通过检测其对A375细胞RhoC 的沉默效应筛选出最有效的靶序列。将RNAi效应最佳序列进行慢病毒包装构建形成靶向RhoC 的pLenti6.3-EGFP-453慢病毒表达载体,并感染A375细胞,进一步应用荧光定量PCR和Western blot检测对RhoC mRNA及蛋白表达的沉默效应,应用Transwell小室细胞侵袭实验检测 A375细胞侵袭能力。
结果 构建的三对shRNA表达载体分别为pGPU6/GFP/Neo-shRNA336、pGPU6/GFP/Neo-shRNA453及pGPU6/GFP/Neo-shRNA680,应用荧光定量PCR和Western blot检测转染人黑色素瘤A375细胞后靶基因RhoC mRNA和蛋白表达水平分别为1.47±0.26、1.13±0.16、1.39±0.11和70.98±9.21、50.67±6.06、65.77±4.06,RhoC453为最佳干扰序列。成功构建了靶向RhoC的pLenti6.3-EGFP-453慢病毒表达载体,经测序证实序列正确;将构建的pLenti6.3-EGFP-453慢病毒表达载体感染A375细胞,应用荧光定量PCR和Western blot检测RhoC mRNA和蛋白的表达水平分别为1.05?0.05、62.04?15.86,而阴性对照慢病毒组、正常对照组RhoC mRNA和蛋白分别为4.21±0.24、220.86±24.07和4.63±0.32、257.39±12.30,Transwell小室细胞侵袭实验结果显示pLenti6.3-EGFP-453慢病毒组穿膜细胞数为40.41±8.88,阴性对照慢病毒组、正常对照组分别为64.82±13.48和77.46±6.47,慢病毒表达载体组较对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论 成功构建的靶向RhoC基因的pLenti6.3-EGFP-453慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人黑色素瘤A375细胞,并可显著抑制靶基因RhoC的表达和细胞的侵袭能力。 相似文献
2.
硅胶假体隆乳6个月~8年并发症19例 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:有很多选择可用于硅胶假体隆乳后并发症的矫治。目的:观察硅胶假体隆乳并发症患者的再次隆乳效果。方法:选择2005-09/2009-09郑州大学第一附属医院整形外科收治的固体硅胶假体隆乳后6个月~8年出现假体移位、乳房下垂、纤维包膜挛缩女性患者19例。行以乳头为圆心,以假体的半径加3cm为半径画圆标记出分离胸大肌后腔隙边缘,采用乳晕缘下半环切口入路,更换硅胶假体,将乳房假体置入胸大肌后间隙,然后将醋酸曲安奈德注射液50mg以及庆大霉素注射液160mg注入囊腔,一期完成并发症的矫治。结果与结论:19例患者再次假体置入后8~10周不良形态消失,均未再出现过假体移位、乳房下垂、纤维包膜挛缩等并发症。19例患者随访时间大于6个月,恢复效果满意。 相似文献
3.
目的:了解STAT3、p27在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)发病机制中的作用。方法:采用免疫组化SP法检测了54例皮肤恶性黑色素瘤、22例交界痣、20例正常皮肤组织中STAT3、p27的表达,并分析STAT3、p27两者的相关性。所有数据采用SPSS17.0统计软件包行卡方检验及相关性分析,检验水准仅=O.05,χ^2分割检验标准α=0.0167。结果:①STAT3蛋白在CMM中阳性表达率为77.8%,在皮肤交界痣和正常皮肤中阳性表达率分别为45.0%、35.O%。CMM与皮肤交界痣、正常皮肤相比差异有统计学意义(P〈0.0167),皮肤交界痣与正常皮肤相比差异无统计学意义(P〉0.0167);②p27蛋白在CMM中阳性表达率为16.7%,在皮肤交界痣和正常皮肤中阳性表达率分别为86.4%、95.O%。CMM与皮肤交界痣、正常皮肤相比差异有统计学意义(P〈0.0167)。皮肤交界痣与正常皮肤相比差异无统计学意义(P〉O.0167):③STAT3表达与p27表达呈负相关(P=-0.000,r= 0.478)。结论:STAT3蛋白可能在CMM的发生、发展中发挥促进作用;p27蛋白在CMM发生中可能起抑癌作用。 相似文献
4.
5.
目的研究中原地区正常青年女性有关腹部形态的参数,为腹壁成形术和脐的重建移位术提供参考。方法测量281例健康未婚未育17~20岁女性的身高、体重、腹部长径、横径及脐点位置,并对所测数据进行统计学分析。结果测量数据显示腹部长径、横径、剑突下缘至脐点、剑突下缘至腹部长径中间点距离分别是(37.93±2.15)、(36.98±2.71)、(21.10±1.80)、(18.96±1.08)cm。腹部长径与身高呈正相关;腹部横径及腹部长径/横径与体重呈正相关。脐点位置低于腹部长径中间点约2.1cm。结论腹部正面轮廓形态测量在腹壁、脐成形手术中具有一定的临床参考意义。 相似文献
6.
目的:检测Runx3和Ki-67蛋白在皮肤恶性黑色素瘤(CMM)中的表达水平,以探讨Runx3和Ki-67在CMM发生、发展过程中的作用。方法:采用免疫组织化学法研究Runx3和Ki-67蛋白在皮肤恶性黑色素瘤、皮肤交界痣及正常皮肤中的表达。结果:Runx3蛋白在CMM中阳性表达率为23.68%,与皮肤交界痣(85.00%)和正常皮肤(90.00%)相比,差异具有统计学意义(P〈0.05);Ki-67蛋白在CMM中阳性表达率为78.95%,与皮肤交界痣(25.00%)和正常皮肤(25.00%)相比差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:皮肤恶性黑色素瘤的产生可能与Runx3蛋白的表达降低及Ki-67蛋白的表达升高有关。 相似文献
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2009年12月我们对603名健康未婚青年女性上肢进行了形态测量和分析研究,以期为美容医学提供美学形态学依据,为中国女性健康积累相关资料.
1 对象与方法
1.1 对象 河南省各个地区应征入伍的未婚女兵603名,汉族,年龄17~24岁,身高155~179 cm,体质量40~78 kg.1.2测量指标与方法各指标均根据<人体测量手册>[1]进行定点、定位. 相似文献
8.
皮肤撕脱伤撕脱皮肤的再利用 总被引:5,自引:0,他引:5
我科自 1976年 1月~ 1996年 12月对 10 4例撕脱的皮肤再利用 ,随访效果满意 ,报告如下。1 临床资料本组 10 4例 ,男 6 1例 ,女 43例。年龄 2个月~ 6 8岁。皮肤撕脱部位 :头面部 2 7例 ,上肢 45例 ,下肢 2 8例 ,会阴 4例。皮肤撕脱范围最大者为 1例全下肢创面 70 cm× 40 cm 相似文献
9.
瘢痕疙瘩发病及治疗后复发的临床相关因素分析 总被引:3,自引:2,他引:1
目的 总结分析瘢痕疙瘩发病及治疗后复发的相关因素.方法 对经手术切除+放射治疗、曲安奈德局部注射、手术治疗+药物外用3种治疗方法 的476例瘢痕疙瘩病例进行分析.结果 476例,22~45岁女性多发,女:男为1.83∶1.00;外伤与耳部穿孔是最常见的诱发原因;瘢痕疙瘩复发与家族史、治疗方法 、瘢痕位置有关,与患者年龄、性别、瘢痕大小、病程、发病诱因无关.结论 手术切除+放射治疗、曲安奈德局部注射是较为有效的治疗方法,部分瘢痕疙瘩的发生与遗传有关,应重视瘢痕疙瘩的致病基因研究. 相似文献
10.
目的 检测Livin和Caspase-9蛋白在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达,并探讨其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测56例SCC组织、20例正常皮肤组织中Livin和Caspase-9蛋白的表达.结果 SCC组织中Livin蛋白的阳性表达率(73.2%)高于正常皮肤组织(0.0%),差异有统计学意义(p<0.05);Livin蛋白的表达与肿瘤的分化程度显著相关,其阳性率随SCC病理分级的降低而升高,差异有统计学意义(P<0.05);在有淋巴结转移的SCC组织中的阳性率(93.3%)明显高于无淋巴结转移者(65.9%),差异有统计学意义(P<0.05).SCC组织中Caspase-9蛋白的阳性表达率(30.4%)低于正常皮肤组织(90.0%),差异有统计学意义(P<0.05);在SCC中Caspase-9蛋白的表达与肿瘤的分化程度显著相关(P<0.05),即随SCC病理分级的增高而升高;有淋巴结转移的SCC组织中Caspase-9蛋白的阳性表达率(6.7%)低于无淋巴结转移者(39.0%),差异有统计学意义(P<0.05).两种蛋白在SCC组织中的表达呈负相关(rs=-0.612,P <0.05).结论 Livin在SCC组织中高表达,Caspase-9在SCC组织中低表达,且与Livin的表达呈负相关,提示两者可能共同参与SCC发病过程. 相似文献