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1.
人肿瘤坏死因子α组合突变体生物学特性的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究hTNFα的结构与功能。方法 比较了野生型hTNFα与其单突变体R2K-、N30S-、R32W-和L157F-hTNFα及两种组合突变体R32W-L157F-hTNFα和R2K-N30S-R32W-L157F-hTNFα的细胞毒活性、受体结合能力,以及动物体内毒性。结果 发现两种组合突变体基本保持了与野生型相当的对人肿瘤细胞的细胞毒活性,但对小鼠L929细胞的活性明显下降;两种组合突变体与hTR75的结合能力的下和程度要大于hTR55;小鼠体内毒性测定实验表明,两种组合突变体的毒性显著降低,其中双突变体的LD50为野生型的300倍左右,而四突变体对恒河猴的体内毒性也比野生型hTNFα明显降低。结论 获得具有潜在应用价值的TNF-α四突变体。  相似文献   
2.
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发展机理尚未完全阐明,目前认为与自身免疫密切相关,Ⅱ型胶愿蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ)是最可能的自身抗原(1).国外的研究提示,CⅡ的这种免疫活性主要一现在其250-270片段(hCⅡ250-270)上[1,2].本文用基因工程的方法,选用大肠杆菌(E.coli)偏爱密码子,化学合成优化该片段的基因组成,利用酶切位点将其串联成六聚体,并在E.coli中进行表达,获得大量重组hCⅡ250-270的类似物,为进一步研究该段活性肽的功能提供条件.  相似文献   
3.
将1株分别来自单纯疱疹病毒McAb(重链)和出血热病毒McAb(轻链)的杂化单链抗体基因序列,在SGI图形工作站上,利用同源蛋白结构预测的方法,建立起了其三维结构模型,以寻找轻、重链空间结构的相互关系,观察抗体的结构及表面静电性和疏水性的变化。结果表明,杂化链抗体的轻、重链位置得当,轻链参与组成了“疏水口袋”的形成,并有约五分之二的“袋口”部分由其围成,Linker链位置贴切,游离于轻、重链之外。轻、重链的3个超变区围绕于疏水口袋附近。这一研究为进一步分析轻、重链在抗体功能中的作用,以及改造抗体并提高抗体活性等方面提供了一种途径。  相似文献   
4.
本文在利用TF-1细胞检测rhIL-3和rhEPO生物学活性中,对MTT比色法与3H-TdR掺入法的测活结果进行了比较,认为两种方法的测活结果无显著差异(P>0.05),从而为简化这两种细胞因子的测活步骤提供了一定的理论依据。  相似文献   
5.
本研究将聚合酶链反应和生物素探针点杂交相结合,可直接从5μl 血清中检测到10fgHBV DNA。应用此方法检测20例 HBsAg 和 HBeAg 阳性病例,HBVDNA 均阳性;20例 HBsAg 阳性、HBeAg 阴性病例中,有8例阳性;20例健康献血员中,亦有1例检出 HBV DNA。结果表明这是一种灵敏可靠,适合于基础及临床广泛使用的 HBV DNA 非同位素检测法。  相似文献   
6.
作者将从国内有关实验室引进的一株受支原体污染的人红白血病细胞系TF-1,通过清除支原体和有限稀释法进行克隆化,获得一株对人IL-3,IL-5,GM-CSF和EPO均高度敏感的TF-1细胞亚克隆,并建立了稳定而敏感的人IL-3,IL-5,GM-CSF及EPO生物学活性检测方法.本方法的建立不仅可用于研究这四种细胞因子的表达调控和生物工程生产中这些细胞因子活性定量,而且还可用于这些细胞因子与其受体的相互作用以及受体的结构与功能关系的研究。  相似文献   
7.
抗人IL-3McAb杂交瘤细胞系的制备与鉴定黄传书,鞠躬(第四军医大学神经科学研究所神经免疫研究室,西安710032)陈常庆,杨立宏(中国科学院上海生物工程中心,上海200233)1987年荷兰学者Derssers从分裂原刺激人外周血细胞。cDNA文...  相似文献   
8.
获取HBV前S区基因,并进行序列测定,为今后研究其机理及应用创造条件。方法:用PCR方法从含HBV基因组的模板中扩增PreS基因,重组入Blue-script载体,用自动测序仪,采用荧光素标记的引物,测定基因的序列,结果:成功地扩增到PreSAQ WG TA AD  相似文献   
9.
表达载体pRSET C重组rhTNF—β的表达及其纯化   总被引:2,自引:0,他引:2  
将hTNF-β N端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSET C的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNF-β获得了高表达,表达量占细胞总蛋白的26%,其表达产物大部分以可溶性形式形成。菌体裂解上清经0.45μm的滤膜过滤后,用固定化金属配体亲和柱层析,纯度可达95%左右;经肠激酶酶切后,具有TNF-β的细胞毒活性,此活  相似文献   
10.
从两株具有高亲和力及中和活性的抗人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)的单抗杂交瘤细胞株1C3、3F6中分别提取总RNA,通过RT-PCR扩增并克隆了抗体的VL、VH基因。核苷酸序列分析表明,所克隆基因均为抗体的VL、VH基因,并分别属于Kappa链Ⅳ亚组和重链Ⅲ(D)亚组。此外,两抗体可变区分子模型及与hTNF-α的结合模型的建立及分析,为进一步的基因工程抗体研究及抗原-抗体相互作用机理的研究奠定了基础。  相似文献   
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