非水反相液相色谱法测定三黄片中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量

三黄片是一种常用中成药 ,大黄为君药 ,而大黄的主要活性成分为大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等蒽醌类成分。《中华人民共和国药典》2 0 0 0年版采用反相高效液相色谱法测定三黄片中大黄素、大黄酚的含量 ,采用的流动相为甲醇 - 0 .1 %磷酸水溶液 ( 85∶ 1 5 )。其他文献也报道了多种测定蒽醌类成分的方法 ,如薄层色谱法 [1] 、反相高效液相色谱法 [2 ]等 ,最为常用的是反相液相色谱法 ,其流动相均含一定比例的水 ,测定蒽醌类成分所需时间长、峰对称性差、理论板数低。本实验采用非水反相液相色谱法测定三黄片中的大黄酸、大黄素、大…     

HPLC法测定灌胃虎杖提取物大鼠粪便及尿液中大黄素和大黄素甲醚

蒽醌类化合物具有消炎、抗菌、致泻、利尿以及抗肿瘤、抗病毒等作用，是大黄、虎杖、何首乌、决明子等中药的主要活性成分。蒽醌类化合物有游离型和结合型两种存在形式。结合型蒽醌不吸收，在肠道内被细菌代谢后产生泻下作用，因此结合型蒽醌在肠道内的吸收、代谢与其药动学有关。已有的药动学研究均为测定血清或血浆中的蒽醌类成分，由于代谢物中成分复杂，干扰较多，因此本实验建立了测定大鼠灌胃虎杖提取物后的粪便和尿液中的游离型和结合型大黄素总量的非水反相液相色谱法。     

高效液相色谱法测定盐酸萘替芬的含量

目的:建立非水反相高效液相色谱法测定盐酸萘替芬的含量.方法:采用Phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),乙腈为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长254nm.结果:盐酸萘替芬在9.7～29.1 mg·L-1浓度范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 9.平均回收率为100.3%,RSD＜0.78%.结论:本方法简便,快速,准确,可用于盐酸萘替芬的快速含量测定.     

功能未知基因C17orf77重组蛋白及多克隆抗体的制备

目的体外克隆表达C17orf77重组蛋白,制备其多克隆抗体,初步探索该蛋白的生物学作用,观察其细胞系分布特征。方法以HepG2细胞cDNA为模板,PCR扩增C17orf77目的基因片段,构建pET-32a(+)-C17orf77原核表达载体。转化大肠埃希菌,IPTG诱导C17orf77重组蛋白表达并进行Western blot鉴定。以重组蛋白免疫大耳白兔,获得兔抗C17orf77蛋白多克隆抗体,并分析其特异性及检测效价。MTT法观察不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响。利用Western blot观察C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况。结果 PCR扩增获得C17orf77基因片段,成功诱导表达了C17orf77重组蛋白。制备了多克隆抗-C17orf77,ELISA检测抗体效价1∶1280000。不同浓度C17orf77重组蛋白对HepG2细胞无明显增殖促进或抑制活性(P0.05)。C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系均有分布。结论利用体外克隆表达的C17orf77重组蛋白可制备效价和特异性均较高的多克隆抗体。HBV感染相关基因C17orf77在体外肝脏的间质和实质细胞,以及CD4+T细胞系(Jurkat细胞)均有不同程度的表达。提示该基因可能与HBV感染的致病过程相关。     

C7orf69基因的克隆表达及生物信息学分析

目的体外克隆表达并纯化C70rf69重组蛋白,对C70rf69蛋白进行生物信息学分析。方法PCR扩增C70rf69目的基因片段,构建原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,SDS—PAGE和Westernblot鉴定,Ni-NTA纯化目的蛋白。结果扩增获得序列完全正确的C70rf69基因片段（自然变异体）,重组蛋白以包涵体的形式高效表达,在非变性条件下获得较高纯度的重组蛋白。生物信息学软件预测C70rf69蛋白（含信号肽）含有PKC、CK2磷酸化位点和N-十四烷基化位点。结论成功的对分泌蛋白C70rf69进行了基因克隆、表达与初步纯化,为其进一步的功能研究奠定了坚实的基础。     

GLT25D1血清水平与慢性乙型肝炎肝纤维化进程相关性分析

目的 探讨GLT25D1血清水平与慢性乙型肝炎肝纤维化进程的相关性.方法 通过抗原表位预测软件BepiPred 1.0Server将GLT25D1基因片段分为GLT25D 1-1和GLT25D 1-2两部分,PCR扩增获得目的片段,构建其原核表达质粒；对制备的多克隆抗体进行效价及特异性分析.通过以GLT25D1为抗原的ELISA双抗体夹心的方法,检测其在HBV感染不同阶段的患者的血清水平.结果 成功表达重组蛋白,Western blot鉴定正确；成功制备兔抗人(GLT25D1-1、GLT25D 1-2)的多克隆抗体,效价较高,特异性良好.通过ELISA方法检测HBV感染患者血清,慢性乙肝(病理结果不超过S3期)、肝硬化(S3-4期及S4期)以及肝癌患者中GLT25D1的OD值较正常组均有显著性差异(P＜0.01).结论 通过血清学检测结果,我们发现GTL25D1存在于HBV感染的肝病的各进程中,进而我们推测血清GLT25D1可能会作为检测肝纤维化进程的一个新的血清学指标.     

RP-HPLC非水相测定牛黄解毒软胶囊中的大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量

目的:建立快速测定牛黄解毒软胶囊中的大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的HPLC方法.方法:采用非水反相高效液相色谱法,固定相为Kromasil C18柱,流动相为甲醇-冰醋酸(99.9:0.1),检测波长为254 nm.结果:大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在0.420～33.6,1.00～80.2,0.525～42.0 μg·mL-1范围内线性关系良好.大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的平均回收率分别为99.6%,99.3%,98.8%.RSD分别为0.7%,0.5%,0.9%.结论:本法简便、快速、准确,可作为本品的质量控制方法.     

非水反相液相色谱法测定大鼠虎杖给药后血浆中大黄素、大黄素甲醚的含量

目的:采用非水反相液相色谱法测定大鼠血浆中大黄素、大黄素甲醚的含量.方法:血浆经水解、提取后用非水反相高效液相色谱法分析其含量,采用Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5.0μm),甲醇-冰醋酸(99.9:0.1)为流动相;流速为1.0mL·min-1;检测波长254nm.结果:大黄素在0.0425～2.8μg·mL-1、大黄素甲醚在0.0491～3.14μg·mL-1范围内线性关系良好;大黄素、大黄素甲醚的回收率分别为95.7%～100.1%,96.2%～99.8%,RSD分别为1.3%,1.6%;提取回收率分别为91.8%～95.4%、92.7%～94.6%.结论:本方法准确、简便,重现性好,适宜于测定含大黄素、大黄素甲醚的生物样品.     

反相高效液相色谱法测定人血浆中阿替洛尔的浓度

目的:建立反相高效液相色谱法测定血浆中阿替洛尔浓度.方法:以乙酸乙酯-异丙醇(8:1)为提取溶剂,液-液萃取法处理血浆样品.色谱柱:Phenomenex C18;流动相:0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(pH 3.2)-乙腈(90:10).检测波长:λex=230 nm,λem=310 nm.流速:1.0ml·min-1.结果:线性范围4.6～883.2 ng·ml-1;最低检测浓度为2.3 ng·ml-1;绝对回收率为95.1%;日内RSD小于3.9%,日间RSD小于5.5%.结论:方法灵敏准确,简便可行,适于阿替洛尔的治疗药物浓度监测.     

中药中农药残留量研究进展

综述了近年来有关中药中残留农药的提取、净化及其定量分析方法的研究进展，并讨论了几种新的提取、净化及定量分析技术在中药农药残留分析中的应用前景。