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目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca~(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca~(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca~(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca~(2+)浓度和Ca M表达。 相似文献
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表没食子儿茶素没食子酸酯对亚硫酸盐诱导的心肌细胞氧化损伤的抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
<正>绿茶常被称为是天然的抗氧化剂,含有很多种酚类物质,其中以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高且生物活性最强。流行病学调查和实验室研究表明,EGCG具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗肿瘤等功效[1-2],如在日本 相似文献
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目的研究乙酰胆碱(Ach)和吡那地尔(Pina)对饮酒大鼠离体主动脉的舒张作用改变。方法建立饮酒大鼠模型,大鼠主动脉环张力舒缩状态采用PowerLab系统记录,观察空白组和饮酒组大鼠离体主动脉对舒张药物Ach和Pina的反应,并比较二者之间的差异。结果乙酰胆碱和吡那地尔均可浓度依赖性的引起苯肾上腺素(PE)和氯化钾(KCl)预收缩的大鼠主动脉发生舒张,且Ach和Pina对饮酒大鼠主动脉的舒张率与空白组大鼠主动脉的舒张率相比,明显降低(P〈0.05或P〈0.01)。结论乙酰胆碱和吡那地尔均可引起PE和KCl预收缩的空白组和饮酒组大鼠的主动脉发生舒张,但二者的舒张反应存在差异性,空白组的舒张效果整体强于饮酒组。 相似文献
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关于SAS与SPSS软件中的异常点诊断 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:介绍利用SAS和SPSS软件诊断不同空间内的异常点。方法:通过SAS和SPSS软件实现对异常点的诊断。结果:阐述应用SAS和SPSS软件诊断异常点,并且应用两个软件中的诊断方法,来说明诊断是在两个软件实现结果中的相互关系。 相似文献
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目的应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统构建血管平滑肌缝隙连接蛋白Cx43条件性基因敲除小鼠(VSMC-Cx43-/-)模型。方法采用受精卵同源重组的方式,对Gja1基因进行flox修饰。通过体外转录的方式,获得Cas9 mRNA和gRNA;通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载体,该载体包含3.0 kb 5’同源臂、1.9 kb的flox区域和3.0 kb 3’同源臂。将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,获得F0代小鼠。PCR扩增及测序鉴定阳性的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得3只阳性F1代小鼠(Cx43flox/+)。将获得的flox杂合子Cx43flox/+小鼠自交,获得flox纯合子Cx43flox/flox小鼠。然后用Cx43flox/flox小鼠和Myh11-CreERT2小鼠交配,最终获得flox纯合且Cre阳性的实验组小鼠(该小鼠简写为:VSMC-Cx43-/-)和flox纯合且Cre阴性的对照组小鼠(Cx43flox/flox)。用PCR进行基因型鉴定,用Western blot技术检测Cx43在大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功。结果基因型鉴定、免疫荧光和Western blot检测结果表明VSMC-Cx43-/-基因敲除小鼠模型构建成功,小鼠一般性状无改变,小鼠大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中Cx43蛋白表达均下降。因此,可作为长期稳定模型研究血管平滑肌Cx43的功能。结论应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统成功构建了VSMC-Cx43-/-基因敲除小鼠模型,为深入研究Cx43在血管疾病中的作用提供工具。 相似文献
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<正>高血压是最常见的慢性病,同时也是心脑血管病最主要的危险因素,本文对各种抗高血压药物治疗机制、用药频率、联合药物的应用情况进行调查分析并讨论其应用的经济合理性。1资料与方法从该医院计算机药物管理系统(HIS)取得基本的用药信息,统计的2012年高血压处方为88 020张,总处方数为521170张。以药品通用名为依据进行分类汇总,采用Microsoft Excel软件,对2012年1月至2012年12月抗高血压药物种类、数量、金额总数进行统计并排序,计算各类占的比例。 相似文献
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目的:通过大鼠冠状动脉(coronary artery,CA)张力测定和全细胞膜片钳记录CA血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的电压门控性钾通道(voltage-gated K~+channel,Kv)电流,研究槲皮素改善高糖损伤大鼠CA肌原性反应的机制。方法:从正常SD大鼠急性分离得到CA环,然后分成6组:(1)正常对照组;(2)高糖组;(3)高糖+低剂量(3μmol/L)槲皮素组;(4)高糖+中剂量(10μmol/L)槲皮素组;(5)高糖+高剂量(30μmol/L)槲皮素组;(6)高糖+蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制剂C6303+高剂量槲皮素组。利用血管张力测定,检测CA环对血管收缩剂(60 mmol/L KCl和0.1 mmol/L U46619)的反应,并将CA环用60 mmol/L KCl预收缩后,用乙酰胆碱(acetylcholine,ACh;10~(-9)~10~(-5)mol/L)进行舒张,计算ACh引起CA环张力下降幅度与预先收缩的百分比。急性分离得到大鼠CA的VSMC,然后记录Kv电流。结果:与正常対照组相比,高糖组CA环对60mmol/L KCl和0.1 mmol/L U46619的反应明显升高;中、高剂量槲皮素的干预可以使高糖所致CA环对血管收缩剂的反应降低,孵育PKC特异性抑制剂C6303可减弱槲皮素的作用。与正常对照组相比,高糖组大鼠离体CA环对ACh的舒张幅度明显减弱。槲皮素的干预可以改善高糖孵育的大鼠离体CA环对ACh的舒张反应,C6303可以减弱槲皮素的作用。高糖孵育明显抑制CA VSMC的Kv电流,槲皮素干预可以减弱高糖对CA VSMC Kv电流的影响,孵育C6303可减弱槲皮素的作用。结论:槲皮素对高糖损伤大鼠CA肌原性反应具有保护作用,该作用与增大VSMC的Kv电流和激活PKC有关。 相似文献