壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:影响转染效率的因素

目的:以增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)为报告基因,探讨影响壳聚糖(CS)介导的基因转染率的因素.方法:复凝聚法制备pEGFP/CS纳米粒,选用HEK293细胞,考察CS相对分子质量、CS中的氨基与pEGFP中的磷酸基的比值(N/P比)、纳米粒粒径、介质pH值和血清对转染率的影响.结果:相对分子质量5×103的CS获得较高转染率;转染率随N/P比增加而提高;介质pH≤6.8有利于转染;在230～1 290nm范围,粒径对转染效率无影响;CS介导的转染不受血清影响.结论:CS相对分子质量、N/P比和介质pH值是影响转染率的因素,低相对分子质量水溶性CS有利于提高转染.     

壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:粒径对转染效率的影响

研究粒径对壳聚糖(chitosan，CS)纳米粒介导的转染效率的影响。通过调整CS溶液加入质粒基因(plasmid DNA，pDNA)溶液的速度和涡旋时间制备250，580和1 300 nm粒径pDNA/CS纳米粒，研究粒径对CS介导的细胞转染效率的影响。为深入探讨粒径对转染效率的影响，考察了3种粒径pDNA/CS纳米粒的药剂学性质，对抗核酸酶作用和细胞对纳米粒的吸附和摄取行为。结果表明：本文制备的3种粒径纳米粒的药剂学性质和凝聚pDNA的能力等特性基本无差别，均能有效保护pDNA免受核酸酶降解；在HEK293细胞中的转染效率无显著差异；与细胞共孵育4 h，流式细胞仪测定的三者细胞摄取率与摄取量相似；荧光显微图像显示3种粒径纳米粒均以小聚集体形式吸附于细胞表面，激光扫描共聚焦显微图像显示直径约为2 μm小聚集体较易被细胞内吞入胞。因此粒径在250～1 300 nm中对壳聚糖纳米粒介导的细胞转染率基本无影响。     

荧光探针示踪pDNA/壳聚糖纳米粒在细胞内转运

 目的采用荧光探针追踪质粒DNA(pDNA)/壳聚糖(CS)纳米粒在细胞内转运轨迹,分析CS介导的细胞转染屏障。方法绿色荧光蛋白质粒基因作为报告基因进行体外转染实验,用异硫氰酸荧光素分别标记pDNA和CS,荧光显微镜下观察细胞对pDNA/CS纳米粒的吸附,流式细胞技术测定细胞对pDNA/CS纳米粒的摄取率,激光扫描共聚焦显微镜下观察pDNA/CS纳米粒在细胞内转运和入核过程。结果pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式吸附在细胞表面,细胞吸附受介质pH值的影响。流式细胞仪定量分析表明,细胞对pDNA/CS纳米粒有高摄取率,共温孵4h,细胞摄取率为88.8%。激光扫描共聚焦显微图像显示,pDNA/CS纳米粒依赖细胞内吞功能经细胞(内外)转运通道进入细胞。pDNA/CS纳米粒与细胞共温孵3h,CS主要分布在胞浆中,pDNA不仅分布在胞浆中,核内也清楚可见荧光标记的pDNA。结论荷正电的pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式被细胞吸附,通过细胞胞吞作用进入细胞。pDNA/CS纳米粒主要在胞浆中解离,pDNA入核。实验提示,增加pDNA/CS纳米粒在胞浆中解离将有助于提高CS介导的转染效率。     

基因疫苗微粒系统黏膜免疫的研究进展

微粒系统作为一种基因疫苗的黏膜免疫递送系统,能够增强免疫效果,具有同时诱导系统免疫应答和黏膜免疫应答、产生共同黏膜免疫应答、增加病人的顺应性、降低疫苗推广成本等优点.文章综述微粒系统增强基因疫苗黏膜免疫效果的机制、常见的微粒系统、载体材料以及优化微粒系统的研究进展.     

抗动脉粥样硬化基因疫苗经鼻腔免疫黏膜毒性的初步评价

目的:考察抗动脉粥样硬化基因疫苗经鼻腔接种免疫的黏膜毒性.方法:以壳聚糖为基因载体,制备载基因疫苗的壳聚糖纳米粒.对高脂家兔模型滴鼻免疫6次,28周时取鼻黏膜及肺部组织行组织病理学检查,扫描电镜观察鼻黏膜纤毛的超微结构变化.结果:基因疫苗经鼻腔免疫可以显著诱导抗体,延缓动脉粥样硬化的发展.组织病理学检查表明,鼻黏膜及肺部组织形态正常.黏膜纤毛超微结构的扫描电镜观察表明,鼻黏膜纤毛排列有序,无断裂、脱落、倒伏等异常现象.结论:基因疫苗经鼻腔接种未致黏膜及纤毛损伤,鼻腔给药有潜力发展为一种新的接种途径.