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规律性短重复回文序列簇(CRISPR)和CRISPR辅助蛋白9(Cas9)构成的CRISPR/Cas9基因编辑技术快速推进了基因修饰猪作为医学研究模式动物的广泛应用。而高效的靶基因单链向导RNA(sgRNA)是利用CRISPR/Cas9技术进行基因编辑成功的关键,对于猪等繁殖周期较长的大动物,则需要在实施动物实验前,在体外筛选出高效的sgRNA以避免时间和资源成本浪费。另外,如何高效获得阳性基因编辑单克隆细胞是目前尚待解决的难题。本研究建立了靶向猪基因组的sgRNA快速筛选方法,利用荧光载体富集基因编辑细胞,同时探索利用图案微阵列培养技术快速获得单克隆细胞的方法,在此基础上高效获得延胡索酰乙酰乙酸酶(Fah)基因编辑细胞,为后续生产作为人类肝细胞生物反应器的Fah基因敲除猪奠定基础。  相似文献   
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目的 采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对不同产地虫草化学成分进行鉴定与比较分析。方法 采用超高效液相-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)及多元统计分析技术对实验结果进行分析,并对差异化合物进行鉴定。结果 对不同产地的虫草进行了成分鉴定,核苷类物质含量高。不同产地虫草药材在组分种类和相对量上存在着一定的差异。湖南、湖北、丽江的虫草含有其他成分,丽江虫草含有大量的虫草素,湖南虫草含有一些黄酮类物质。采用主成分分析(PCA)将不同产地药材分别聚成不同组别,其中西藏(那曲)、四川、青海之间聚集紧密,而凉山、湖北、湖南及丽江虫草散布在四周,差别非常显著。结论 UPLC-Q-TOF-MS结合多元统计分析方法可为虫草药材的质量评价提供依据。  相似文献   
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