基于免疫金银染色的蛋白质与抗原分子微阵列技术

目的　研制适于自身抗体检测的蛋白质与抗原分子微阵列。方法　利用氧化型琼脂糖凝胶膜结合戊二醛分子衍生的活性表面 ,制作蛋白质与抗原分子微阵列 ,建立了检测血清自身抗体的胶体金免疫金银染色方法 (IGSS)。结果　在未经选择的风湿病患者中 (包括SLE ,RA和MCTD) ,检出多种自身抗体阳性 ,其中又以子宫内膜抗体 (EmAb)、抗ssDNA抗体、抗TG抗体、抗TPO抗体和RF等的检出频率较高 ;但心磷脂抗体 (ACA)、抗LSP和抗精子抗体 (AsAb)均为阴性。经初步方法学对比考证 ,实验结果与ELISA有较好的一致性 (达 90 % )。结论　本法具有方法敏感 ,结果直观和实验条件易于控制等特点 ,为发展可视化阵列芯片提供了一种很好的模式。     

荧光实时定量PCR检测前列腺癌抗原3评分方法的建立

目的 前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3,PCA3)基因表达具有前列腺癌特异性,文中建立荧光实时定量PCR(FQ-RT-PCR)检测PCA3评分的方法.方法 分别以LNCap和PC-3细胞株为阳性和阴性对照,用TaqMan探针建立检测PCA3和前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA) mRNA的荧光实时定量PCR方法,评价特异性、重复性和计算扩增效率,建立PCA3评分计算公式.结果 检测PCA3和PSA mRNA的批内变异系数分别为1.19%、1.09%、0.84%和0.06%、0.71%、0.79%,批间变异系数分别为1.03%和0.56%;扩增效率分别为0.98和1.00;以2-ΔCt表示PCA3评分.结论 荧光实时定量PCR检测PCA3评分方法的特异性好,重复性高.     

氟伐他汀对人脐静脉内皮细胞游离钙离子水平及内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的:观察氟伐他汀对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)游离钙离子水平及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响及可能机制。方法:体外培养HUVECs,随机分为5组:空白对照组,氟伐他汀(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)组。采用硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO含量,液体闪烁计数仪测定L-[3H]-精氨酸和L-[3H]-瓜氨酸的含量,用激光共聚焦扫描显像系统检测内皮细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)水平的变化。结果:与空白对照组比较,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L氟伐他汀孵育细胞12h后可显著升高HUVECs细胞内eNOS活性,促进NO释放,同时伴有[Ca2 ]i升高,且呈浓度依赖性。另外,10-5mol/L氟伐他汀在0～12h时间段呈时间依赖性增高eNOS活性,作用12h使eNOS活性达到最高(P<0.01)。结论:氟伐他汀呈浓度依赖性升高HUVECseNOS活性和促进NO释放,该作用与其增加内皮细胞内[Ca2 ]i有关。     

类风湿关节炎四种自身抗体的检测及意义

为评估类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated pepdide,CCP)抗体、抗Sa抗体和抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)自身抗体对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断的意义,采用速率散...     

联合检测血清CA125和HE4用于卵巢癌诊断及鉴别诊断

目的探讨人血清CA125和人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)水平在卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值。方法测定187例女性血清标本,其中卵巢癌92例,卵巢良性疾病39例,健康体检女性56例,用微粒子酶免疫法(MEIA)和ELISA法分别测定血清CA125和HE4含量。结果卵巢癌组CA125和HE4水平明显高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.01)。健康对照组和良性疾病组HE4比较差异无统计学意义(P>0.05)。以卵巢良性疾病作参照,单独检测血清HE4水平对卵巢癌诊断的敏感性为57.6%,低于单独检测CA125的77.2%;但其特异性为97.0%,高于CA125的85.0%。以二者其中之一高于参考值即视为阳性时,联合检测HE4和CA125对卵巢癌诊断的敏感性为94.6%,特异性可达85.0%。结论联合检测血清CA125和HE4有助于卵巢良恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断。     

钙调素ELISA定量检测方法的建立与实验条件优化

目的 研究ELISA法定量测定钙调素(CaM)的最优条件。方法 用重组人CaM、免抗CaM，通过对聚苯乙烯反应板进行紫外辐照处理，改善抗原因相化条件；通过对抗原包被液、包被时间等条件优化，建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。结果 以pH7．4 0．01mol/L的PB为包被液，包被及后续封闭时间为4℃静置72h，CaM包被浓度为5-8g/ml，抗原抗体反应时间为37℃ 60min，可获最佳CaM定量结果。结论 建立的检测CaM的ELISA测定方法，敏感性、重复性均在临床检测可接受的范围内，标准曲线的线性也较好，可用于细胞内外CaM的定量研究。     

51例支气管哮喘患者特异性IgE检测结果分析

支气管哮喘在人群中有较高发病率，其分型和发病机理都较复杂。对于1型变态反应所引起的过敏性哮喘，明确变应原诊断、预防和治疗都有重要意义。检测血清中特异性IgE（Spe－dfiCmp。Sng）是间接测定变应原的体外试验。用免疫酶——荧光技术检测血清SIgE是近年来发展起来的新的检测方法，如何结合我国条件，合理地选择检测项目并对结果作出正确分析，尚有待于积累经验。本文用PharmadaCAP系统对51例支气管哮喘患者血清中11种变应原SIgE进行了检测，并同时检测了血清总IgE水平。l材料和方法三．五研究对象根据病史和主要临床特点诊断为…     

C_3裂解产物(C_3SP)的检测及意义

C_3是补体系统中含量最丰富,作用最关键的一种成份,是补体传统(CP)和旁路(AP)两条主要活化途径的交汇点.C_3的合成与分解直接受体内免疫反应过程的影响,因而研究C_3尤其是C_3激活后产生的各种生物学活性片段即C_3SP 对了解体内C_3代谢情况,阐     

ELlSA定量检测尿液中IgG,IgA和IgM的实验研究及临床应用

用双抗体夹心ELISA 法测定尿中微量IgG、IgA、IgM。敏感性为0.5～2.5ng/ml,批内误差变异系数均<8%,枇间误差均<10%。对不同年龄的214名正常人和肾炎、高血压、尿路感染、糖尿病等病人进行了测定。     

补体溶解免疫复合物活性的PAP-ELISA法

1975年Miller 等发现补体的一种新功能,即补体溶解免疫复合物活性(complex-release activity ofcomplement,CRA).测定CRA 的方法常用~(125)I 标记的BSA 与抗BSA 复合物法.1985年Migliorini 等介