寄生蠕虫遗传操纵的研究进展

全球约20亿人感染蠕虫，由此导致的蠕虫病是发展中国家的严重健康负担。寄生蠕虫是一类多细胞寄生虫，主要包括吸虫、绦虫和线虫，其生活史复杂，有多个发育时期且一般具有1个或多个宿主。从分子层面理解寄生蠕虫的生长、发育及其致病与传播的机理对于诊断和治疗蠕虫病具有重要意义。遗传操纵技术能够改变靶基因的表达水平，极大地促进了生物医学领域的研究。近年来，随着寄生蠕虫基因组信息的释放，遗传操纵技术，如RNA干扰、规律成簇间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）基因编辑等在寄生蠕虫中的应用愈加广泛。本文对重要医学蠕虫中的遗传操纵进展、遗传操纵的方式及手段进行了综述，以期为寄生蠕虫的基因功能研究提供参考。     

“第一代”的困境与变革

中国的民营企业发展时间不长,药品零售业更是只有10余年历史,这些吃中国红利长大的企业,有政策、时代、机遇等因素的助推,眼下的辉煌可能并非纯粹的个人能力和企业制度使然.所以,他们的继续成长需要付出更多努力,希望基业常青的企业家要有变革的勇气,更要问清楚自己:为什么做这个企业?有没有长期愿景?企业的核心价值观是什么?只有回答了这些问题,再去探讨变革、创新、传承等问题才有意义.     

金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨

目的探讨金诺芬对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点,测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法用二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组SjTrx-1酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4~6周龄雌性昆明鼠(童虫组10只小鼠,600~800条/只;成虫组10只小鼠,80~100条/只),灌注法收集童虫(15 d)和成虫(35 d)。虫体经无菌生理盐水充分洗涤后,转移至预先添加培养基的12孔板中,分别加入金诺芬和吡喹酮至其终浓度为1、5和10μg/ml,显微镜下观察化合物处理2、24、48和72 h后虫体的形态改变和死亡情况。CCK-8试剂盒测定金诺芬(5和10μg/ml)对3种人源宿主细胞(Hep G2、293T和Hela)的毒性。结果10μg/ml金诺芬作用下,40 min内重组SjTrx-1还原胰岛素的总量减少54.5%。5μg/ml金诺芬体外作用24 h后,成虫死亡率达75%,而童虫未见死亡;10μg/ml金诺芬作用72 h后,童虫和成虫均全部死亡,但童虫死亡时间较成虫延迟。金诺芬和吡喹酮作用后,光镜下观察,虫体均出现颜色变灰暗、挛缩和卷曲等现象;电镜下可见虫体表被膜结构严重破坏。细胞毒性测试结果显示,5μg/ml金诺芬可使细胞相对活力降低85%以上,而10μg/ml时细胞几乎全部死亡。结论SjTrx-1是金诺芬作用靶点之一。金诺芬具有较强的细胞毒性作用,对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果存在差异,对成虫的作用效果更显著。     

日本血吸虫表皮生长因子受体基因的鉴定和功能研究

目的鉴定日本血吸虫表皮生长因子受体基因(SjEGFR),并阐明其在日本血吸虫生长和生殖发育中的作用。方法通过5’-RACE和3’-RACE扩增、测序获取SjEGFR基因全长片段。采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在日本血吸虫不同发育阶段(16、18、20、22、24、26 d)表达情况。使用整条虫体原位杂交法对感染24 d的日本血吸虫雌、雄虫SjEGFR基因转录本进行定位。通过体内持续RNA干扰(RNAi)技术特异性敲低SjEGFR基因,待虫体发育至30 d收集虫体。统计分析雌、雄虫回收数量以及虫体长度,通过明矾卡红染色观察虫体生长发育情况。结果首次鉴定了SjEGFR基因,其结构具有一个保守的酪氨酸激酶位点。整条虫体原位杂交定位显示该基因转录本在虫体各处均有表达,在雌、雄虫肠道部位呈现出明显着色的高表达。体内RNAi显示,SjEGFR基因表达被特异性敲低后,雌、雄虫生长受阻。RNAi组雌虫子宫内无虫卵,肠道内无色素沉积、卵黄腺发育迟滞、卵巢发育受阻;雄虫呈现睾丸个数减少、体积变小,出现了更多未成熟的精母细胞。结论特异性敲低SjEGFR基因表达可影响日本血吸虫生长和生殖发育,阻滞虫卵产生。     

流式细胞计测定食管癌细胞 DNA 含量和临床及病理特性的关系

本文用流式细胞检测了36例食管癌切除标本的DNA含量,结果发现,DNA倍体水平差异较大,范围为1.68C～8.16C,大多数食管癌为非整倍体DNA含量,其中少数病人在同一标本中同时发现两种不同的非整倍体。而且,食管癌细胞的DNA含量和肿瘤病变长度、局部淋巴结转移、食管外侵犯以及病理分级有密切关系;以二倍体肿瘤预后较好,且病理分化较高。而非整倍体肿瘤则相反。     

食管、贲门癌155例临床诊断

我院胸外科1984年1月～1985年12月,经手术切除病理证实之食管癌、贲门癌患者共155例。本组患者术前均进行了食管钡餐X线造影检查、食管拉网细胞学检查和纤维食管镜检查。现整理各项临床资料,就有关食管癌、贲门癌临床诊断方面的问题,加以讨论。     

X 线监视下低张力食管拉网在诊断食管癌中的应用研究

从１９９２年１０月至１９９５年４月，我们对５８例食管癌常规拉网检查失败者应用改进后的食管细胞采集器在Ｘ线监视下应用低张方法行食管拉网细胞学检查，一次拉网阳性者５６例，占９６．６％，２次阳性２例，占３．４％，总成攻率为１００％。我们认为本方法有以下优点：①改进后的细胞采取器能在Ｘ线下监视操作，准确定位，并能增加导管的硬度，它能通过不同程度食管病变的狭窄，因此提高了细胞学检查的阳性率。②低张力检查方法能扩张、展平食管粘膜，有助检查成功，能够发现早期病变。     

以乳腺肿块为首发症状的急性单核细胞性白血病一例

1　病例报告患者女 ,68岁 ,因乳房弥漫性肿大 1个月于 2 0 0 0年 6月 3日入院。查体 :右侧乳腺增大 ,表浅静脉曲张 ,乳头无回缩 ,乳房中央区的肿块约 12 4cm× 11 3cm ,质硬 ,边界较清晰 ,表面不光滑 ,活动欠佳。右腋窝下可触及融合成团的淋巴结 ,质硬 ,直径 0 5～ 2 5cm ,活动欠佳。左乳及左腋窝下未见异常 ,双侧锁骨上未触及肿大淋巴结 ,扁桃体 ( -) ,心肺 ( -) ,肝、脾未触及 ,肝功能及肾功能检查正常。心电图正常范围 ,B超考虑“右乳腺癌并右腋窝淋巴结肿大” ,钼靶片示“右乳恶性肿瘤” ,ECT考虑“右乳良性肿瘤”。血液分析 :WBC…