CE-EMMA法测定乙脑灭活疫苗中乙二胺四乙酸二钠残留量

建立毛细管电泳（CE）结合电泳中介微分析（EMMA）测定乙脑灭活疫苗中乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）残留量的方法。方法：运行缓冲液为0.025 mol·L-1磷酸氢二钠缓冲液（pH 2.5）,在线络合金属离子为1.5 mg·mL Fe3+,孵育时间3 min,分离电压-25 kV,紫外检测波长257 nm,压力进样5 000 Pa×5 s,检测温度为25.0 ℃。结果：EDTA-2Na在0.01~0.5 mg·mL-1的浓度范围内呈现良好的线性关系,r为0.999 9,最低检测限为5 μg·mL-1,测定样品RSD小于2.87%,加样回收率为94.13%~105.56%。结论：该方法操作简便,准确度高,稳定性好,可用于乙脑灭活疫苗中EDTA-2Na残留量的测定。     

仿刺参(Apostichopus japonicus)中皂苷类成分的分离鉴定及细胞毒活性研究

目的 对仿刺参(Apostichopus japonicus)体内皂苷类成分进行分离及结构鉴定,研究纯化皂苷的抗肿瘤细胞毒活性。方法 以鲜仿刺参为原材料,选用60%的乙醇溶液从海参中提取出海参皂苷,然后通过有机溶剂萃取法、大孔树脂法、硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备HPLC分离纯化海参皂苷,采用LTQ Orbitrap XL 质谱、Jeol JNM-ECP 600 核磁技术对得到的海参皂苷进行结构鉴定,以人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)、人肝癌细胞(BEL-7402)、人肺腺癌细胞(NCI-H1975)和正常肝细胞(L-02)为对象对纯化皂苷抗肿瘤细胞毒活性进行研究。结果 从鲜仿刺参同时得到三种三萜皂苷类化合物,分别为Holotoxin D、Holotoxin B₁和Holotoxin A₁,产率分别为2.30×10_-7、1.86×10_-6和3.49×10_-6。三种皂苷的细胞毒活性具有一致性,对肿瘤细胞具有良好的抑制率,抑制率均随皂苷单体浓度增大而增大,且到达一定浓度时之后趋于稳定,均呈现弱效抑制作用。结论 首次从鲜仿刺参中同时纯化得到Holotoxin D,Holotoxin B₁和Holotoxin A₁,比例为1:7.97:14.94。三种皂苷单体具有良好的抗肿瘤活性,Holotoxin D抗肿瘤活性为首次报道,本研究为以后的肿瘤药物的筛选研究奠定了良好的基础。     

仿刺参中海参皂苷HolotoxinA_1的分离制备及其含量的分析

目的分离制备海参皂苷HolotoxinA1单体,获得HolotoxinA1对照品;建立仿刺参(Apostichopus ja-ponicus)中HolotoxinA1的HPLC-ELSD定量分析方法,以此作为评价来源于不同海域的仿刺参中海参皂苷质量的依据。方法应用大孔树脂、HPLC对仿刺参中的HolotoxinA1进行分离纯化、制备海参皂苷Holotoxi-nA1单体,通过质谱、核磁确定其结构。采用Hypersil Gold C18(150mm×2.1mm,3μm)色谱柱,5mmol·L-1醋酸铵—乙腈溶液梯度洗脱建立海参皂苷HolotoxinA1的HPLC-ELSD方法。结果根据波谱数据确定分离制备的海参皂苷单体为三萜皂苷HolotoxinA1,HPLC-ELSD分析其纯度可作为对照品。建立的HPLC-ELSD方法在0.2～25μg·mL-1线性关系良好(r=0.999),检测限为0.05μg·mL-1;5种来源于不同海域的仿刺参中的海参皂苷均以HolotoxinA1含量最多,定量分析可知韩国东海岸产仿刺参中HolotoxinA1含量最多(588.20μg·g-1)福建产仿刺参中HolotoxinA1含量最少(21.33μg·g-1)。     

毛细管电泳分离体液中手性药物

毛细管电泳(CE)是80年代后期发展起来的一种分析技术,由于它有分高效率高、快速、样品用量少、运行成本低、操作简便等特点,已成为分析化学领域中发展最快的分离技术之一。 CE应用的范围极广,小至无机离子,大至生物分子,都可用CE进行分离分析。近年来,CE在对体液样品(血液、尿液、唾液等)的分析中,更是显示了其特有的优越性,引起了人们的极大关注。在此基础上,1992年Prunonosa等首次     

毛细管电泳间接紫外法分离分析海藻和酱油中游离氨基酸方法研究

目的 建立一种快速检测海藻和酱油中游离氨基酸的毛细管电泳间接紫外法分离分析方法。方法 在分离电压为-20 kV,毛细管柱温25 ℃的条件下,40 mmol.L<sub>-1</sub>三羟甲基氨基甲烷(Tris)为分离缓冲液,20 mmol.L<sub>-1</sub>烟酸为背景添加剂(NaOH调pH 11.00),0.015％(w/v) 溴化己二甲铵(HDB)为电渗流(EOF)反转剂,考察分离缓冲液pH,浓度,HDB浓度,电压等参数对分离的影响,在最佳优化条件下13分钟内13种未衍生氨基酸得到基线分离。结果 方法线性良好(r≥0.9972),日内及日间精密度分别低于4.25%和7.41%,加标回收率为94.6％-105.5％。建立的方法成功应用于海藻和酱油中游离氨基酸的定性定量分析。结论 结果表明,所开发的方法可用于快速测定不同样品中游离氨基酸的组成及含量,为海藻和酱油样品中游离氨基酸的快速检测奠定基础。     

毛细管电泳用于神经氨酸酶抑制剂筛选方法研究D

目的 建立适用于复杂体系的神经氨酸酶抑制剂毛细管电泳筛选方法。方法 以神经氨酸酶为靶点,以2￠-(4-甲基伞形酮-a-N-乙酰神经氨酸)为底物,建立神经氨酸酶抑制剂的毛细管电泳筛选方法,并将该方法用于海洋药物可口革囊星虫粗提物的活性筛选。结果 以10 mmol.L-1 pH 10.0的硼砂为背景电解质,酶促反应底物与产物在4.5分钟内基线分离。酶促反应在含4 mmol.L-1 CaCl2的pH 3.5的磷酸体系中,37℃水浴中酶与底物孵育15min,产物有稳定的较大的生成量。扎那米韦阳性对照验证结果表明,该方法可用于神经氨酸酶抑制剂筛选。对源于可口革囊星虫的11个粗提物筛选结果显示,7个粗提物对神经氨酸酶有抑制活性。结论 系统优化了毛细管电泳分离分析方法及神经氨酸酶反应体系,建立的模型可用于复杂体系中抗流感病毒药物神经氨酸酶抑制剂的筛选。     

栉孔扇贝不同部位多糖的提取分离及抗肿瘤活性研究

目的 研究栉孔扇贝不同部位（柱、性腺、肝脏、外套膜、鳃、足）多糖的抗肿瘤活性。方法 以新鲜栉孔扇贝为原材料,经胰蛋白酶水解、醇沉后得到栉孔扇贝不同部位多糖,通过柱前衍生高效液相色谱法进行栉孔扇贝不同部位多糖的单糖组成分析,以人宫颈癌细胞（Hela）和人肝癌细胞（HepG2）为对象对栉孔扇贝不同部位多糖的抗肿瘤活性进行研究。结果 从新鲜栉孔扇贝中提取得到六种多糖,分别为栉孔扇贝柱多糖（CFCP）、栉孔扇贝性腺多糖（CFGOP）、栉孔扇贝肝脏多糖（CFLP）、栉孔扇贝外套膜多糖（CFMP）、栉孔扇贝鳃多糖（CFGIP）、栉孔扇贝足多糖（CFFP）,其中CFCP仅含一种单糖,其余五种多糖均含十种单糖,且单糖摩尔比各不相同。栉孔扇贝六种部位多糖对Hela细胞的抑制率均随多糖浓度的增大而增大,其中CFLP抑制率最强。CFCP、CFGOP、CFMP对HepG2细胞的抑制率均较弱,CFLP、CFGIP、CFFP对HepG2细胞的抑制率均随多糖浓度的增大而增大,其中CFFP抑制率最强。结论 栉孔扇贝不同部位多糖对Hela细胞的抑制率由高到低依次为CFLP>CFGOP>CFMP>CFGIP>CFFP,对HepG2细胞的抑制率由高到低依次为CFFP>CFLP>CFGIP。同时,CFFP、CFMP、CFGIP、CFLP、CFGOP五种多糖对Hela细胞的抑制作用普遍高于HepG2细胞。     

罗氏海盘车(Asterias rollestoni)中两种生物碱的分离纯化及其抗肿瘤活性研究

目的 从罗氏海盘车（Asterias rollestoni）中分离鉴定生物碱类天然产物,并进行体外抗肿瘤活性评价。方法 利用MCI GEL CHP20凝胶吸附树脂柱层析、硅胶薄层层析、硅胶柱层析、凝胶 Sephadex LH-20 柱层析和高效液相色谱等手段对化合物进行了分离纯化;运用NMR、MS等波谱方法并结合文献鉴定化合物的结构;采用SRB、MTT法评价化合物的抗肿瘤活性。结果 从罗氏海盘车的乙醇提取物中分离鉴定了1个环二肽生物碱类化合物 Fellutanine A （1）和1个吲哚生物碱N-（2-（1H-吲哚-3-基）乙基）-2-苯乙胺（2）。化合物1对MGC803细胞的抑制率为53.99%,具有一定的抗肿瘤活性。结论 两个生物碱类化合物均为首次从罗氏海盘车中分离获得,其中化合物1的发现说明罗氏海盘车中存在非核糖体肽合成酶,进一步研究其合成路线、从中分离非核糖体多肽合成酶可以为挖掘罗氏海盘车药用价值提供重要参考。     

盐析辅助分散液液微萃取毛细管电泳测定口服液中甜味剂和防腐剂

目的 采用盐析辅助分散液液微萃取(SADLLME)-大体积样品堆积(LVSS)-毛细管电泳(CE)法测定阿斯巴甜、糖精、安赛蜜三种甜味剂以及苯甲酸、山梨酸两种防腐剂。方法 将待测溶液进行盐析液液微萃取处理后进行CE分析测定,设定电泳条件为：进样压力50 mbar,进样时间为 120 s,正常极性下分离电压为 20 kv,检测波长为 214 nm,分离温度为 25 °C。 结果 该方法在0.05~1.00 μg/mL范围内线性关系良好,最低检测限为2.5 ng/mL~10 ng/mL。萃取重现性良好(RSD小于10 ％,n=5)。待测组分富集倍数达到657~1674,富集效果良好。把该方法应用于不同种类口服液进行食品添加剂含量的测定,均获得了满意的结果。结论 实验表明使用微萃取与在线富集结合的手段更为高效、快速,能获得更高的富集倍数,成为提高毛细管电泳灵敏度的一种可靠方法。