RNA聚合酶Ⅱ启动子SMP8在活化肝星状细胞中的活性

我们已往的研究已经证实,RNA聚合酶Ⅲ启动子(pol Ⅲ)载体表达的针对TGF β1的核酶,在体外能有效逆转活化HSC的生物学活性[1].但TGF β1是广泛存在于各种细胞中,并发挥重要生物学效应的细胞因子,因此不具组织和细胞特异性的pol Ⅲ启动子核酶表达系统,在抑制HSC活化的同时会影响到正常肝细胞或其他细胞的功能,这使得基因治疗肝纤维化变得困难.     

人高密度脂蛋白受体基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响

目的考察人高密度脂蛋白受体SR—BI基因3＇UTR对其mRNA稳定性的影响。方法以人肝癌细胞株HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增获得SR．BI基因mRNA3＇UTR全长序列,克隆至荧光素酶报告基因的下游,分别构建重组质粒pc．1uc．3’UTR以及pGL3-CLAp—luc-3’UTR。利用脂质体转染HepG2细胞,进而检测转染后细胞的荧光素酶活性、荧光素酶报告基因mRNA的表达水平以及荧光素酶报告基因mRNA的半衰期。结果通过PCR成功扩增获得人SR—BI基因3’UTR全长序列,分别构建重组荧光素酶报告质粒pc-luc-3’UTR以及pGL3一CLAp—luc-3’UTR,并以pGL3一CLap-luc-3’UTR转染HepG2细胞建立稳定转染细胞株CLAp-luc．3’UTRHepG2。通过荧光素酶活性检测、实时荧光定量RT-PCR以及mRNA半衰期检测,结果证实SR．BI基因的3＇UTR的存在可显著降低荧光素酶活性及其mRNA水平,mRNA半衰期也显著缩短。结论SR—BI基因3＇UTR对其mRNA的稳定性有显著的影响,是SR．BI基因转录后水平调控的关键,为SR．BI基因表达调控提供了一个新机制。     

SGK1在糖尿病小鼠肾脏皮质中时间差异性表达及意义

目的：研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1）在糖尿病（DM）小鼠肾脏皮质中时间上差异性表达及意义。方法: 采用链脲佐菌素（STZ）单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型。将2月龄C57BL/6小鼠随机分成10组：第1、2、3、4、6、8、12周糖尿病小鼠组（DM₁、DM₂、DM₃、DM₄、DM₆、DM₈、DM₁₂）和相应的第1、4、8周正常对照组（N₁、N₄、N₈）。分别在DM模型制作成功后第1、2、3、4、6、8、12周末收集小鼠24 h尿量，检测24 h尿蛋白量；观察肾脏病理改变；半定量RT-PCR检测小鼠肾脏皮质SGK1及结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达，Western blotting检测N₄、DM₄、DM₈组皮质SGK1、CTGF蛋白的表达。结果: 随着糖尿病病程的进展，DM组小鼠肾小球体积逐渐增大、系膜区逐渐增宽；DM组小鼠24h尿蛋白从第2周起开始逐渐增多，肾脏皮质SGK1 mRNA表达从第2周开始明显上调，在第４周达到峰值。CTGF随着糖尿病病程的进展表达逐渐递增。结论: SGK1在糖尿病早期肾脏表达峰值的出现及CTGF 持续递增的表达，提示SGK1在糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展过程中起重要作用。     

CD2相关蛋白在肾脏固有细胞中的表达及分布

CD2相关蛋白（CD2AP）是与蛋白尿发生密切相关的足细胞分子。近年研究表明，CD2AP不仅是足细胞足突间裂孔隔膜的重要成分，而且还参与细胞骨架的重构，可能参与细胞许多重要的生理功能。本研究通过观察CD2AP在。肾脏固有细胞中的分布及其在足细胞分化中的分布变化，初步探讨其在足细胞中的生理功能。     

两种不同方法测定氯霉素二甲亚砜溶液中氯霉素含量

目的探讨氯霉素二甲亚砜溶液中氯霉素的含量测定方法。方法分别用高效液相色谱（HPLC）法和紫外分光光度（UV）法测定氯霉素二甲亚砜溶液中氯霉素含量,并对两种方法的测定结果进行比较。结果两种方法所测含量结果间没有显著性差异。结论两种方法都可以作为医院制剂含量测定方法,可将UV法用于制刺半成品含量控制而将HPLC法用于成品的含量控制,以缩短检验时间,保证制剂质量。     

CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用

目的 观察CD2相关蛋白(cD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系.方法 以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系.以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达.间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephtin在足细胞中的共存.直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存.结果 CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞.在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象.CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系.结论 CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞.CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架凋节有关.     

体外循环患者术后发生急性肾损伤的风险评估

目的 探讨体外循环心脏停搏手术后并发急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）的肾脏危险因素以及不同肾小球滤过率估测值（estimated glomerular filtration rate,eGFR）水平与AKI发生率之间的关系.方法 回顾性分析793例行体外循环心脏手术成人患者的临床资料,分别统计患者术前及术后7d内血肌酐（SCr）值、术后尿量,评价有无AKI的发生.采用回归分析等统计学方法研究SCr、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、血尿、蛋白尿,肾脏影像学异常（包括B超、CT及ECT）等因素与AKI之间的关系.采用简化MDRD公式计算eGFR,探讨不同水平的eGFR与AKI发生率之间的关系.结果 体外循环心脏停搏术后7d内并发AKI者136例（占17.1％00）;术前蛋白尿、肾脏体积缩小或弥漫性改变,肾积水,血肌酐、尿素氮浓度增高,eGFR≤90 ml· min^-1·（1.73 m^2）^-1等因素与AKI的发生明显相关（P＜0.01）;eGFR≤90 ml·min^-1·（1.73 m^2）^-1时,术后AKI发生率升高,且二者之间呈负相关.Logistic回归分析结果显示术前蛋白尿,肾脏体积缩小或弥漫性改变,血肌酐浓度增高为术后并发AKI的独立危险因素.结论 体外循环心脏停搏术前肾脏损伤可导致术后并发AKI,临床工作中必须谨慎评估风险和认真防治.     

CD2AP在足细胞中的生理功能研究

CD2相关蛋白(CD2 associated protein,CD2AP)是新近发现的足细胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)分子。近年来的研究发现,CD2AP在足细胞内与多种结构蛋白相互作用,参与了足细胞多种重要的生理过程,并在蛋白尿的发生、发展中发挥着重要作用。文章综述了CD2AP的分子结构及其在肾脏足细胞中的表达分布,深入探讨CD2AP的生理功能及作用机制。     

高效液相色谱法测定氯强油搽剂中氯霉素与泼尼松含量

目的建立同时测定氯强油搽剂中氯霉素与泼尼松含量的高效液相色谱法。方法固定相：Hypersil ODS不锈钢柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 水 冰醋酸 四甲基乙二胺（65.0：35.0：0.4：0.3）；流速：0.8 mL·min 1；检测波长：238 nm；柱温：30 ℃。结果氯霉素与泼尼松检测浓度分别在5.64～16.92 ，0.28～0.84 mg·mL 1范围内线性关系良好，氯霉素与泼尼松的平均回收率分别为100.46%和99.62%。结论该方法简便、准确、重现性好，可以用于该制剂的质量控制。     

不同基质及促渗剂对奥氮平贴剂体外透皮吸收的影响

目的:研究不同基质及促渗剂对奥氮平贴剂体外透皮促渗作用的影响.方法:采用不同基质及促渗剂制备奥氮平贴剂;采用卧式双室扩散池,以离体大鼠皮肤为模型,通过HPLC法测定药物浓度,拟合奥氮平透皮吸收的累积透过量和透过速率.结果:由Duro-Tak 87-4098型压敏胶制备的贴剂具有较好的稳态渗透速率,5%薄荷脑+10%肉豆蔻酸异丙酯合用对奥氮平促渗效果明显,促渗倍率达5.86倍.结论:奥氮平在以5%薄荷脑+10%肉豆蔻酸异丙酯为促渗剂,Duro-Tak 87-4098型压敏胶为基质时具有较好的透皮吸收.