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1.
赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和...   总被引:10,自引:2,他引:8  
  相似文献   
2.
江浙蝮蛇毒抗血小板聚集组分的分离纯化及活性分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
蛇毒,特别是蝰蛇和眼镜蛇家族蛇毒含有相当数量作用于血小板的活性成分,它们可诱导或抑制血小板聚集。一些相关成分应用于临床有望作为有效药物治疗出血或血栓性疾病。江浙蝮蛇属蝰蛇类,是我国特有的蛇种。本研究以是否抑制ADP诱导的血小板聚集作为示踪,从江浙蝮蛇毒中分离纯化出一种血小板聚集抑制剂并对其生化特性做进一步探讨。江浙蝮蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B,Sephadex G-75及在FPLC上利用SP-Sepha-rose和Mono Q层析,得到SDS-PAGE条带均一、分子量为65kD的蛋白质组分。该物质无磷脂酶A2、精氨酸酯酶及纤溶酶活性,具有拮抗ADP、胶原诱导的血小板聚集作用。结论:分子量为65kD的蛋白质组分,可抑制ADP、胶原诱导的血小板聚集,且呈明显的剂量一效应关系。  相似文献   
3.
目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究.方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序列测定及药理实验进行性质研究.结果:从广西眼镜王蛇毒中分离到一种电泳纯的碱性蛋白(命名为CM-IV),相对分子质量约为14 000,等电点约为8.65;PLA2的比活力为23 μmol·mg-1/min.氨基酸组成分析表明,其分子中Cys的含量占6.85%;利用蛋白质直接测序N端序列为TKCYVTPDVK.药理实验表明它对实验用小白鼠有致死性(LD50约为0.2 mg/kg),并具有心脏毒性,但无血小板抑制活性.根据Genebank Blast 分析软件,它的N端序列与神经毒素具有高度的同源性.结论:这种碱性蛋白可能为神经毒素,但却拥有PLA2的活力.  相似文献   
4.
目的 探讨神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧/缺血性脑损伤(HIBD)后远期智能的影响。方法 建立新生大鼠缺氧/缺血性脑损伤模型,分别给予NGF0.01mg/10g(小剂量组)和0.03mg/10g(大剂量组)腹腔注射,有用迷宫实验观察大鼠远期学习记忆能力的改变,用高效液相色谱电化学测定单胺类递质的改变。结果 NGF组(小剂量组、大剂量组)学习记忆功能明显好于对照组,表现在达标所需反映次数明显低于对照组(P<0.05),而正确率却明显高于对照组(P<0.05);小剂量NGF组与大剂量NGF组相比上述指标的改变也有显著性差异(P<0.05);NGF组去甲肾上腺素(NE)、高香草酸(HVA)、5-羟色胺(5-HT)等单胺类递质含量显著低于对照组(P<0.01)。NGF组脑部改变不明显,仅见轻微的脑皮层萎缩;对照组大鼠脑部可见皮层萎缩、液化及空洞形成,病理组织学可见筛状软化灶形成,胶质结节和钙化灶的形成等。结论 NGF可预防和治疗新生大鼠缺氧/缺血性脑病所致的智能障碍,还可以减轻HIBD时单胺类神经递质的代谢紊乱而促进其智能障碍的恢复。  相似文献   
5.
为了探讨药物干预对缺氧缺血性脑损伤(HIE)脑内兴奋性氨基酸(EAAs)含量的影响,采用新生大鼠HIE模型观察了脑活素、神经生长因子(NGF)及丹参对脑组织EAAs的影响.1材料和方法7日龄Wistar大鼠随机分为对照组、HIE组及药物干预组.药物干预组在造模型前30 min腹腔注药1次,剂量分别为:按体重脑活素0.05 mL/20 g,NGF 0.02 mg/20 g,丹参0.2 mL/20 g.在HIE后30 min处死分离左右皮层及海马,用HITACHI 835-50型氨基酸自动分析仪测定谷氨酸(Glu),天冬氨酸(Asp)含量.  相似文献   
6.
目的:在整体水平探讨前列腺分泌蛋白对金黄地鼠输卵管液中糖蛋白的影响。方法:金黄地鼠雄鼠依据手术方式的不同分为3组,分别为假手术组(SH)、附属性腺全去组(TX)和腹前列腺组(VP)(仅存前列腺)。收集与各手术组交配后不同时间点(交配后0.5、2、4、6h)的输卵管液(每一时间点及每一组,n=3),输卵管液蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝或阿仙蓝染色分析,应用蛋白电泳印迹后与系列某一种特异性糖基专一性结合凝集素反应,分析糖蛋白的变化。结果:不同组雄鼠交配及不同时间点收集输卵管液蛋白电泳谱类似,约15条主要条带。凝集素结合谱示,麦胚凝集素(WGA)结合的相对分子质量(Mr)为32000、35500、47000、52000糖蛋白见于6hVP组输卵管液,而6h TX组可见Mr为81000、128000条带;与豌豆凝集素(PSA)结合Mr为37500、32000糖蛋白仅见于6h VP组,而6h TX组缺乏;仅6hVP组可见与双花扁豆凝集素(DBA)结合Mr为52000、47000糖蛋白,而6h TX组缺乏。而0.5、2、4h时间点收集的输卵管液各凝集素结合谱相似。结论:前列腺分泌蛋白可影响修饰交配6h后的输卵管液中含乙酰氨基葡萄糖、N-乙酰半乳糖胺/半乳糖和甘露糖糖链的糖蛋白。这些糖蛋白可能在胚胎的发育过程中起作用。  相似文献   
7.
赤子爱胜蚓血小板聚集剂(EPAF,25.9μmol·L~(-1))能诱导人血小板聚集。EPAF为74.1μmol·L~(-1)时引起5-羟色胺最大释放(89%)。ADP受体拮抗剂(CP/CPK)和阿司匹林均不能抑制EPAF引起的人血小板聚集反应;EPAF(55.6μmol·L~(-1))能诱导凝血酶处理后脱颗粒人血小板产生聚集,表明EPAF诱导。的血小板聚集不依赖于ADP和TXA_2,是一种强血小板激动剂。  相似文献   
8.
1 磷脂酶A2的一般性质 磷脂酶A2(PLA2,E.C.3.1.1.4) 专一催化3-Sn-甘油磷脂2位酰脂键的水解反应,生成1-酰基溶血磷脂和脂肪酸[1].它广泛存在于生物体内,尤其富含于哺乳动物胰脏的分泌液和蛇与昆虫的毒液中.  相似文献   
9.
目的研究广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2(APLA2)的基因克隆与序列分析.方法从广西眼镜王蛇毒腺中提取总RNA,根据种属关系接近的台湾眼镜蛇毒APLA2两端非翻译区的保守序列设计引物,利用RT-PCR进行体外扩增,获得磷脂酶A2基因,克隆至pMD18-T载体,经测序筛选出APLA2-1,APLA2-2及一个新的酸性磷脂酶A2(命名为APLA2-3).根据测序结果确定了APLA2-3基因的全序列,并由此推导编码的氨基酸序列. 结果利用Antheprot 4.3c蛋白质序列分析软件包计算它的等电点为4.885,相对分子质量为16.543kD,并预测了它的二级结构和部分理化性质.同源性比较表明,APLA2-3的1~39位氨基酸残基序列与APLA2-2相同,其同源性为64%,而40~108位氨基酸残基序列与APLA2-1相同,其同源性为69%,109位氨基酸残基序列皆不同于这两种APLA2.结论 揭示了APLA2具有基因多样性,可能与物种进化和生物活性有关,并为进一步研究PLA2的结构与功能的关系提供更多的信息.  相似文献   
10.
将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)基因克隆至表达载体pET28a(+),转化入大肠杆菌BL21,经过诱导,SDS-PAGE检测,重组质粒pET28a-APLA2-1在18KD有一明显的表达条带,表达产物APLA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在,将产物变复性后用Sephadex G-75 纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带,通过Western-blot检测,证实纯化产物是酸性磷脂酶A2.对表达的APLA2进行酶活性和药理活性的测定.至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLA2,这将为以后对PLA2的结构与功能的研究打下了良好的基础.  相似文献   
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