异烟肼通过ROS/Caspase-3信号通路诱导L-02细胞凋亡及槲皮素的保护作用

目的：探讨ROS/Caspase-3信号通路在异烟肼（INH）诱导人正常肝细胞（L-02细胞）凋亡中的作用及槲皮素的保护效应。方法：将L-02细胞随机分为对照组、INH组（10 mmol/L INH）、25 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和25 μmol/L槲皮素）、50 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）。各组均处理24 h后，应用MTT法检测L-02细胞存活率，分光光度法检测细胞上清液中LDH活性，Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡率；制备L-02细胞线粒体，利用DCFH-DA和Rho-123荧光探针检测活性氧（ROS）水平及线粒体膜电位（△Ψm），应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果：与对照组比较，INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01），与INH组比较，50 μmol/L槲皮素处理组细胞存活率明显增加（P < 0.01）；INH组细胞LDH活性、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较对照组显著升高（P < 0.01），25和50 μmol/L槲皮素组细胞LDH活力、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较INH组明显降低（P < 0.05或P < 0.01），且50 μmol/L槲皮素组作用更显著；INH组细胞线粒体△Ψm较对照组显著降低（P < 0.01），25和50 μmol/L槲皮素组细胞线粒体△Ψm较INH组明显升高（P < 0.05或P < 0.01），50 μmol/L槲皮素组的作用更加明显；与对照组比较，INH组细胞Caspase-3蛋白表达显著增加（P < 0.01），与INH组比较，25和50 μmol/L槲皮素组细胞Caspase-3蛋白表达明显减少（P < 0.05或P < 0.01），且50 μmol/L槲皮素组作用更明显。结论：INH可以诱导L-02细胞发生凋亡，ROS/Caspase-3信号通路参与了其凋亡的过程；槲皮素对INH诱导的细胞凋亡具有保护效应，机制可能与其减少ROS释放，抑制ROS/Caspase-3信号通路有关。     

槲皮素抑制异烟肼诱导的L-02细胞线粒体氧化应激性DNA损伤

目的:探讨活性氧(ROS)介导的线粒体氧化损伤在异烟肼(INH)诱导L-02细胞DNA损伤中的作用及槲皮素对细胞的保护作用。方法:建立体外培养INH致肝细胞L-02损伤的模型,将细胞分为对照(control)组、INH组、槲皮素低剂量(Que low)及高剂量(Que high)组。利用彗星试验评价细胞DNA损伤;制备L-02细胞线粒体,应用荧光探针DCFH-DA和rhodamine 123检测细胞线粒体ROS水平及线粒体膜电位(ΔΨm);采用TBA法测定丙二醛(MDA)含量;应用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用Western blotting法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bax/Bcl-2值。结果:INH可诱导L-02细胞DNA损伤,使细胞线粒体ROS水平、细胞MDA含量及Bax/Bcl-2值明显增高,并使细胞ΔΨm值和SOD活性明显下降。而槲皮素能减轻细胞DNA损伤,减少细胞ROS水平,增加细胞ΔΨm值,降低细胞MDA含量,增加SOD活性,减少Bax/Bcl-2值。结论:INH可通过诱导细胞线粒体氧化应激导致L-02细胞DNA损伤。槲皮素能减轻INH诱导L-02细胞的DNA损伤,对L-02细胞具有保护作用,可能与其抑制ROS介导的线粒体氧化损伤有关。     

医学生医患沟通能力的培养

医患沟通是在医疗卫生和保健工作中医患双方围绕伤病、诊疗、健康及相关主题以医方为主导通过各种有特征的全方位信息的多途径交流科学地指导诊疗患者的伤病使医患双方形成并建立信任合作关系达到维护人类健康、促进医学发展和社会进步的目的[1].医患沟通能力是医生职业特性的一部分应从医学生的培养抓起以助于医学生学会并掌握沟通的技巧.因此对医学生进行医患沟通能力的培养是我们每一个医学教育者不可推卸的责任.     

宫颈癌组织中PTEN和COX-2的表达与侵袭转移的关系

目的探讨宫颈癌组织中PTEN和COX-2的表达与侵袭转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测68例宫颈癌组织中PTEN和COX-2的表达情况。结果 PTEN在宫颈癌组织中阳性表达率明显低于正常宫颈组织,差异有统计学意义（P〈0.01）,且与淋巴结转移显著相关（P〈0.05）;而COX-2阳性表达率显著高于正常宫颈组织（P〈0.01）,与淋巴结转移显著相关（P〈0.05）;在癌组织中PTEN和COX-2表达呈负相关。结论PTEN和COX-2的异常表达与宫颈癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关,两者共同参与了宫颈癌发生和侵袭转移。     

热应激通过激活NLRP3/IL-1β/IL-6途径介导肝脏炎症损伤效应

目的 探究热应激致肝炎症损伤的分子机制.方法 雌性SD大鼠随机分为对照组和热应激组,38℃暴露建立热应激动物模型,每天暴露2 h,连续3 d,分离肝组织;体外培养的L-02细胞分为对照组、热应激组、热应激+二甲基亚砜(DMSO)组及热应激+白藜芦醇组(100μmol/L),采用5％CO2,41℃暴露建立热应激细胞模型,药物组及溶剂对照组提前给予100μmol/L白藜芦醇或DMSO预处理2 h,再进行热应激暴露,分别收取细胞;以上收取的肝组织及细胞均进行NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)蛋白表达水平及白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 mRNA表达水平检测.结果 ①与对照组相比,热应激可导致肝NLRP3炎症小体的激活,促进caspase-1将IL-1β切割为活性形式,进而导致下游靶基因IL-6的表达上调.敲低L-02细胞中NLRP3表达可显著抑制炎症小体的激活及下游炎症因子级联表达反应的发生;②白藜芦醇可通过抑制NLRP3的表达从而拮抗热应激所致肝细胞炎症因子诱导表达效应.结论 热应激通过NLRP3/IL-1β/IL-6途径诱导肝脏炎症损伤,白藜芦醇能缓解以上炎症损伤反应,在热应激损伤防护中具有潜在应用前景.     

金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞耐药逆转作用

目的:探讨金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞的耐药逆转作用及其可能的作用机制。方法:分别以不同质量浓度(2.5~80 mg·L-1)的金丝桃苷及不同质量浓度(1.25~40 mg·L-1)的长春新碱作用于体外培养的HCT8和HCT8/VCR细胞48 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率,计算各组细胞金丝桃苷和长春新碱的半数抑制浓度(IC50)及金丝桃苷抑制率为5%的药物浓度;采用非毒性剂量金丝桃苷分别与不同质量浓度(1.25~40 mg·L-1)的长春新碱联合作用HCT8/VCR细胞,检测长春新碱的IC50,计算逆转倍数;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3,Caspase-9蛋白活性的变化。结果:金丝桃苷非细胞毒性剂量为0.82mg·L-1。0.82 mg·L-1金丝桃苷可使长春新碱对HCT8/VCR细胞的IC50从65.97 mg·L-1下降至9.94 mg·L-1,逆转倍数为6.63;与单独用长春新碱组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组细胞凋亡率,Caspase-3,Caspase-9蛋白活性均显著提高(P0.01)。线粒体膜电位检测发现,与单独用长春新碱组及金丝桃苷组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组低荧光强度相对细胞数所占比率显著提高(P0.01)。结论:长春新碱与金丝桃苷联合应用后可增强Caspase-3,Caspase-9蛋白活性,降低线粒体膜电位,提高HCT8/VCR细胞的凋亡率,从而产生耐药逆转作用。     

Nrf2/ARE信号通路在槲皮素抑制异烟肼诱导的肝细胞线粒体氧化损伤中的作用

目的：探讨核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路在槲皮素抑制异烟肼（INH）诱导的L-02细胞线粒体氧化损伤中的作用。方法：将L-02细胞随机分为阴性对照组、INH组（10 mmol/L INH）、单独槲皮素组（50 μmol/L槲皮素）、槲皮素保护组（10 mmol/L INH+50 μmol/L槲皮素）,各组细胞处理24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率;荧光探针DCFH-DA检测细胞线粒体活性氧（ROS）水平;比色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽（GSH）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,评价细胞线粒体氧化损伤状态。Western blot检测Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白表达水平,评价细胞内Nrf2/ARE信号通路的变化。结果：与阴性对照组比较,INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,线粒体ROS水平和MDA含量显著升高（P < 0.01）,GSH含量及SOD活性明显降低（P < 0.01）;与INH组相比较,槲皮素保护组细胞存活率明显增加（P < 0.01）,线粒体ROS水平和MDA含量显著减少（P < 0.01）,GSH含量及SOD活性明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。INH组细胞质中HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达较阴性对照组明显增加（P < 0.01）;槲皮素保护组细胞质中HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达明显高于INH组（P < 0.01）。结论：槲皮素能够抑制INH诱导的肝细胞线粒体氧化损伤,这可能与槲皮素对Nrf2/ARE信号通路的活性调节相关。     

槲皮素对异烟肼诱导肝细胞毒性的保护作用及其机制

目的： 探讨活性氧（ROS）介导的线粒体氧化损伤在异烟肼（INH）诱导肝细胞毒性中的作用及槲皮素对INH肝细胞毒性的保护效应及机制。方法： 将L-02细胞随机分为5组：异烟肼组（10 mmol/L INH）、槲皮素处理组（10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）、谷胱甘肽（GSH）预处理组（20 mg/mL GSH、10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）、谷胱甘肽组（20 mg/mL GSH）、对照组（等体积的无血清培养基）,作用24 h后,采用差速离心法制备细胞线粒体,荧光探针DCFH-DA和Rho-123检测细胞线粒体ROS水平及膜电位;TBA比色法测定丙二醛（MDA）含量;DPNH比色法测定蛋白质羰基含量;ELISA法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷（8-OHdG）含量。结果： 与对照组相比,INH处理细胞后细胞线粒体ROS水平升高（P < 0.01）,膜电位降低（P < 0.01）。与异烟肼组相比,槲皮素处理组细胞线粒体ROS水平降低（P < 0.01）,膜电位升高（P < 0.05）;谷胱甘肽预处理组细胞线粒体ROS水平低于槲皮素处理组（P < 0.05）,线粒体膜电位高于槲皮素处理组（P < 0.05）。与对照组相比,细胞经INH处理后MDA、蛋白质羰基及8-OhdG的含量增加（P < 0.01）。与异烟肼组比较,应用槲皮素后可使MDA、蛋白羰基、8-OHdG的含量减少（P < 0.01）;谷胱甘肽预处理组MDA、蛋白羰基、8-OHdG含量低于槲皮素处理组（P < 0.05）。结论： 在本实验条件下,INH可诱导L-02细胞线粒体氧化损伤,且ROS参与了此过程;槲皮素对INH诱导的线粒体氧化损伤具有保护效应,其机制可能与其抑制ROS水平有关。     

以强化学生实践技能为导向的药理学课程体系改革探索

针对药理学教学中存在的问题,以强化学生实践技能为导向,在我院2008级临床医学专业药理学教学中采用了核心内容系统讲授与模拟实践的病案讨论相结合及科研辅助教学的方法并进行了问卷调查和期末考试成绩分析,结果表明新药理学教学方法的效果优于传统教学方式。     

内皮抑素联合介入治疗肝癌中血管生成的研究

目的 探讨内皮抑素联合介入治疗肝癌中血管生成的研究。方法 2009年8月～2011年8月,27例肝癌患者中15例多次行单纯肝动脉化疗栓塞（TACE）,12例内皮抑素联合TACE,在手术切除后的病理标本中的采用免疫组化方法分析两组血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况和平均微血管密度（MVD）值的差异。结果 单纯组VEGF的表达明显高于内皮抑素组（P〈0．05）;单纯组MVD值显著高于内皮抑素组（P〈0．05）。结论 内皮抑素联合TACE能够抑制肿瘤血管的生成,减少肿瘤增长及转移的机会,值得临床进一步的研究与推广。