实验性动脉粥样硬化家兔主动脉鞘磷脂酶活性与神经酰胺含量变化和大黄素的干预作用

背景：神经酰胺信号转导途径可能在致血管内皮细胞凋亡、进而引起泡沫细胞的形成,与平滑肌细胞增殖等动脉粥样硬化发生、发展过程中起重要作用.目的：观察家兔实验性动脉粥样硬化发生时主动脉鞘磷脂酶活性、神经酰胺含量的变化以及大黄素的干预作用,并与阳性药物非诺贝特进行对照.设计：完全随机对照设计.单位：中山大学药学院药理毒理实验室.材料：实验于2003-07/12在中山大学药学院药理毒理实验室完成,选择新西兰雄性家兔48只,用高胆固醇饮食复制动脉粥样硬化模型40只,另设8只为正常对照组,模型动物随机分为模型组、大黄素5 mg/kg组、大黄素10 mg/kg组、大黄素20 mg/kg组、非诺贝特25 mg/kg组,每组8只.方法：各组在模型复制的第7周起开始用药.大黄素各组每日分别灌胃5 mg/kg,10 mg/kg,20 mg/kg大黄素;非诺贝特25 mg/kg组每日灌胃25 mg/kg非诺贝特,各药用2 mL生理盐水制成混悬剂,1次/d,正常对照组及模型组灌胃等剂量生理盐水,共4周.每只家兔给予喂养食物限制在135～150g/d,动物分笼饲养.主要观察指标：[1]各组家兔主动脉内膜脂质斑块面积.[2]各组家兔血清总胆固醇、三酰甘油含量.[3]各组家兔血浆超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量.[4]各组家兔主动脉壁鞘磷脂酶活性和神经酰胺含量.结果：48只家免均进入实验分析.[1]主动脉内膜脂质斑块面积百分率：模型组血管内膜脂质斑块面积（48.87&;#177;15.5）%,大黄素各组均小于模型组（P＜0.05或0.01）,以大黄素10 mg/kg组作用明显（22.19&;#177;12.9）%.非诺贝特25 mg/kg组与模型组基本一致（P＞0.05）.[2]血清总胆固醇及三酰甘油含量：正常对照组家兔主动脉内膜光滑;大黄素各组血清总胆固醇及三酰甘油含量与模型组基本一致（P＞0.05）.非诺贝特25 mg/kg组显著低于模型组（P＜0.05）.[3]血浆超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量：大黄素各组家兔血超氧化物歧化酶活性显著高于模型组（P＜0.05,P＜0.01）,丙二醛含量大黄素10 mg/kg,20 mg/kg组均显著低于模型组（P＜0.05）.非诺贝特25 mg/kg组与模型组基本一致（P＞0.05）.[4]主动脉鞘磷脂酶活性与神经酰胺含量：模型组明显高于正常对照组,大黄素5,10,20 mg/kg组明显低于模型组.非诺贝特25 mg/kg组与模型组基本一致（P＞0.05）.[5]相关性分析：主动脉鞘磷脂酶活性与血胆固醇含量呈正相关（r=0.542,P＜0.01）、与血丙二醛水平呈正相关（r=0.789,P＜0.01）,与血超氧化物歧化酶活性呈负相关（r=-0.936,P＜0.01）;神经酰胺含量与血胆固醇含量呈正相关（r=0.433,P＜0.05）,与血丙二醛水平呈正相关（r=0.673,P＜0.01）,与血超氧化物歧化酶活性呈负相关（r=-0.876,P＜0.01）.结论：大黄素降低总胆固醇、三酰甘油含量的作用不明显,但通过抗氧化、抑制神经酰胺通路的激活、降低鞘磷脂酶活性与神经酰胺的含量,保护了血管内皮细胞,动脉内膜脂质斑块面积明显减少,提示大黄素抗实验性动脉粥样硬化作用与调节神经胺信号转导途径密切相关.     

激活PPARα表达对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大及 NFATc4与p65-NFκB相互作用的影响*

 目的：研究PPARα激动剂非诺贝特（fenofibrate）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响及机制。方法：在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型中加入非诺贝特（10 μmol/L）预处理1 h后,采用real-time PCR检测肥大标志物ANF、BNP和β-MHC mRNA水平变化,Western blotting检测NFATc4和p65-NFκB核转位的变化,免疫共沉淀检测心肌细胞核内p65-NFκB与NFATc4之间的相互作用,EMSA检测NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的变化。结果：非诺贝特可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4和p65-NFκB的入核,以及两者在核内的相互作用。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的增加。结论：非诺贝特可增强心肌细胞核内PPARα与NFATc4之间的相互作用,并减弱p65-NFκB与NFATc4之间的相互结合,进而降低NFATc4在BNP启动子上的DNA结合活性,这可能是其抑制AngⅡ诱导的心肌肥大的重要机制。     

氯沙坦、依那普利及其合用对腹主动脉缩窄型高血压大鼠的影响

目的　探讨依那普利、氯沙坦及其合用对腹主动脉缩窄型高血压大鼠血压、心肌肥厚程度和心肌组织丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)的活性及表达的影响。方法　采用腹主动脉缩窄型高血压大鼠模型 ,然后将动物随机分为 7组 (n均 =6 )。分别为氯沙坦 (10 mg· kg- 1 · d- 1 )组 ,氯沙坦 (30 mg· kg- 1 · d- 1 )组 ,依那普利 (4mg· kg- 1 · d- 1 )组 ,依那普利 (12 mg· kg- 1· d- 1 )组 ,依那普利合用氯沙坦 (4m g· kg- 1· d- 1和 10 m g· kg- 1· d- 1 )组和安慰剂组。以假手术组作对照。给药 5周后测定左心室重量与体重比值、平滑肌肌动蛋白表达和 MAPK蛋白表达变化。结果　与假手术组比较 ,大鼠腹主动脉缩窄术后 6周血压明显升高 ,心肌组织发生明显肥厚 ,平滑肌肌动蛋白和 MAPK蛋白表达增高 (P<0 .0 1)。与安慰剂组比较 ,氯沙坦、依那普利及其合用可降低平均动脉血压 ,减轻心肌肥厚 ,同时降低平滑肌肌动蛋白和 MAPK蛋白表达 (P<0 .0 1) ,且氯沙坦、依那普利的作用呈剂量依赖性。与单用氯沙坦或依那普利比较 ,氯沙坦和依那普利合用可进一步降低平均动脉血压、减轻心肌肥厚和 MAPK蛋白表达 (P <0 .0 5 )。结论　 MAPK是介导高血压心肌肥厚的重要信号分子。氯沙坦、依那普利均能减轻心肌肥厚和 MAPK蛋白?     

开智灵组方改善小鼠记忆作用研究

目的观察开智灵组方对改善记忆的影响及其作用机制。方法小鼠随机分为六组,分别为正常对照组、开智灵组方低剂量组、中、高剂量组、核桃酶解提取物组(66.67 mg/kg)、牛磺酸组(33.33 mg/kg),实验组小鼠每天灌胃给药0.2 m L/10 g,每日一次,30 d后通过避暗实验、水迷宫实验测试学习成绩,并进行重复性实验和消退实验。在避暗实验重复性实验结束后,试剂盒测定小鼠海马中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;在水迷宫实验重复性实验中,Western blot测定小鼠海马中脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶B(Trk B)蛋白含量表,Real-time PCR测定m RNA含量表达。结果开智灵组方在小鼠避暗实验、小鼠水迷宫实验前后两次结果均为阳性。避暗实验重复性实验中各给药组小鼠海马组织中SOD含量有升高趋势、MDA含量有降低趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。水迷宫实验重复性实验中各给药组小鼠海马组织中BDNF、Trk B的m RNA和蛋白表达量均上调,差异有统计学意义(P0.05)。结论开智灵组方对小鼠具有良好的改善记忆的作用,其机制可能与调节脑内BDNF及Trk B表达有关。     

C-反应蛋白与动脉粥样硬化炎症的关系

Inflammation plays a pivotal role in atherogenesis. In addition to being a potent predictive and prognostic marker for major cardiovascular events, recent evidence indicates that C-reactive protein (CRP) might directly promote atherogenesis by exerting direct effects on vascular cells. Thus, CRP will become important novel pharmaceutical targets for the treatment of atherosclerosis. This review presents an overview of the current knowledge about the pathological role of CRP in atherosclerosis initiation and progression.     

稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢细胞株的建立

目的 将GPR109A基因插入pEGFP-N3载体中构建重组质粒pEGFP-GPR109A,并建立稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞株.方法 构建重组质粒pEGFP-GPR109A,重组质粒转化大肠杆茵DH5a,重组质粒经PCR、酶切、测序验证正确后,应用脂质体转染技术将该质粒导入CHO细胞,用抗生素G418筛选稳定表达的细胞.倒置荧光显微镜观察克隆细胞株荧光信号,RT-PCR检测GPR109A基因mRNA表达,Westem Blotting检测绿色荧光蛋白与烟酸受体GPR109A的融合蛋白(GFP-GPR109A)的表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位.结果 pEGFP-GPR109A真核表达质粒构建正确,融合蛋白GFP-GPR109A在CHO细胞中稳定表达,表达的融合蛋白主要定位于细胞膜.结论 成功构建pEGFP-GPR109A真核表达载体并建立其稳定表达的CHO细胞株;该细胞株的建立有助于GPR109A的更多生理病理功能研究,也为下一步抗动脉粥样硬化的药物筛选奠定了基础.     

海参肽对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用研究

目的研究海参肽对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化和免疫功能的影响。方法将60只BALB/c小鼠,分为正常组(给予生理盐水)、模型组(给予生理盐水)、海参肽低、中、高三个剂量组(125、250、500 mg/kg)和VE组(100mg/kg),采用颈背部皮下注射1 000 mg/kg剂量的D-半乳糖来建立小鼠衰老模型,记录小鼠的体重变化,计算胸腺和脾脏指数,测定血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)活力、脂褐素(Lipo)含量、免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-2(IL?2)含量、心肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和Lipo含量。结果与模型组相比,海参肽中、高剂量组活力、心肝组织的SOD活力,降低血清Lipo含量,差异均有统计学意义(P0.05);海参肽高剂量组(500 mg/kg)能升高血清免疫因子IgG、IL?2含量,降低心脏组织的Lipo含量,差异有统计学意义(P0.05)。结论海参肽对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠具有提高免疫和增强抗氧化能力的作用,能够延缓衰老。     

构叶的降压作用及其机制初步分析

实验表明构叶浸膏剂(2.5g,5g/kg)灌胃,能剂量依赖性地降低自发性高血压大鼠血压。并观察到在大鼠肛尾肌,构叶总甙(0.1％,0.3％)能使去氧肾上腺素累积量效曲线右移,同时最大效应下降。用L—B公式证明去氧肾上腺素的解离常数未变,说明构叶总甙具有非竞争性α受体阻断作用。该作用可能与构叶的降压效应有关。     

糖原合成酶激酶-3β和心肌肥厚的负性调控

心肌肥大和心力衰竭是大多数心血管疾病的严重和终末阶段,研究其信号转导机制具有重要意义。目前,治疗心肌肥厚的药物主要是以促肥厚的信号分子作为靶点,例如血管紧张素转化酶抑制剂、B肾上腺素阻断剂,能够减少肥厚反应,但不能完全逆转肥厚。因此,开发另一类作用机制完全不同但能有效阻断病理性心肌肥厚的药物就显得十分必要。日益增多的证据表明,探索心肌肥大的负性调控机制和研究心肌肥大的致病机制一样重要。     

丹皮酚对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的探讨丹皮酚对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响。方法以氧化型低密度脂蛋白诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化为模型,油红O染色检测细胞内脂质,荧光探针Dil标记氧化低密度脂蛋白(oxidized low-densitylipoprotein,oxLDL)并结合高内涵筛选成像系统检测oxLDL摄取,实时荧光定量PCR检测CD36和清道夫受体A(scaven-ger receptor A,SR-A)表达。结果成功建立了RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型,经不同浓度丹皮酚作用后,细胞内脂质减少,oxLDL摄取下降,SR-A基因表达下降,但CD36基因表达无显著改变。结论丹皮酚可抑制RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成,其作用机制可能与下调SR-A表达有关。