胸腺基质淋巴细胞生成素在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜的表达

目的:探讨过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的表达及分布。方法:5~6周龄BALB/c雌性小鼠经卵白蛋白(OVA)隔1周2次致敏,实验组小鼠第2次致敏1周后每隔1 d给予溶解于350μL无菌PBS的OVA灌胃,而对照组则不予致敏,仅在致敏后接受与实验组相同的干预,于第10次灌胃后2 h内处死,取血离心收集血清做ELISA检测IL-4、IFN-γ及OVA-IgE水平,取肠系膜淋巴结分离细胞培养72 h离心收集上清测IL-4及IFN-γ的水平,取肠组织行HE染色观察肠组织病理改变,行免疫组织化学染色观察TSLP的分布,实时定量RT-PCR检测TSLP mRNA的表达情况。结果:与对照组相比,实验组小鼠结肠黏膜充血水肿,腺区有大量炎性细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞。TSLP染色强度显著增强,在上皮呈连续性表达,并在腺区大量分布。TSLP mRNA平均表达水平较对照组显著提高(P<0.01)。TSLP mRNA表达水平与肠系膜淋巴结分离细胞的培养上清中IL-4表达水平呈显著正相关(r=0.904,P<0.01);而与IFN-γ水平呈显著负相关(r=-0.886,P<0.01);同时实验组小鼠血清中可见高水平OVA-IgE的表达。结论:TSLP在正常肠黏膜存有生理性表达,而在过敏性腹泻小鼠结肠近端黏膜表达量显著增加,TSLP的过度表达可能是促进过敏性腹泻发生发展的重要环节。     

mIL-21／PcDNA3．1真核表达载体的构建及鉴定

目的构建mIL-21／PcDNA3．1真核表达载体。方法从ConA活化的BALB／c小鼠脾细胞中抽提总RNA,RT—PCR方法扩增小鼠IL-21基因,XhoⅠ和HindⅢ双酶切后克隆入真核细胞高效表达载体pcDNA3．1中,构建小鼠IL-21真核表达载体mIL-21／PcDNA3．1,并经PCR、限制性酶谱分析和DNA序列分析对重组子的正确性进行鉴定。结果构建的小鼠IL-21真核表达载体mIL-21／PcDNA3．1经PCR、限制性酶谱分析和DNA序列分析证明获得了目的基因,其序列与Genbank中登录的小鼠IL-21基因序列完全一致。结论成功构建了。mIL-21／PcDNA3．1真核表达载体,为IL-21分子的进一步研究奠定了基础。     

过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中T细胞亚群的表达与Th1/Th2型细胞因子的关系

目的 检测小鼠过敏性腹泻模型大肠黏膜中T细胞亚群的表达和血清中Th1型细胞因子(IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4)和OVA-IgE水平,探讨腹泻小鼠大肠黏膜中T细胞亚群的表达特点与Th1/Th2型细胞因子的关系.方法 雌性BALB/c小鼠20只随机分成两组,即对照组和实验组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IFN-γ,IL-4及OVA-IgE的水平,取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变,免疫组织化学染色观察T细胞亚群的表达情况.结果 与对照组相比,实验组小鼠非特异性炎症反应明显,上皮不规则排列,腺区存在大量白细胞(WBC)浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞(EOS)浸润.CD3,CD4,CD8免疫组织化学染色显示,与对照组相比,肠黏膜固有层可见大量CD3+,CD4+,CD8+细胞.实验组IL-4,OVA-IgE分泌水平明显升高,IFN-γ分泌水平和IFN-γ/IL-4比值显著降低(P<0.01).嗜酸粒细胞百分比与CD4+/CD8+比值呈显著正相关(P<0.05).结论 过敏性腹泻小鼠大肠黏膜局部CD4+T细胞亚群明显增加,CD4/CD8细胞比例失衡,并与Th1/Th2型细胞因子向Th2型漂移及EOS浸润程度相关.     

三棱、莪术对肝纤维化大鼠IL-1、IL-6、TNF-α的影响

目的：观察三棱、莪术对免疫性肝纤维化大鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α的影响及其抗肝纤维化的作用机制。方法：用猪血清腹腔注射建立免疫性肝纤维化大鼠模型，以血清中IL-1、IL-6、TNF-α的浓度变化，光、电镜下的肝组织病理学改变为观察指标，观察三棱、莪术对大鼠免疫性肝纤维化的影响。结果：免疫性肝纤维化大鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α水平明显增高；三棱、莪术可下调肝纤维化大鼠模型IL-1、IL-6、TNF-α水平趋向于正常；并能改善肝脏组织病理学变化。结论：三棱、莪术通过减少IL-1、IL-6、TNF-α的合成与释放，发挥抗肝纤维化作用；在抗肝纤维化过程中具有免疫调控作用。     

NKG2D及其配体研究进展

NKG2D是较为独特的NK细胞活化性受体，其配体具有多样性，因而其识别机制较独特；其表达范围不仅局限于NK细胞，还在T细胞、巨噬细胞、树突状细胞中有表达，功能上，不仅有直接刺激作用，还能作为协同刺激分子传递第二信号。NKG2D及其配体的研究对抗肿瘤免疫、抗感染免疫、自身免疫病的认识具有重要意义。本文对NKG2D及其配体的研究进展作一综述。     

流行性出血热病毒特异性转移因子的研究

对流行性出血热病毒(EHFV)特异性转移因子(EHFV-TF)的制备、特性及在小鼠体内的活性作用进行了研究。其理化性状与普通 TF 非常相似,能激活淋巴细胞的 E 受体(激活率为65.54%),明显提高 Et-RFC 的形成率。E-HFV-TF 还具有特异性抗原依赖活性:①促进 BALB/C 小鼠和 NIH 裸鼠特异性抗体的产生;②促进 LACA 小鼠脾细胞对 EHFV 反应的特异性应答;③促进脾细胞在 EHVF 存在时对 PHA 诱导下的增殖反应(促时率为151.3%)。EHFV—TF可推迟动物感染 HEFV 后的发病期,延长病程和推迟死亡时间;减轻发病动物脑肺充血、出血、水肿现象和肝肾病理损害程度。结果表明 EHFV-TF 不仅具有提高细胞免疫的非特异活性,而且具有对 EHFV 抗原的依赖活性。本研究提示,E-HFV-TF 可用于 EHFV 感染病人的治疗。     

乙型肝炎特异性转移因子的研究

我们用纯化的人乙肝疫苗免疫健康成猪制备含有特异性转移因子(HBV-TF)的白细胞透析物(DLE)。HBV-TF是与TF-p非常相似的化学制剂,都具有无毒性。HPLC法分析结果发现,HBV特异TF的第6峰偏高,充分证实经免疫后的猪细胞中TF活性有增高趋势,HBV-TF对PHA诱导的人淋巴细胞增殖的影响看出,HBV-TF具有依赖抗原的特异性活性,在7例HBsAg阳性的乙肝患者的周围血淋巴细胞中加入HBV-TF,对淋转表现出抑制作用。制剂的注射结果说明,HBV-TF注射组的小鼠抗乙肝特异性抗体显著增长,HBV-TF可特异地转移免疫信息给纯种鼠,而TTH-TF则无此作用。实验提示,抗体的产生是多细胞的行为,HBV-TF不仅可增强受者的细胞的免疫应答,亦可增强与调节特异抗体的产生。我们对97例乙肝HBsAg慢性携带者、慢迁肝、慢活肝进行实验性治疗观察,用HBV-TF配合中药齐墩果酸片不仅能改善机体临床症状和体征,亦能改善机体免疫状态,降低乙肝传染性指标,使HBeAg阴转率达53.3％～56％。     

豚鸭转移因子对异种T细胞E受体的激活试验

由非哺乳动物豚鸭血制备的转移因子,对人脐血及猪血 T细胞 E 受体进行温育激活试验,其结果看出,豚鸭转移因子可有跨越种属差异所表达的生物活性作用。这将提示在禽畜中开发制备转移因子材料资源,用于人畜疾病的防治有着重要的价值。     

卡介苗穿梭质粒pMSIFN-α2a的构建与鉴定

目的 构建分泌性表达IFN-α2a的卡介苗重组质粒。方法 分别以卡介苗（BCG）和IFN-α2a cDNA为模板，通过PCR扩增得到约117bp的BCG-Ag85B信号肽序列和495bp的IFN-α2a基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌．卡介苗穿梭表达载体pMV261重组，得到重组质粒pMS。再将IFN-α2a基因序列克隆至pMS中，得到重组质粒pMSIFN-α2a。结果 质粒pMSIFN-α2a用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实，克隆基因BCG-Ag85B和IFN-α2a正确插入载体pMV261。结论 重组质粒pMSIFN-α2a可望在BCG中分泌性表达细胞因子IFN-α2a，从而促进IFN-γ的释放，该质粒的构建成功为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础。