真鱿软骨硫酸软骨素的提取、鉴定及结构分析

目的 采用酶解提取法,从真鱿软骨中提取1种新型的硫酸软骨素,对其化学结构进行研究。方法 采用酶解法、氯化十六烷基吡啶（CPC）沉淀法从鱿鱼软骨中提取纯化硫酸软骨素,通过PMP柱前衍生液相色谱法、聚丙烯酰氨凝胶电泳（PAGE）、核磁共振波谱法（NMR）和液质联用分析（HPLC-MS）,对硫酸软骨素的化学结构进行分析。结果 使用木瓜蛋白酶酶解鱿鱼软骨,乙酸缓冲液在料液比为1:30（g/mL）条件下,硫酸软骨素的提取率最高,蛋白质残留最低,经过CPC纯化,得到了纯度高达99.5%的硫酸软骨素。由PAGE电泳可以看出其分子量很大且能够被硫酸软骨素ABC酶酶解。单糖分析表明,鱿鱼硫酸软骨素主要由乙酰氨基半乳糖、葡萄糖醛酸以及少量的葡萄糖组成。硫酸软骨素ABC酶将其水解为聚合度2-18的偶数糖,采用HPLC-MS分析,可以得到所有寡糖的全指纹谱图。结合1H-NMR分析可知,从真鱿软骨提取出来的硫酸软骨素主要含有6-单硫取代的硫酸软骨素C二糖单元和4,6-双硫取代硫酸软骨素E二糖单元,其所占比例分别为60.3%和39.7%,硫酸根含量为22.3%,是属于高硫的硫酸软骨素。结论 从真鱿软骨中提取出了具有高硫酸根含量的硫酸软骨素组分,可用于开发保健食品和海洋药物。