壮阳药效动物实验评价方法的改进

目的 对壮阳药效评价方法进行优化,以探求更为有效的候选药物筛选方法.方法 模型组大鼠均灌胃给予西地那非10 mg/kg,对照组大鼠给予相同容量的生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃给药14 d.每次给药后连续记录2h内大鼠阴茎勃起、阴部理毛、爬背次数和参与动物数,并计算PEI值.采用改良的壮阳药效评价方法,整个过程采用摄像头观察并在不同时间段给予雌鼠诱导.结果 在雌鼠诱导组中,模型组大鼠给药后2 h PEI值较对照组明显升高(P＜0.05).在模型组中,与人为观察组相比,摄像头观察组大鼠给药后2 h PEI值明显升高(P＜0.05)；与非雌鼠诱导组相比,雌鼠诱导组大鼠给药后2 h PEI值明显升高(P＜0.05)；与持续诱导组相比,间断诱导组2h PEI值无明显差异,但60 ～ 120 min时间段PEI值明显升高(P＜0.05).结论优化后的壮阳药效评价方法能更为有效的评价候选药物的壮阳药效.     

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的：对重组人肝细胞生长因子（Recombinant human hepatocyte growth facor,rhHGF）进行初步纯化及鉴定。方法：培养上清液经过离心、超滤，在FPLC系统上经肝素亲和层析分离纯化，用ELISA法检测、收集rhHGF。SDS-PAGE电泳鉴定纯度和相对分子质量，大鼠原代肝细胞培养法检测rhHGF的生物学活性。结果：rhHGF主要在0.9-1.3mol/L NaCl范围内被洗脱，由约62000和34000两个亚基组成，明显促进大鼠肝细胞DNA合成。结论：经肝素亲和层析分离，从表达rhHGF的CHO细胞培养上清液中纯化出有活性的rhHGF。     

肝细胞生长因子与组织器官损伤再修复

组织器官损伤后，肺、脾及损伤器官产生的肝细胞生长因子（ＨＧＦ）进入血浆，在损伤部位被水解为有活性的二聚体，促进组织器官的修复。ＨＧＦ具有重要的临床应用价值     

中华眼镜蛇蛇毒因子的简易提纯及鉴定

目的探索从中华眼镜蛇（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｃｏｂｒａ,Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）蛇毒中一次性快速分离提纯具有抗补体活性及溶血活性的中华眼镜蛇蛇毒因子子质量测定,并鉴定其活性与毒性。结果本法ＣＣＶＦ得率高于２％,电泳图谱呈单一区带,由３个亚基组成,相对分子质量为１４５ ８００,抗补体及溶血活性强,毒性低。结论本法操作简单,时间短,纯度高,为一实用高效快速提纯方法。     

荧光法研究3种甲基黄嘌呤类生物碱与牛血清白蛋白的相互作用

目的:研究咖啡因、茶碱、可可碱3种甲基黄嘌呤类生物碱与牛血清白蛋白(BSA)结合反应的荧光光谱行为,了解其与蛋白质结合的信息。方法:采用荧光光谱法研究25℃和37℃时3种生物碱不同浓度对BSA的荧光猝灭作用,通过Stern-Volmer曲线和Perrin曲线线性拟合计算得到动态猝灭常数和静态猝灭常数,判断猝灭机制;计算结合常数、结合位点数及热力学函数ΔH、ΔS、ΔG,判断其结合作用力模型。结果:随着3种生物碱浓度升高,BSA内源荧光强度有规律地降低;随温度的升高,静态猝灭常数和结合常数均降低,而3种生物碱与BSA的结合常数差别较大,但结合位点数均接近1;ΔG<0,ΔH<0,ΔS>0。结论:3种生物碱能较显著猝灭BSA的荧光,且机制均为静态猝灭,与白蛋白之间均存在以疏水相互作用为主的结合作用;3种结构相近的生物碱与BSA的相互作用存在差异。     

现代荧光光谱法在药物与蛋白相互作用研究中的应用

药物与蛋白相互作用是生命科学研究的重要领域,而荧光法是研究药物与蛋白相瓦作用的重要方法.文中综述了药物与蛋白相瓦作用的荧光猝灭法、荧光敏化法、同步荧光光谱、荧光偏振法、三维荧光光谱和时间分辨荧光法等.     

五灵肩周丸镇痛抗炎作用和急性毒性研究

目的:研究五灵肩周丸的镇痛抗炎作用及急性毒性。方法:采用小鼠扭体实验和甲醛致痛模型来观察五灵肩周丸的镇痛作用;抗炎实验采用大鼠棉球肉芽肿实验及小鼠二甲苯致耳廓肿胀模型;采用小鼠单次ig的方法测定其LD50。结果:给予3.8,7.6 g·kg-1的五灵肩周丸能明显减少醋酸所致小鼠的扭体次数(P<0.05),抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀(P<0.01);五灵肩周丸在3.8,11.4 g·kg-1时能明显减轻甲醛致痛实验中小鼠的Ⅰ相疼痛反应(P<0.01),但对甲醛引起的Ⅱ相疼痛反应没有显著影响;剂量为7.6 g·kg-1时对大鼠棉球肉芽肿的形成有明显的抑制作用(P<0.05);急性毒性试验表明,其LD50为148.4 g·kg-1。结论:五灵肩周丸具有明显的镇痛抗炎作用,且具有较高的安全性。     

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的对重组人肝细胞生长因子（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｏｒ, ｒｈＨＧＦ）进行初步纯化及鉴定。方法 培养上清液经过离心、超滤,在ＦＰＬＣ系统上经肝素亲和层析分离纯化,用ＥＬＩＳＡ法检测、收集ｒｈＨＧＦ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电 泳鉴定纯度和相对分子质量,大鼠原代肝细胞培养法检测ｒｈＨＧＦ的生物学活性。结果ｒｈＨＧＦ主要在０．９～１．３ ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ 范围内被洗脱,由约６２ ０００和３４ ０００两个亚基组成,明显促进大鼠肝细胞ＤＮＡ合成。结论　经肝素亲和层析分离,从 表达山ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞培养上清液中纯化出有活性的ｒｈＨＧＦ。     

HGF／C—Met促进肝细胞生长的跨膜信号转导

肝细胞生长因子与其受体Ｃ－Ｍｅｔ蛋白相结合，激活受体蛋白质酪氨酸激酶（ＰＴＫ），使受体自身磷酸化，并使胞浆信使蛋白质磷酸化，同时启动几条信号通路，将增殖信号传至细胞核内，通过调节特定基因的表达而促进肝细胞的生长     

超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中替诺福韦的浓度

目的:建立大鼠血浆中替诺福韦浓度的测定方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。取6只大鼠单次灌胃给予富马酸替诺福韦酯100mg.kg-1,检测给药45min后血浆中药物浓度,以恩替卡韦为内标,选用阳离子固相萃取柱除去血浆中的蛋白质。色谱柱为AcquitybenUPLC-C18,流动相为0.2%甲酸水溶液(含40mmo.lL-1醋酸铵)-乙腈=97:3,流速为0.25mL.min-1,柱温为40℃,电喷雾正离子(ESI+)源,监测离子对分别为质荷比(m/z)287.9→175.7(替诺福韦)和m/z277.9→151.7(恩替卡韦)。结果:替诺福韦检测浓度的线性范围为10～800ng.mL-1(r=0.9992),最低检测限为10ng.mL-1,回收率为(100.22±9.47)%～(102.76±4.99)%,日间、日内RSD均小于9.4%;给药45min后血浆样品中替诺福韦的平均浓度为819.2ng.mL-1。结论:该方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于血浆中替诺福韦的浓度测定。