小鼠骨髓树突状细胞的培养扩增及生物学特性分析

背景:树突状细胞是目前已知功能最强的专职性抗原递呈细胞,但树突状细胞在体内分布广泛且数量较少,获得大量的树突状细胞是研究树突状细胞特性和功能的前提。目的:建立小鼠骨髓源树突状细胞体外培养和扩增方法,观察其形态和相关特征。设计、时间及地点:树突状细胞形态学观察实验,于2006-08/2007-05在中山大学中山眼科中心实验室完成。材料:健康雌性C57BL/6小鼠。方法:在无菌条件下提取C57BL/6鼠骨髓细胞,分离单个核细胞,以小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4协同诱导下培养,加用磷酸脂多糖刺激,分成磷酸酯多糖-树突状细胞和单纯树突状细胞组,前者在培养加入磷酸酯多糖,后者不加。主要观察指标:应用光镜和电镜下观察树突状细胞的形态,流色细胞仪检测鉴定其生物学特征。结果:体外培养2周后具有典型的树突状细胞形态,光镜下显示细胞表面不规则,呈树突状突起,电镜下可见培养的细胞具有典型树突状细胞的形态特征,流式细胞鉴定为髓系树突状细胞,高表达MHCII类分子及共刺激分子(MHCII,CD80,CD83,CD11c)。单纯树突状细胞组的细胞中度表达MHCⅡ类分子,低水平表达共刺激分子,刺激T细胞增殖的能力较弱;...     

锥兰联合茜素红活细胞染色法观察角膜中央碱烧伤内皮细胞愈合过程

目的:研究角膜碱烧伤内皮细胞的愈合过程。方法:锥兰联合茜素红内皮细胞染色法对角膜中央碱烧伤内皮细胞形态学变化进行观察。结果:伤后20分钟内皮细胞已破坏。72小时,损伤区的周边内皮细胞变形向创面内迁移。第7天后缺损区大部分范围均可见梭形细胞覆盖。结论:兔碱烧伤损伤区内皮细胞的修复由邻近内皮细胞变形,增殖和移行长入创面内完成,修复的内皮细胞具有纤维细胞特征。眼科学报1999;15:218-220。     

苯并卟啉衍生物单环酸A光动力杀伤人鼻咽癌细胞株的实验研究

目的：研究苯并卟啉衍生物单环酸Ａ（ＢＰＤ）光动力杀伤人鼻咽低分化鳞癌ＣＮＥ－２细胞株的作用机理。方法：在体外培养的ＣＮＥ－２细胞株中加入不同浓度的ＢＰＤ后,用６９０ｎｍ单色光照射仪照射,照光能量分别为１．２Ｊ／ｃｍ＾２、２．４Ｊ／ｃｍ＾２、４．８Ｊ／ｃｍ＾２ ３组。ＭＴＴ法检测细胞活性,并收集细胞进行电镜检查。结果：在同一光照能量下,不同浓度ＢＰＤ对ＣＮＥ－２细胞的杀伤作用随ＢＰＤ剂量的增大而增强     

PCR扩增抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因

目的：获得抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因。方法：从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,逆转录形成cDNA,用扩增小鼠K轻链可变区基因的引物,通过RT－PCR方法,扩增基因,1．5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果：用轻链引物扩增获得340bp的基因片段。结论;从三株杂交瘤细胞中获得高纯度的总RNA;用RT－PCR方法从一株杂交瘤细胞成功克隆了抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因,为基因工程抗体研究奠定了良好基础。     

眼眶良性横纹肌瘤一例

患者女性，3岁。因左眼球突出3年，于2003年10月22日来我院就诊。患者出生时左眼球即突出，以后逐渐加重，但无眼红，眼痛等症状，睡眠时眼睑闭合良好。家族中无类似病史，全身体检无明显异常。眼部检查：双眼视力检查不合作；左眼下睑退缩，内翻，无红肿；结膜无充血，角膜透明，虹膜纹理清晰，瞳孔直径3mm，对光反应灵敏；     

人胚胎视网膜前体细胞的体外培养条件及分化特性

背景：视网膜干细胞已在多种脊椎动物眼内发现，但目前对人类视网膜干细胞或前体细胞的生物学特性尚知之甚少。目的：探讨人胚胎视网膜前体细胞的体外培养条件及分化潜能。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2005-03／2006-02在中山大学中山眼科中心完成。材料：人胚胎神经视网膜来源于4例流产胎儿。方法：分离胚胎眼球神经视网膜，经胰酶消化法制备单细胞悬液，加入含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、左旋谷氨酰胺的无血清高糖DMEM／F12培养基进行原代及传代培养。收集培养第1～3代的细胞克隆球体，接种到右旋多聚赖氨酸及层粘连蛋白预包被的6孔细胞培养板内，培养7d后行免疫细胞化学染色。主要观察指标：倒置显微镜下观察视网膜前体细胞分化前后的形态变化，免疫细胞化学法鉴定分化细胞特性。结果：部分人胚胎神经视网膜细胞呈神经球体样悬浮生长，细胞球体边界清楚，折光性强，表达视网膜前体细胞标签巢蛋白；将其接种到分化条件下培养7d后，细胞体积增大，变扁平，呈梭形、多角形，伸出大小不等的细胞突起，大部分细胞表达视网膜神经元细胞分子标签βⅢtubulin和胶质细胞标签胶质纤维酸性蛋白，少量细胞表达光感受器标签视紫红质。结论：人胚胎视网膜前体细胞可在体外扩增培养，在胎牛血清联合右旋多聚赖氨酸、层粘连蛋白特定诱导条件下，可以向视网膜神经元、胶质细胞及光感受器细胞分化。     

局限于眼肌的淀粉样变性一例

患者男性，53岁。因左眼球突出合并复视近2年，于2003年9月5日来我院就诊。2002年1月无明显诱因出现眼球突出合并复视，在当地医院多次行甲状腺功能检查，无明显异常，CT检查示左眼眶孤立占位性结节病变，诊断为炎性假瘤，口服泼尼松、静脉滴注环磷酰胺治疗1年余无数，上述症状渐加重。     

视网膜母细胞瘤SO-RB50瘤细胞NOD-SCID鼠皮下异位移植全身转移瘤模型的建立

目的：建立人视网膜母细胞瘤（RB）的严重联合免疫缺陷（severe combined immunodeficent）小鼠（NOD-SCID鼠）皮下移植模型，并探讨RB转移的发生、分布规律。方法：NOD-SCID小鼠皮下接种人视网膜母细胞SO-RB50细胞，定期观察小鼠的行为及肿瘤的形成、生长、转移。采用HE，免疫组织化学染色方法，对皮下肿瘤原发灶及远处转移灶行病理组织学研究。结果：皮下接种小鼠肿瘤生长的潜伏期为12-19d，成瘤为100％，5只鼠有远处转移灶，发生转移的时间在32d后，时间分布不一，肿瘤转移灶主要分布在腹腔和肾旁，小鼠的异种移植瘤和转移灶组织形态上与人类的RB一致，光镜下细胞胞质少、核深染、可见病理性核分裂，为未分化型。结论：NOD-SCID小鼠的荷瘤人视网膜母细胞瘤模型，成瘤率高，成瘤潜伏期短，较高转移率的特点。     

抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因克隆、测序

肿瘤免疫导向治疗中与抗癌药物、放射性核素偶连的载体单克隆抗体 (monoclonal antibody ,Mc Ab)的异源性问题是束缚肿瘤免疫导向治疗临床应用的主要障碍 ,异源 Mc Ab的人源化改造是肿瘤免疫导向治疗研究的重点和难点[1 ] 。目前 ,抗视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma,RB) Mc Ab基因人源化研究尚未见报道 ,现将我们这方面的部分研究结果报道如下。1　材料和方法分泌小鼠抗人 RB Mc Ab的杂交瘤细胞株 3C6由本病理室制备 ,Mc Ab亚型为 Ig G2 a。实验中所需要的酶类及测序载体p GEM - T Easy等为美国 Promega公司产品。 TRIZOL试剂购…     

视网膜母细胞瘤患者外周血树突状细胞的体外诱导扩增及鉴定

树突状细胞 (ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ ,ＤＣ)是目前发现的人体内功能最强的一类专职抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ,ＡＰＣ) [1] 。近年来 ,国外学者应用肿瘤抗原将ＤＣ致敏 ,体外诱导细胞毒性Ｔ淋巴细胞 (ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ,ＣＴＬ)的产生 ,进行Ｔ淋巴细胞的过继免疫治疗 ,取得了令人鼓舞的结果[2 5] 。肿瘤抗原负载的树突状细胞疫苗既可提高肿瘤的免疫原性 ,又能有效激发抗肿瘤的细胞免疫反应有望成为肿瘤生物治疗的又一新兴手段。有研究表明视网膜母细胞瘤(ｒｅｔｉｎｏｂ…