纤维蛋白粘合剂粘贴双层基质透镜行兔板层角膜移植术

目的：研究纤维蛋白粘合剂(FS)粘贴的双层角膜基质透镜体内生物相容性,探讨使用该种材料行角膜移植的可行性。

方法：选取健康清洁级新西兰白兔15只,采用自身对照,以兔右眼为实验眼,左眼为对照眼。实验眼使用FS粘贴的双层角膜基质透镜作为移植材料行板层角膜移植手术,对照眼不进行人工干预。分别于术后7、14、28d使用手持裂隙灯观察双眼角膜情况,并进行生物相容性评分,同时取双眼角膜行HE染色进行组织病理学检测,观察角膜恢复情况。

结果：裂隙灯观察结果显示,至角膜移植术后28d,实验眼角膜上皮生长情况良好,角膜透明度基本恢复,水肿程度减轻,新生血管生长至角膜缘后未加重,未见上皮、内皮排斥线等排斥反应; 对照眼角膜透明,角膜上皮光滑。生物相容性评分结果显示,角膜移植术后实验眼角膜植片水肿程度逐渐减轻,透明度逐渐恢复,排斥反应较小,角膜植片的生物相容性较好; 至术后28d,实验眼和对照眼角膜透明度、水肿程度及新生血管生长程度均无差异(P>0.01)。组织病理学检测结果显示,至角膜移植术后28d,实验眼植片表面有4～5层角膜上皮细胞覆盖,角膜胶原排列整齐、规则,植片内未见明显炎性细胞浸润,双片透镜间分界消失,层间FS被机体完全吸收,植片与植床融合,未见明显分界。

结论：使用FS粘贴的双层角膜基质透镜作为植片行板层角膜移植术后恢复较好,排斥反应较小,生物相容性较好,可用于板层角膜移植。     

Smile来源的角膜基质透镜构建组织工程角膜基质支架的实验研究

目的:探究用全飞秒激光小切口微透镜摘除术(Smile)来源的角膜基质透镜构建组织工程角膜基质支架的可行性及最佳保存条件。方法:从Smile来源的角膜基质透镜中分离培养人角膜基质细胞(HCFs),采用MTT法检测人纤维蛋白粘合剂(FS)对细胞的毒性作用;将FS粘贴双层角膜基质透镜构建的双层透镜支架分别置于不同介质(无水甘油、透明质酸钠、胎牛血清、模拟湿房环境)及不同温度(常温、4℃、-20℃)中保存,对比支架透明度及硬度。结果:MTT检测结果显示,FS作用0~72h,HCFs与正常培养细胞具有相似的增殖趋势,细胞毒性评级为0~1级,相对生存率均超过90%。FS粘贴的双层基质透镜支架表面平整、贴合紧密、透明度良好且硬度适宜。4℃保存14d后,无水甘油中9枚支架复水后均未出现开裂情况,透明度良好;透明质酸钠中9枚支架中3枚出现开裂,剩余6枚完整,透明度尚可;模拟湿房环境中9枚支架均无开裂现象,但皱缩严重;胎牛血清中9枚支架全部开裂,水肿严重。保存14d后,常温无水甘油中的15枚支架其中2枚保持无色透明,5枚轻微变黄但透明度尚可,8枚严重变黄且透明度明显降低;4℃无水甘油中的15枚支架其中5枚无色透明,10枚轻微变黄且透明度良好;-20℃无水甘油中的15枚支架均保持无色透明状态,未出现变黄情况。结论:FS是一种安全无毒的生物胶,可利用FS粘贴Smile来源的角膜基质透镜构建稳定性好、透明度高且硬度适宜的角膜基质支架,且-20℃无水甘油是角膜基质透镜支架的较佳保存条件。