角膜移植术后角膜在共焦显微镜下的形态学改变

目的：研究角膜移植术后角膜组织在共焦显微镜(Confocal microscopy)下的形态学改变。方法：应用Conoscan2．0共焦显微镜对板层角膜移植术后3～7d患者12例(12只眼)，术后1a患者8例(8只眼)，穿透性角膜移植术后3～7d患者10例(10只眼)，术后1a患者11例(11只眼)进行扫描检查，记录各层角膜图像。结果：板层角膜移植术后3～7d，植片中基质细胞较小，可见裂隙状暗纹和细小神经，层间为大面积高反光区，有点状颗粒沉积，植床水肿，细胞成像不清。移植术后1a，植片中未见神经，层间反光明显减弱，但仍有点状高反光颗粒沉积，植床中出现粗大裂隙状暗纹，内皮细胞密度正常。穿透角膜移植术后3～7d，植片中基质细胞“激活”，可见神经和后基质层的粗大暗纹，内皮细胞密度正常，细胞间可镶嵌有高反光点。术后1a，植片中基质细胞仍较小，未见神经，后基质层仍有裂隙状暗纹，内皮细胞体积增大，密度减少，高反光点消失。结论：Confoscan 2．0共焦显微镜可活体检查角膜移植术后角膜组织结构和细胞的病理改变，这对评估手术效果和临床观察以及跟踪随访具有重大意义。     

猴表皮干细胞的分离和培养

目的： 探索猴表皮干细胞分离纯化和培养方法。 方法: 将猴皮肤标本剪成皮条,加入0.25％胰酶浸泡过夜；然后去除角质层，刮上皮面获取表皮细胞进行培养。取第2-4代的细胞,经消化后，用Ⅳ型胶原黏附法获得为快吸附的表皮细胞。对快吸附的表皮细胞行流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR检测。 结果: 快吸附细胞从mRNA转录水平及蛋白表达水平均呈现表皮干细胞的特性：β1整合素、K15和α6整合素阳性，而CD71和K1/K10阴性。 结论: 所采用的分离纯化方法和培养条件适合猴表皮干细胞的分离纯化及生长。     

Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化

 [目的]探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。[方法]在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。[结果]纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst 33342标记后的皮肤干细胞胞核显示蓝色荧光。在与结膜上皮细胞共培养10d后,皮肤干细胞显示结膜上皮细胞的标志粘蛋白4和角蛋白4阳性,流式细胞术检测阳性细胞比例分别为49.9%和95.6%,同时细胞还显示胞核的Hoechst 33342表达。[结论]灵长类动物恒河猴的皮肤干细胞,在体外的适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。     

干眼颌下腺移植术后泪液蛋白分析

目的分析自体颌下腺游离移植治疗严重干眼术后分泌的泪液蛋白成分及其与正常泪液的异同。方法收集自体颌下腺游离移植成功后的8例患者的泪液,测定其总蛋白含量及淀粉酶、表皮生长因子(EGF)、分泌性免疫球蛋白A(SIgA)等主要蛋白成分的含量,同时通过不连续的SDS-PAGE蛋白电泳观察其形成的蛋白电泳条带,并与正常人的泪液对比。结果自体颌下腺游离移植后分泌的泪液总蛋白含量明显低于正常泪液(P<0.05),SIgA含量接近正常泪液(P>0.05),EGF含量高于正常泪液(P<0.05),而其所含的淀粉酶浓度则远高于正常泪液(P<0.05)。SDS-PAGE蛋白电泳显示颌下腺移植术后分泌的泪液与正常泪液具有相似的电泳条带及相近的蛋白成分。结论自体颌下腺游离移植术后分泌的泪液具有与正常泪液相近的蛋白成分,但其总蛋白含量较低,淀粉酶含量较高。     

圆锥角膜对侧无明显改变眼的共焦显微镜所见

目的　了解圆锥角膜患者对侧无明显临床改变眼的共焦显微镜的影像特点 ,探索共焦显微镜在早期圆锥角膜的临床检查中的意义和诊断价值。方法　前瞻性的应用共焦显微镜研究评价37例圆锥角膜患者对侧眼无明显临床改变者、 6 2例中高度近视和 4 3例中高度近视角膜接触镜佩戴者作对照 ,比较各组之间的图像、角膜基质、内皮细胞的密度等。结果　圆锥角膜对侧眼无明显临床改变者组和中高度近视组、中高度近视接触镜组比较 ,其年龄、近视度数、散光度数均无统计学差异(均P >0 .0 5)。共焦显微镜检查中发现圆锥角膜患者对侧眼无明显临床改变者组中有 8例出现前或后基质暗纹 ,对照组角膜没有发现类似的改变。角膜内皮细胞密度和角膜前、中、后基质细胞密度在早期圆锥角膜与对照组之间无明显统计学差异 (均P >0 .0 5)。各组间上皮下神经的形态结构没有明显差别。结论　共焦显微镜可活体检查圆锥角膜组织结构和细胞的改变 ,是一种新的临床检测手段 ,它为早期圆锥角膜的诊断提供了一种新的思路 ,具有一定的诊断价值。     

角膜内皮细胞改良培养技术的初步探讨

目的 评价角膜后弹力层撕除联合酶消化法分离角膜内皮细胞的效率,分析细胞体外生长的生物学特性.方法 将兔角膜带有内皮细胞的后弹力层完整撕下,用胰蛋白酶-EDTA联合酶消化,纯化的角膜内皮细胞进行体外培养.观察细胞形态,用神经元烯醇化酶抗体进行细胞表型鉴定.苏木精-伊红染色以及茜素红-台盼蓝联合染色分析细胞活性,流式细胞仪检测细胞体外生长过程中Anne xiv-PE的表达情况,透射电镜和扫描电镜进行细胞超微结构形态的观察.结果 带角膜内皮细胞的后弹力层撕除联合酶消化法可快速获得大量纯化的角膜内皮细胞,快速贴壁生长并增生,体外培养3～4d即融合成单层细胞,且表达神经元烯醇化酶抗体阳性,苏木精-伊红染色及活性染色提示细胞功能良好,Annexiv-PE抗体表达水平微弱.结论 角膜后弹力层撕除联合酶消化法可提高角膜内皮细胞的获取和培养效率,为工程化角膜内皮移植膜的构建提供稳定的种子细胞来源.     

显微板层角膜移植术后形态学改变及对角膜透明度的影响

目的 了解显微板层角膜移植术后的组织学改变及对角膜透明度的影响。方法 利用光镜、电镜和分光光度计观察了显微板层角膜移植术后不同时期角膜基质的组织学变化、透光度和吸光度，对比观察了显微角膜切刀和准分子激光切削的角膜剖面形态。结果 准分子激光切削的角膜表面有许多变性胶原碎屑。显微角膜切开刀切削的角膜表面光滑，术后１个月，光镜下无明显的瘢痕，透射电镜仅见２～３个角膜板层厚度的界面瘢痕，其下３～４个板层内的角膜细胞有较多伪足，但无炎性细胞浸润。术后１，３个月角膜的透光率和吸光度与未手术角膜比较无显著性差异。结论 显微板层角膜移植术后界面瘢痕轻微，不影响角膜透明度。     

球结膜松弛矫正术的疗效分析

目的：探讨球结膜松弛矫正术治疗Ⅲ～Ⅳ级球结膜松弛症的疗效.方法：回顾分析本院2006年1月至2009年12月11例（16眼）经球结膜松弛矫正术手术治疗的Ⅲ～Ⅳ级球结膜松弛症患者,从肿胀或沉重感,疼痛,溢泪,眼红,视疲劳,瘙痒,视力模糊/下降,烧灼感,异物感,瘢痕形成等方面评价其疗效.结果：11例球结膜松弛症患者手术治疗后,除了结膜瘢痕外,由重度结膜松弛症引起的各种症状均得到改善,有效率达85%以上.无术中或术后并发症发生.术后随访6月～ 3年,未见复发.结论：球结膜松弛矫正术能很好地切除多余结膜组织,解除泪道的阻塞环节,固定结膜,加深穹窿,恢复正常的眼表泪液存储与排泄功能,明显改善不适症状,治疗效果好.     

羊膜接触镜输送人表皮干细胞重建兔角膜上皮

目的 利用眼表生物膜固定装置(BMFD)与羊膜(AM)制成接触镜,输送人表皮干细胞至角膜缘干细胞缺损(LSCD)的兔眼表,并评价其重建角膜上皮的效果.方法 制作去角膜上皮及角膜缘干细胞的雌性LSCD兔模型,分为3组:羊膜加人表皮干细胞移植组(n=20),将男性人表皮干细胞悬液注射到BMFD-AM接触镜(简称羊膜接触镜)与眼表之间;羊膜遮盖组(n=20),戴羊膜接触镜;对照组(n=20),单纯药物治疗.裂隙灯显微镜结合角膜荧光素钠染色观察并评价角膜修复情况.随访至角膜完全上皮化后,取角膜组织行病理学检查和免疫组织化学鉴定,PCR检测人Y-STR基因鉴定细胞来源.结果 羊膜加人表皮干细胞移植组角膜上皮修复快,平均(5.60±0.46)d达到完全上皮化,另外两组角膜上皮修复迟缓.羊膜遮盖组(9.25±0.51)d、对照组(12.45±0.65)d才完成角膜上皮化(P均<0.05).组织病理学示羊膜加人表皮干细胞移植组角膜上皮细胞形态接近正常,K3/K12(+)、Mucin 5AC(-)、K4(-).并可检测到人Y-STR基因.组织病理学示另外两组角膜上皮结膜化,K4(+)、Mucin 5AC(+)、K3/K12(-).结论 羊膜接触镜联合人表皮干细胞悬液注射能够重建LSCD兔角膜上皮.     

高频泪道浚通术治疗先天性泪囊炎

目的　采用高频泪道探通法治疗先天性泪囊炎。方法　用WZC -Ⅱ型泪道治疗仪行高频泪道探通法治疗先天性泪囊炎 69例 (73眼 ) ,所有患儿均为泪道探通失败 2次以上者。随访观察 8～2 0个月 ,平均 1 2个月。结果　治愈 97 62 %。结论　高频泪道探通法治疗先天性泪囊炎操作简便 ,手术安全可靠 ,治愈率高