应用基因芯片直接检测结核病患者各类标本中利福平和异烟肼耐药的价值

目的 研究结核分枝杆菌(MTB)耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中利福平和异烟肼耐药相关基因的临床价值。方法 回顾性分析125例通过硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养为MTB的临床标本,其中痰标本90例、支气管灌洗液12例、脓液12例、胸腔积液6例、组织标本3例、腹腔积液和尿液标本各1例,应用绝对浓度法同时进行利福平(RFP)和异烟肼(INH)药物敏感性试验(简称“绝对浓度法药敏试验”),并用基因芯片直接检测临床标本中MTB rpoB、katG和inhA基因型。以绝对浓度法药敏试验为标准,评价基因芯片检测RFP、INH耐药和耐多药(MDR)的敏感度和特异度,并且比较两种检测结果的一致性。结果 在125例结核病患者临床标本中,绝对浓度法药敏试验显示对RFP、INH的耐药率和MDR发生率分别为20.0%(25/125)[其中高耐占88.0%(22/25)、低耐占12.0%(3/25)]、17.6%(22/125)[其中高耐占18.2%(4/22)、低耐占81.8%(18/22)]、16.8%(21/125)。初治和复治结核病患者临床标本中MDR-MTB的检出率分别为7.6%(7/92)和39.4%(13/33)。以绝对浓度法药敏试验为标准,应用基因芯片直接检测临床标本中MTB rpoB、katG和inhA基因型,预示对RFP、INH耐药和MDR的敏感度分别为72.0%(18/25)、63.6%(14/22)和61.9%(13/21),特异度分别为91.0%(91/100)、86.4%(89/103)和89.4%(93/104),两种方法的一致率分别为87.2%(109/125)、82.4%(103/125)和84.8%(106/125)。 结论 应用耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中MTB对 RFP和INH耐药的相关基因突变具有中等的敏感度和较高的特异度,可快速检出对RFP、INH耐药和MDR-TB患者,为临床早期开展有效化疗提供实验依据。     

探讨荧光定量PCR在结核菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR技术在检测临床标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法通过荧光定量PCR技术鉴定350株临床分离株，进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量分析，同时进行抗酸染色和培养法。结果荧光定量PCR、染色和培养法阳性检出率分别为38．8％（128／330），21．8％（72／330），29．7％（98／330），提高阳性检出率（涂阴）16．97％（56／330），菌种鉴定特异性实验符合率为100％。结论荧光定量PCR技术是一种快速、敏感、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法。     

结核分枝杆菌Rv1419蛋白抗原表位的预测

 目的 预测结核分枝杆菌Rv1419蛋白的抗原表位。方法 利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv1419氨基酸序列进行分析,采用包括二级结构、亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、电荷分布等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果 Rv1419蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,含有少数潜在的B细胞抗原肽表位（可能在67～70、72～82、142～154、131～137位氨基酸残基或其附近）,这些表位抗原性较好,都含有β转角和无规则卷曲结构,呈现在表面的可能性和柔韧性都较大。该蛋白含有较多潜在的T细胞抗原肽表位（可能在5～15、18～22、29～32、43～55、58～62、64～68、86～97、99～109、110～114、117～123、126～128、136～140位氨基酸残基或其附近）。结论 结核分枝杆菌Rv1419蛋白是一个T细胞抗原表位占优势的蛋白抗原,也存在B细胞抗原表位,本研究结果为该蛋白抗原表位的进一步研究、应用奠定了基础。     

苦碟子注射液对兔眼玻璃体积血疗效机制的研究

目的：通过建立玻璃体积血动物模型,检测苦碟子注射液对玻璃体积血的疗效并探讨其作用机制。方法48只兔中随机选择12只作为正常对照组;余36只建立玻璃体积血模型后随机分为苦碟子组、丹参组和模型对照组,3 d后开始药物干预,各组分别于用药14 d、28 d、42 d进行B型超声检查玻璃体混浊程度,测玻璃体中白细胞介素-6（IL-6）及铁（Fe2＋）含量,第42天每组分别取材制作视网膜病理切片。结果 B型超声示在治疗后期（42 d）苦碟子组玻璃体混浊程度优于丹参组并接近空白对照组。病理切片显示模型对照组视网膜有明显氧化损伤改变,苦碟子组和丹参组优于模型组,苦碟子组更接近空白对照组。苦碟子组和丹参组玻璃体中IL-6、Fe2＋含量较模型对照组降低,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;二者之间差异在治疗前期（14 d）无统计学意义（ P ＞0.05）,后期（42 d）有统计学意义（ P ＜0.05）,苦碟子组优于丹参组。结论与丹参注射液相比,苦碟子注射液能更有效地促进玻璃体积血的吸收,减轻玻璃体和视网膜组织的氧化损伤。     

糖尿病视网膜病变发病机制研究进展

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）作为糖尿病微血管病变之一，是首位危害视力的视网膜类疾病。尤其在发达国家，其发病率呈现日益增高的趋势。近年来有学者提出DR不仅仅是微血管的病变，更是视网膜血管-神经单位的损伤，且有研究发现在DR的早期就存在神经病变，即神经病变先于微血管病变。关于DR病变的机制有许多，如氧化应激、内质网应激、慢性炎症等。本文主要针对高血糖诱导的氧化应激以及导致微血管病变和神经变性发病的分子机制及其病理生理进行综述。     

Ad-VEGI151对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子基因(VEGI151)对静脉内皮细胞的增殖抑制作用.方法:利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,Western印迹法检测病变细胞内基因的蛋白质表达.X-gal染色测定重组腺病毒载体系统的基因转移效率,结晶紫染色法检测细胞D570/630值,观察Ad-VEGI151对ECV304细胞增殖抑制作用的效果,免疫组织化学检测ECV304细胞内VEGI151基因的蛋白质表达.结果:应用细胞内质粒DNA同源重组法,将脂质体介导质粒pCA13-VEGI151与pJM17共转染293A细胞制备重组腺病毒,所获病毒滴度高,是一种制备重组腺病毒切实可行的方法.Ad-VEGI151在病变细胞内能成功表达蛋白,具有较高的基因转移效率,对静脉内皮细胞的增殖具有强烈的抑制作用,并能在靶细胞内表达有生物学活性的蛋白质.结论:以复制缺陷型重组腺病毒为载体的VEGI151基因能在靶细胞内表达具有生物学活性的蛋白质,抑制体外静脉内皮细胞的增殖,这为进一步肿瘤及新生血管性疾病的基因治疗提供了新的方法.     

XPO4、MAP2K4及ZIC1在子宫内膜癌组织表达及其对子宫内膜癌患者预后评估价值

目的探讨输出蛋白(XPO)4、丝裂原活化蛋白激酶(MAP2K)4及小脑锌指结构蛋白(ZIC)1在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及其对EC患者的预后评估价值。 方法选择2017年6月至2018年6月,无锡市妇幼保健院、复旦大学附属中山医院青浦分院收治的147例EC患者为研究对象。采用免疫组化染色法检测患者EC组织及癌旁正常组织XPO4、MAP2K4、ZIC1表达水平。采用χ²检验,对患者EC组织及癌旁正常组织XPO4、MAP2K4、ZIC1阳性率,以及不同临床病理特征患者EC组织XPO4、MAP2K4、ZIC1阳性率进行比较。采用Two-stage检验,对EC组织XPO4、MAP2K4、ZIC1呈阳性与呈阴性患者的3年总体生存(OS)率进行比较。本研究遵循的程序经过无锡市妇幼保健院、复旦大学附属中山医院青浦分院伦理委员会批准(审批文号：20160803、20160502)。 结果①本组患者EC组织XPO4、MAP2K4阳性率分别为34.7%(51/147)、38.1%(56/147),显著低于癌旁正常组织的66.7%(98/147)与72.8%(107/147),并且差异均有统计学意义(χ²＝30.060、35.812,P<0.001)。本组患者EC组织ZIC1阳性率为72.1%(106/147),显著高于癌旁正常组织的40.1%(59/147),并且差异亦有统计学意义(χ²＝30.512、P<0.001)。②不同年龄、EC直径及绝经与否患者的EC组织XPO4、MAP2K4、ZIC1阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。不同国际妇产科联盟(FIGO)临床分期、组织病理学分级、子宫肌层侵犯程度及淋巴结转移与否患者EC组织XPO4、MAP2K4、ZIC1阳性率分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。③本组EC组织XPO4、MAP2K4呈阴性患者的3年OS率分别为42.7%、38.5%,均显著低于XPO4、MAP2K4呈阳性者的68.6%、71.4%,并且差异均有统计学意义(χ²＝8.960、P＝0.003,χ²＝15.077、P<0.001)。EC组织ZIC1呈阳性患者3年OS率为35.8%,显著低于ZIC1呈阴性者的68.3%,并且差异亦有统计学意义(χ²＝12.579、P<0.001)。 结论在EC组织中,XPO4、MAP2K4呈低表达,而ZIC1则呈高表达。XPO4、MAP2K4、ZIC1表达水平与患者组织病理学分级、淋巴结转移、FIGO临床分期、子宫肌层侵犯及3年OS率显著相关,其在评估EC患者发病、进展及预后中具有一定价值。