产妇血浆和乳汁中HBV DNA定量检测研究

目的 进一步了解乙型肝炎产妇的母乳中HBV DNA含量及其传染性，更好地指导母乳喂养。方法 利用荧光实时定量PCR检测技术，对66例乙肝血清学检测阳性的产妇进行血浆及乳汁中HBV DNA的定量检测。结果 66例产妇血浆和乳汁中HBV DNA的检出率分别为66．7％（44／66）和53．O％（35／66），其HBV DNA含量的对数值具有良好的相关性（r=0．794，n=66，P〈0．01），HBeAg（＋）与HBeAb（＋）两组间比较血浆及乳汗HBV DNA的含量，两者存在统计学差异（P〈0．01）。HBeAg（＋）组含量高于HBeAb（＋）组。结论 乳汁与血浆中HBV DNA含量具有较好的相关性，血浆中HBV DNA高拷贝的产妇，最好不要进行母乳喂养。产妇血浆中HBeAg与乳汁及血浆中HBV DNA含量都具有明显关系，它的存在提示血浆及乳汁中的HBV DNA含量较高。     

慢性乙肝YMDD变异患者肝纤维化指标、血清标志物的检测及意义

探讨慢性乙肝患者(CHB)发生YMDD变异后肝纤维化指标及血清标志物的变化意义.检测接受拉米夫定治疗285例CHB患者YMDD变异情况,根据结果分为无突变组和突变组;又各分为继续使用拉米夫定治疗组和未继续治疗组;并测定各组乙肝病毒拷贝数(HBV-DNA)、乙肝两对半(HBV M)、常规肝功能指标、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CIV)水平.结果显示285例患者中发生YMDD突变144例,以YIDD型最常见;突变组HBeAg阳性率、HBV-DNA水平高于无突变组(P＜0.01、P＜0.05);无突变病例中继续治疗组CIV、PCⅢ、HBV-DNA水平比未继续治疗组出现下降(P＜0.01、P＜0.05).YMDD突变组HBeAg阳性率、病毒拷贝数高于无突变组,而纤维化指标无差异;继续使用拉米夫定治疗,可改善无突变组患者肝组织纤维化.     

受体酪氨酸激酶基因及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义

目的 探讨RON mRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌(TCCB)、7例膀胱内翻性乳头状瘤(IPB)、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤(PUNLMP)患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常膀胱黏膜组织患者。其中,病理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者分别为30、15和18例,临床Tis+ T1和T2 +T3 +T4期患者分别为44例和15例;用实时荧光定量RT-PCR检测其RON mRNA相对表达量,以GAPDH mRNA为内标物,用RONmRNA/GAPDH mRNA比值表示RON mRNA相对表达量;用RT-PCR检测RON mRNA选择性剪切形成的变异体;用测序检测PCR产物中可能存在的变异体,并分析变异体在不同组织间及TCCB中不同病理分级及临床分期间阳性表达率的差异。结果RON mRNA在TCCB、IPB、PUNLMP及正常膀胱黏膜组织中均见阳性表达,其RON mRNA/GAPDH mRNA比值分别为4.9×10-3(1.8×10-3 ～1.0× 10-2)、3.8×10-3（2.4×10-3～1.7×10-2）、4.9×10-3（1.7×10-3～1.1 ×10-2）、1.0×10-3(4.5×10-4 ～2.8×10-3),且不同组织间的表达差异均有统计学意义(x2K-W= 17.278,P＜0.05);RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3.7×10-3(1.3×10-3 ～7.5×10-3)、4.9×10-3（1.9X10-3～1.1 ×10-2）、8.9×10-3(2.7×10-3～8.0×10-2),且差异有统计学意义(x2K-W=7.341,P＜0.05);RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB临床Tis+ T1、T2 +T3 +T4期分别为3.5×10-3（1.2×10-3 ～7.7×10-3）、9.7× 10-3（2.9×10-3～5.3 ×10-2）,差异也有统计学意义（Z= -2.306,P＜0.05）。但正常膀胱黏膜组未发现RON mRNA变异体,而在膀胱肿瘤组织中外显子11剪切缺失(E11△)的阳性表达率为70％( 55/79)。在TCCB、IPB、PUNLMP中E11△阳性表达率分别为71％ (45/63)、57％ (4/7)、67％ (6/9),而不同病理组织中的E11△阳性表达率差异无统计学意义(x2=0.620,P＞0.05);在不同TCCB病理分级和临床分期中其阳性率差异亦无统计学意义（Z值分别为0.221、0.538,P均＞0.05）。发现1种正常黏膜组织中没有的新变异体,即RON基因外显子的3 476～3 539 bp剪切缺失形成的变异体(E3 476 ～3 539△)。膀胱肿瘤组织中E3 476～3 539△的阳性表达率为56％ (44/79),在TCCB、IPB、PUNLMP中E 3 476 ～3 539△的阳性表达率分别为57％( 36/63)、43％ (3/7)、56％ (5/9),但各病理组织间的阳性率差异无统计学意义(x2=0.517,P＞0.05);在TCCB不同病理分级和临床分期中其阳性率分别为40％ (12/30)、67％ (10/15)、78％ (14/18)、48％(21/44)、80％ (12/15),差异有统计学意义（Z值分别为7.285、5.041,P均＜0.05）。结论 RONmRNA的表达与TCCB病理分级及临床分期相关,RON可能在TCCB发生发展的过程中发挥重要作用;在正常膀胱黏膜中未见RON mRNA剪切形成的变异体,而在膀胱肿瘤组织中都有不同程度的表达;E 3 476～3 539△的表达与TCCB病理分级及临床分期相关,RON mRNA变异体可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

腮腺肿瘤患者血清CEA和CA153的表达及意义

采用化学发光免疫法测定31例良性腮腺肿瘤和32例恶性腮腺肿瘤患者血清中血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)153水平的变化.腮腺恶性肿瘤组患者血清中CEA、CA153的表达水平虽高于良性肿瘤一组,但两者相比,P＞0.05,恶性肿瘤组中CEA的阳性率显著高于良性肿瘤组(P＜0.05).中低分化腺癌患者血清CEA和CA153值均明显升高,肌上皮癌患者血清CEA值均明显升高.我们认为检测血清CEA、CA153在鉴别腮腺肿瘤性质方面有一定的临床应用价值.     

2009～2010年平湖市甲型H1N1流感病毒裂解疫苗疑似预防接种异常反应监测分析

[目的]了解甲型H1N1流感病毒裂解疫苗接种后疑似预防接种异常反应(AEFI)发生情况,为制定相关策略提供依据。[方法]2009年10月至2010年4月,平湖市在大规模开展接种工作的同时,开展了甲流疫苗的安全性监测工作。[结果]接种40 744人,报告AEFI发生25例,报告发生率为61.35/10万。报告发生率,一般反应为36.81/10万,异常反应为9.81/10万,偶合反应为7.36/10万,心因反应为7.36/10万。AEFI发生率,女性为96.58/10万,男性为21.05/10万;15~20岁为61.39/10万,20~50岁为59.05/10万,≥60岁为78.98/10万;学生为61.39/10万,医务人员为78.86/10万,教师为83.33/10万,其他职业为52.01/10万。AEFI在接种后10 min至24 h出现,临床表现以低热、局部红肿、疼痛为主,病例均治愈。[结论]接种甲型H1N1流感病毒裂解疫苗AEFI发生率较低。     

储存式自体输血在Rh(D)阴性血型孕妇中的应用与评价

目的探讨储存式自体输血在Rh(D)阴性孕妇中的应用。方法对温州医学院附属第一医院2009年1月至7月17例符合储存式自体输血的Rh(D)阴性孕妇在预产期前7～10d实施储存式自体输血的血液采集,采血前均严格履行知情告知制度,并让患者鉴署知情同意书,由输血科负责采血200mL置4℃贮血冰箱内保存备用。并测定孕妇采血前后血常规及胎心音等指标。结果采血前后孕妇的红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞比积(Hct)、血小板(PTL)、白细胞(WBC)值及胎心音改变比较差异无统计学意义,17例产妇献自体储存血,均无发生采血不良反应,出生的新生儿Apgar评分都在8～10分。结论储存式自体输血能解决Rh(D)阴性血稀缺问题,使剖宫产或产后大出血产妇能尽快得到输血,且对孕妇及胎儿无明显不良影响,值得临床推广应用。     

尿液中PCA3mRNA和融合基因TMPRSS2：ERGmRNA的检测在前列腺癌早期临床诊断中的应用

目的研究前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA联合融合基因TMPRSS2：ERG亚型T1E4mRNA的定量检测在早期前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法收集前列腺癌（PCa）患者53例和前列腺增生（BPH）患者37例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,用实时荧光定量RT—PCR的方法检测PSAmRNA、PCA3mRNA和T1E4mRNA的含量,以PSAmRNA来校正尿液中的前列腺癌细胞。以PCA3mRNA／PSAmRNA表示PCA3mRNA的含量,以T1E4mRNA／PSAmRNA表示融合基因T1E4mRNA的含量。用ROC曲线对T1E4mRNA及PCA3mRNA诊断PCa的性能进行分析。结果尿T1E4mR．NA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．802（95％CI：0．709～0．895）,以0．007为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为56．6％和94．6％。尿PCA3mRNA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．646（95％CI：0．533—0．758）,以0．001为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度为47．2％和73．0％。PCa组PCA3mRNA（P=0．009）及T1E4mRNA（P=0．000）的含量均高于BPH组,T1E4mRNA联合PCA3mRNA定量检测的敏感度为81．1％,比单独应用PCA3mRNA和T1E4mRNA检测的敏感度分别提高了33．9％和24．5％。结论前列腺癌按摩后尿沉渣中可以检测到TMPRSS2：ERG亚型T1E4mRNA,联合PCA3mRNA和T1E4mRNA两个指标定量检测,可以显著提高检出前列腺癌的敏感度。此联合检测方法可以用于早期的前列腺癌诊断。     

欧前胡素通过下调c-met的表达提高肺癌CD133~+细胞亚群对吉非替尼的敏感性

目的:研究PC9 CD133~+细胞亚群对吉非替尼的耐药性并探讨欧前胡素提高吉非替尼抗肺癌活性的机制。方法:MTT法检测PC9细胞在吉非替尼和欧前胡素处理下的细胞活力。Western blot实验检测吉非替尼和欧前胡素对PC9细胞c-met表达水平、caspases活化水平及表皮生长因子受体(EGFR)、PI3K、AKT磷酸化水平的影响。流式细胞术检测欧前胡素和吉非替尼对PC9细胞系的CD133~+细胞亚群种群比例的影响及PC9细胞在二者处理下的凋亡率。结果:PC9 CD133~+细胞亚群对吉非替尼的敏感性显著低于PC9 CD133~-细胞亚群。吉非替尼能显著抑制PC9 CD133~-细胞亚群EGFR/PI3K/AKT的活化,但对PC9 CD133~+细胞亚群该通路的影响不大。吉非替尼单独处理能提高PC9细胞系中CD133~+细胞亚群的比例,然而联用欧前胡素后PC9 CD133~+细胞亚群的种群比例显著下降。Western blot实验表明欧前胡素能显著降低PC9 CD133~+细胞亚群的c-met蛋白表达水平表明c-met是欧前胡素的治疗靶点。MTT、Western blot、流式细胞术实验结果表明在PC9 CD133~+细胞亚群中,欧前胡素通过抑制c-met的表达提高吉非替尼对PI3K/AKT的抑制作用,从而诱导PC9 CD133~+细胞亚群发生caspases活化和凋亡。结论:欧前胡素通过下调c-met的表达提高肺癌CD133~+细胞亚群对吉非替尼的敏感性,两者存在协同抗肿瘤效应。     

肝硬化、肝癌患者血清sFas和TGF-β1水平的探讨

目的　探讨血清可溶性Fas(sFas)和转化生长因子 β1(TGF β1)水平的变化与乙肝后相关性肝硬化、肝癌的关系。方法　对 2 0例肝炎、2 8例HBV相关性肝硬化及 2 0例肝癌患者血清sFas、TGF β1、血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原进行检测 ,同时对其中 4 3例慢性乙肝和肝硬化患者进行HBV DNA的定量检测。结果　HBV相关性肝硬化、肝癌患者血清sFas和TGF β1水平明显升高 ,与正常对照比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;并且其结果与肝纤维化指标有一定的相关性 ;而慢性肝炎、肝硬化患者血清sFas和TGF β1水平与HBV DNA复制程度无显著关系。结论　乙肝后肝硬化、肝癌的发展进程可能与血清sFas及细胞因子TGF β1水平密切相关 ,而与血浆中HBV复制程度无显著关系。     

前列腺癌患者外周血中前列腺癌抗原3基因和前列腺特异性抗原基因联合检测的意义

目的 评价外周血前列腺痛抗原3基因(prostate cancer antigen 3,PCA3 mRNA)和前列腺特异性抗原基因(prostate specific antigen,PSA mRNA)联合检测对前列腺癌(PCa)及对其微转移诊断的价值.方法 用双重荧光实时定量逆转录(dFQ-RT)-PCR对49例PCa和71例前列腺增生(BPH)患者外周血PCA3 mRNA和PSA mRNA进行定量检测,通过受试者工作特征(ROC)曲线评价其在PCa诊断和微转移监测中的价值.结果 PCa组外周血PCA3 mRNA含量明显高于BPH组[2 362(<3-7 421)拷贝/ml比<30拷贝/ml,Z=-6.66,P<0.01],而PSA mRNA含量也明显高于BPH组[3 425(908～36 639)拷贝/ml比<200拷贝/ml,Z=-6.40,P<0.01];PCa组外周血PCA3mRNA和PSA mRNA的阳性率随临床分期增高而增加[B期:均为30.0%(3/10),C期:60.0%(9/15)和86.7%(13/15),D期:91.7%(22/24)和91.7%(22/24);χ2分别为13.534和16.451,P均<0.01],同时也随Gleason评分增高而增加[2～4分:20.0%(1/5)和40.0%(2/5);5～7分:66.7%(12/18)和72.2%(13/18);8～10分:84.6%(22/26)和92.3%(24/26);χ2分别为8.895和8.015,P均<0.05];ROC曲线显示,当PCA3 mRNA和PSA mRNA临界值分别为846拷贝/ml和280拷贝/ml时,诊断PCa敏感度分别为69.4%(34/49)和81.7%(40/49),特异度分别为90.1%(64/71)和77.5%(55/71);而联合检测时其敏感度可增至85.7%(42/49),但特异度下降为76.1%(54/71).PCA3 mRNA诊断PCa微转移的敏感度和特异度分别为90.9%(20/22)和84.7%(11/13).结论 外周血PCA3 mRNA和PSA mRNA检测是PCa诊断的良好指标,而联合检测可弥补PCA3 mRNA敏感度低和PSA mRNA特异度低的不足,而更有利于PCa诊断;PCA3 mRNA可能为PCa微转移诊断的良好指标.