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目的: 构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor, KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法: 以质粒pcDNA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(human embryonic kidney 293,HEK293) 细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察。结果: 扩增出了1条约1.2 kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒 pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank (NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上。结论: 构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。 相似文献
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目的 研究转铁蛋白与Bel-7402肝癌细胞耐药性的关系.方法 根据已知转铁蛋白序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测其在敏感Bel-7402细胞株、阿霉素抗性Bel-7402细胞株之间的表达水平差异.结果 成功扩增Bel-7402肝癌细胞转铁蛋白基因片段,荧光定量PCR表明转铁蛋白基因在阿霉素抗性Bel-7402细胞株的表达量是敏感Bel-7402细胞株4.83倍.结论 转铁蛋白基因对肝癌细胞的耐药发生发展存在一定的作用,可为研究肝癌耐药性的备选基因,以及为肝癌耐药性检测提供新的靶标. 相似文献
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脑肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)与包括卒中在内的多种心脑血管病的病理生理学过程密切相关.激活RAS中的不同组分将产生特定的生物学作用.文章综述了脑RAS在缺血性卒中病理生理学过程中的作用,特别是ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的神经保护作用. 相似文献
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目的:探讨含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的细菌寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)免疫佐剂在增强黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene -3,MAGE-3)抗原肽致敏DC抗膀胱肿瘤细胞的作用及其分子机制。方法:采用Ficoll 法从健康志愿者HLA-A2 型外周血中分离单个核细胞,常规方法诱导培养制备成熟DC。MTT法检测不同方式(MAGE-3、CpG ODN、MAGE-3+CpG ODN 和无关抗原对照)致敏DC 对T 淋巴细胞增殖和CTL 对靶细胞BIU-87 的杀伤作用。CpGODN+MAGE-3 抗原肽致敏DC抗裸鼠BIU-87 膀胱癌细胞移植瘤治疗7、11 d 测定移植瘤质量变化,MTT和Western blotting 法分别检测移植瘤细胞的增殖水平及其凋亡蛋白表达的变化。结果:CpG ODN+MAGE-3 抗原肽致敏DC能够促进T淋巴细胞增殖(P<0.05),并显著提高活化T淋巴细胞的CTL对靶细胞BIU-87 的杀伤活性(P<0.05)。体内实验表明,致敏DC治疗7、11 d 的各组移植瘤质量均明显降低(均P<0.05),移植瘤的增殖能力下降也较明显(P<0.05);与其他致敏DC方式相比较,尤以CpG ODN+MAGE-3 致敏DC组在治疗11 d 时的移植瘤质量降低非常显著(P<0.01),且明显促进荷瘤小鼠脾脏单个核细胞的增殖能力(P<0.01);该组在治疗第3 天起移植瘤组织Bcl-2 表达水平明显降低、Bax水平明显升高(均P<0.05 或P<0.01)。结论:CpG ODN能促进MAGE-3 抗原肽致敏DC对膀胱癌BIU-87 细胞的抑制作用,为膀胱癌DC疫苗的临床应用提供了实验依据。 相似文献
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大鼠尾核内Apelin的痛觉调制作用及其机制的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探究Apelin在尾核内对大鼠的痛觉调制作用及其可能的作用机制.方法 采用辐射热作为伤害性刺激,以安静状态下大鼠的甩尾潜伏期(TFL)为测痛指标.尾核内注射Apelin、吗啡、纳洛酮等,观察给药90min内Apelin的痛觉调制作用及其对吗啡中枢镇痛作用的影响.检测给药40min后大鼠尾核组织和血浆中cAMP与cGMP水平,探究Apelin在痛觉调制过程中可能的作用机制.结果 Apelin有显著的痛敏作用,在10~(-4) mol/L时作用最显著.给药10min后大鼠痛阈下降[(-9.22±1.26)%],40 min后痛阁下降至最低[(-16.95±1.46)%],分别与生理盐水组[(-0.32±1.2)%、(0.17±0.80)%]比较有统计学意义(P<0.01);大鼠尾核内微量注射吗啡后再注射Apelin,结果表明Apelin能抑制吗啡的中枢镇痛作用(P<0.01);大鼠尾核内注射Apelin后,尾核cAMP含量为(14,08±2.25)nmol/g,血浆cAMP含量为(19.94±4.43)nmol/L,分别与生理盐水组[(133.05±20.41)nmol/g、(38.66±6.73)nmoL]比较,有非常显著的统计学意义(P<0.01).结论 Apelin有中枢痛敏作用,这种痛敏作用可能与阿片系统有某种内在联系并通过细胞内第二信使cAMP发挥效应. 相似文献
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目前国内玻璃瓶大输液普遍采用胶塞加涤纶膜封口的方法 ,涤纶膜使用前要分捻和洗净 ,大输液生产厂家普遍使用一种LXG型涤纶膜分洗机漂洗涤膜 ,该涤纶膜分洗机每次洗涤纶膜 30 0 0 - 40 0 0张 ,一般需漂洗三遍至合格 ,每遍漂洗过程中需耗用注射用水 5 0升 ,完成该数量的涤纶膜漂 相似文献
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本文分析了科研诚信问题现状,阐述了加强科研诚信建设的重大意义,基于制度嵌入性理论,从政治嵌入性、文化嵌入性和认知嵌入性三个方面提出了加强我国科研诚信建设的整体设想. 相似文献