灭螺药物氯代水杨胺急性毒性试验

目的评价新型灭螺药氯代水杨胺(LDS)的急性毒性。方法按照《农业登记毒理学试验方法》GB 15670-1995,将LDS分别进行大鼠急性经口、经皮、吸入毒性试验,家兔急性眼刺激和皮肤刺激试验,以及豚鼠皮肤致敏试验。结果依据分级评价标准,LDS对大鼠急性经口、经皮、吸入毒性属微毒级,对家兔属无急性眼刺激性及无急性皮肤刺激性,对豚鼠皮肤致敏属弱致敏类。结论 LDS对哺乳动物的毒性属微毒级,是一种新型的安全灭螺药。     

高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用

目的 对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法 改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用.方法 TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析.以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm.根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性.结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10 μmol/L 至 400 μmol/L.精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善.经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L.结论 以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE 酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法 .     

Nycodenz-密度渗透压介质离心分离人外周血单核细胞研究

目的研究人外周血单核细胞分离方法。方法采集24名健康志愿献血者外周血,分别以EDTA-K2、肝素钠、枸橼酸钠抗凝,将抗凝全血或单个核细胞悬液缓慢加入不同密度和渗透压组合的Nycodenz-NaCl溶液上层,离心分离单核细胞;EDTA抗凝血经Ficoll-Hypaque密度梯度离心获得的单个核细胞,再分别用Nycodenz-NaCl密度渗透压介质离心法、Percoll密度梯度离心法、贴壁法、MACS(抗CD-14磁珠)分离单核细胞。结果如上4种方法获得的单核细胞纯度和收获率中位数(M)分别为98.9%和68.5%、89.6%和64.5%、64.8%和60.5%、94.1%和73.5%,比较显示Nycodenz法获得的单核细胞纯度最高(P<0.01);吞噬指数和趋化指数分别为188.8±11.2和26.8±5.9、187.8±12.2和26.1±5.1、144.4±24.8和15.4±7.3、177.1±18.3和18.9±6.7,统计表明Percoll法和Nycodenz法获得的单核细胞的吞噬指数、趋化指数高于贴壁法和MACS法(P<0.05);单核细胞受LPS刺激分泌细胞因子IL-12p70、IL-10、TNF-α水平(pg/ml)分别为2 545±341、1 216±397、3.999±418,2 489±425、1080±277、3 891±446,2 147±223、794±180、3268±411,35±12、142±81、407±199,比较得知MACS的单核细胞受LPS刺激分泌细胞因子IL-12p70、IL-10、TNF-α水平非常显著低于其他方法(P<0.01);单核细胞经典亚群CD14+CD16-HLA-DR+百分比和非经典亚群CD14+CD16+HLA-DR+百分比(M)分别为89%和5%、88%和1%、73%和1%、51%和36%,统计表明MACS法的单核细胞经典亚群百分比明显低于其他分离方法(P<0.01),而非经典亚群百分比明显高于其他方法(P<0.01)。结论 Nycodenz-NaCl密度渗透压介质离心法能够分离获得较高纯度、较多经典型的单核细胞。     

邻苯三酚自氧化法测定血中超氧化物歧化酶的活性

[目的]为改善目前SOD活性测定结果混乱的现状,提高测定结果的可比性,[方法]对邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的方法进行了研究,就测量波长、底物浓度、加样量等因素对测定结果的影响进行了探讨.测定了79例健康儿童血清和29例健康成人红细胞中的SOD活性.[结果]测定结果分别为49.0±19.2U/ml(x±s)和6187±1236U/g Hb(x±s).[结论]建议尽快建立标准化的测定方法,严格控制测定条件,以获得满意的测定结果.     

血浆中铬含量与血糖、血胰岛素的相关性

本世纪50年代,Mertx和Schwa,发现用缺铬饲料喂养的动物出现糖耐量异常。进一步的研究表明铬能键合胰岛素及其受体,从而加强胰岛素的作用。为观察人体内铬与血糖、血胰岛素的关系,我们对6例健康者和16例Ⅱ型糖尿病人进行了糖耐量试验,发现血浆中铬含量与血糖、血胰岛素呈负相关。     

血浆Ⅳ型胶原酶含量显色测定法的建立及其应用

目的 建立一种显色法检测血浆Ⅳ型胶原酶活性,探讨健康人群血浆中活性形式Ⅳ型胶原酶的参考区间范围.方法 以琥珀酰明胶作为酶切底物,采用TNBS显色剂对酶切产生的末端氨基显色,使用酶标仪在405 nm处测量其吸光度.通过对其显色剂用量、显色稳定性和最佳检测波长等因素进行探讨,得出测定血浆Ⅳ型胶原酶的最优分析条件,采用回收实验、精密度实验对其进行方法 学评价,并与夹心ELISA进行比较.采用该方法 检测了112名健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量.使用SPSS软件进行统计学分析,建立健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量双侧95%可信区间.结果 显色法检测血浆Ⅳ型胶原酶,总测定时间＜1.5 h,线性范围1.5～10.0 mg/L,最低检出限为0.965 mg/L,与ELISA法相关性良好(R~2=0.999 7,P＜0.01),批内变异系数＜3.564%,批间变异系数＜9.821%.健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量双侧95%的可信区间为33.38～49.80 mg/L.结论 血浆Ⅳ型胶原酶含量显色法可以应用于检测血浆中活性形式Ⅳ型胶原酶的含量,并建立了健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量参考区间.     

超氧化物歧化酶间接测定法的活性定值的探讨

以连苯三酚自氧化法为例，探讨了抑制率、指示反应速率差与超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）浓度之间的关系。采用下列定值方法，即根据指示反应速率差计算ＳＯＤ活性，并以酶活性的国际单位表示，可使不同条件和方法得出准确一致的测定结果。     

Comparison of Properties of Tumor Necrosis Factor-α Converting Enzyme （TACE） and Some Matrix Metalloproteases （MMPs） in Catalytic Domains

Tumor necrosis factor-α (TNF-α) is a critical cyto-kine in organism. It has been discovered that elevated TNF-α levels are implicated in a number of chronic dis-eases such as rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, type II diabetes, inflammatory bowel disease, and other human ailments[1]. The recent clinical successes of monoclonal TNF-α antibody Infliximab[2] and the soluble TNF p75 receptor fusion protein Entanercept[3] in RA patients suggest that anti-TNF-α is a valid target …     

钒化合物的降血糖作用

迄今为止，已发现三种无机钒对糖尿鼠具有降血糖作用，其机理为钒化合物，作用于胰岛素受体或胰岛素受体或胰岛素受体后。钒化合物有一定程序的毒性，须研制低毒，高效的钒化合物用于糖尿的治疗。     

改良TMB比色法替代~(51)Cr释放法检测抗体依赖细胞细胞毒效应研究

目的建立一种无致癌性、无放射性、灵敏的33,’,55,’-四甲基联苯胺(TMB)检测ADCC实验中靶红细胞自然释放的微量Hb含量的改进方法。方法利用Hb类似过氧化物酶效应催化双氧水氧化33,’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),使其发生显色反应,改进吸光度在600 nm处的检测体系。采用Nycodenz密度渗透压介质分离单核细胞作为ADCC的效应细胞。比较2种情况的灵敏度,并与51Cr释放法进行方法学对照。在ADCC实验中,分别用51Cr释放法和改良TMB法测定Hb自然释放率。结果显色反应结束后加硫酸酸终止测定最大吸收波长移至450 nm,不加酸终止测定波长为600 nm。不加硫酸终止的TMB法检测Hb低检出限是0.0075 g/L,显色时间20min,TMB最优浓度是0.62 g/L,空白吸收始终稳定的维持在<0.003的较低值。而加酸终止的TMB法低检出限仅为0.5 g/L。显然不加酸终止的改良TMB法的灵敏度非常显著地高于加酸终止的TMB法。在测定ADCC靶红细胞自然释放率试验中,不加酸终止的改良TMB法仅需4 h孵育时间以及2.5×106 cell/ml红细胞浓度即可测定出释放Hb含量,而加酸后孵育时间要长达14 h并且需要更高浓度的红细胞才能测出自然释放Hb含量。用不加硫酸终止的TMB法检测ADCC活性与51Cr释放法相关性良好(r=0.999)。结论改良TMB比色法可以代替51Cr释放法检测ADCC的靶红细胞细胞毒效应。加酸终止、测定波长为450 nm的TMB比色法的灵敏度与51Cr释放法的灵敏度有显著差距,不适用低活性ADCC效应检测。