流式细胞术检测临床实体瘤细胞周期蛋白表达的方法研究

目的探讨cydin／DNA双参数流式细胞术及流式细胞术分选后的免疫沉淀蛋白质印迹技术和共聚焦显微镜技术检测临床实体瘤细胞周期蛋白表达的可行性、科学性和优越性，为肿瘤的细胞周期分析提供科学有效的技术支持。方法运用cydin／DNA双参数流式细胞术及流式细胞术分选后的免疫沉淀蛋白印迹技术和共聚焦显微镜技术检测临床实体瘤细胞周期蛋白的表达。并与传统的免疫组织化学切片法进行比较。结果流式细胞术可以准确地对细胞周期蛋白在临床实体瘤中的表达进行定性、定量、定位的分析，较为系统地反映了细胞周期蛋白在临床实体瘤中的表达特性和肿瘤的生物学特性。结论Cyclin／DNA双参数流式细胞术及流式细胞术分选后的免疫沉淀蛋白质分析技术和共聚焦显微镜技术是一种科学有效的检测临床实体瘤细胞周期破坏特性的技术和方法。     

胃肠道恶性肿瘤Cyclins表达分型与MDR1及TNM分期的关系

目的:研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins (Cyclin D1,E,A,B1)的表达规律,以此为依据对恶性肿瘤进行分型,并结合肿瘤标本中 MDR1(多药耐药基因1)的表达情况,与肿瘤 TNM分期进行相关性分析．方法:采用流式细胞术分析新鲜手术获取的 62例肿瘤标本(胃癌32例,结直肠癌30例)的 Cyclin D1,E,A,B1及MDR1表达情况,再记录术后病理报告进行TNM分期．结果:根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ-Ⅳ型Cyclin非时相性表达类型,此Ⅰ-Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期具有一致性,Kappa系数等于0．599(P<0．01)．Ⅰ- Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高,等级相关系数rs为0．495(P<0．01)．结论:根据Cyclins的表达情况对消化道恶性肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义．在消化道肿瘤中,MDR1与肿瘤细胞周期素表达类型有关,对治疗具有指导意义．     

大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的细胞周期特征的比较研究

目的比较观察大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞和神经元细胞周期的变化特征。方法采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞模型,利用流式细胞技术检测假手术组和缺血再灌注后不同时间点各组大脑皮层和海马中星形胶质细胞和神经元细胞周期的异常激活和动态变化。结果缺血后大脑皮层中神经元24h时即发生明显细胞周期变化,而3d时进入细胞周期的星形胶质细胞才明显增加;海马中星形胶质细胞却先于神经元进入细胞周期,于24h时细胞周期即发生明显变化,与假手术组比较有显著差异(P<0.01)。结论在不同脑区星形胶质细胞和神经元两者对缺血性脑损伤的敏感性互不相同,并且不同脑区的星形胶质细胞对缺血性脑损伤的敏感性也有不同,脑缺血后2种细胞均出现细胞周期的异常激活。     

一种新的双向电泳蛋白样品制备方法

目的探讨双向凝胶电泳（2-DE）样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例，采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组，并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-DPAGE图谱的比较分析，发现采用8mol／L Urea，2mol／L Thiourea，4％CHAPS，1％NP-40.4％Triton X-100，65mmol／LDTT，0．5mmol／LPMSF，0．5％pharmalyte3-10，能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品，从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。     

Cyclins非时相性表达和MDR1与胃肠道恶性肿瘤分期的研究

目的：研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins的表达规律，以此为依据对恶性肿瘤进行分型，并结合肿瘤标本中MDR1（多药耐药基因）的表达情况，与肿瘤TNM分期进行相关性研究。方法：使用流式细胞术分析新鲜手术获取的肿瘤标本的CyclinD1，E，A，B1及与MDR1表达情况，再记录术后病理报告进行TNM分期。结果：根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ～Ⅳ型cyclin非时相性表达类型，此Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期有一致性（Kappa值为0．599，P〈0．01），Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高（Spearman相关系数0．495，P〈0．01）。结论：根据4种主要Cyclins（Cyclin D1，E，A，B1）的表达情况对胃肠肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义，可以说是对“分子分期”的一种探索。在消化道肿瘤中，MDR1与肿瘤细胞周期破坏类型有关，对治疗具有指导意义。     

无感染性休克的腹膜炎患者肠系膜血管KATP通道表达减少

目的 探讨KATP通道在确诊无感染性休克的腹膜炎患者肠系膜血管中的表达.方法 收集16例腹膜炎患者和14例非腹膜炎患者的肠系膜动脉血管,检测其KATP通道的mRNA表达.结果 腹膜炎组(n=16)Kir 6.1 mRNA相对表达量为(0.358±0.150),SUR2B mRNA相对表达量为(0.324±0.211);非腹膜炎组(n=14)Kir 6.1 mRNA相对表达量为(1.125±0.554),SUR2B mRNA相对表达量为(1.058±0.338);无感染性休克发生时,腹膜炎组KATP通道表达较非腹膜炎组减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 在单纯腹膜炎到脓毒血症的发展过程中,血管KATP的表达水平是变化的,该研究可能为寻找治疗腹膜炎感染性休克的时间窗提供了线索.     

抑癌基因DAB2IP在结直肠癌中的表达及临床意义

探讨抑癌基因DAB2IP在结直肠癌中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学方法对103例结直肠癌组织、正常黏膜和转移淋巴结组织进行蛋白检测.结果:DAB2IP在正常黏膜中的表达远高于结直肠癌组织和转移淋巴结组织(P＜0.05),其表达水平与淋巴结转移、远处转移、淋巴结转移度、临床Dukes分期、CEA和生存时间相关(P＜0.05),DAB2IP是结直肠癌重要的预后因素(P＜0.05).结果:DAB2IP下调可能导致结直肠癌的发生、浸润转移和生存时间减少.     

抗肿瘤药物敏感性实验方法的比较

目的探讨流式细胞术检测抗肿瘤药物敏感性在临床应用的可行性,为新的抗肿瘤药物敏感性检测方法的建立,特异性抗肿瘤药物的筛查提供试验理论基础。方法应用流式细胞凋亡检测技术的SubG1法和AnnexinV法,检测10例Molt4细胞、32例临床胃肠肿瘤细胞在抗肿瘤药物作用下,不同时间点肿瘤细胞的凋亡率。并与噻唑蓝比色(MTT)法进行比较分析。结果AnnexinV法、SubG1法、MTT比色法均可检测到药物对Molt4细胞、临床胃肠肿瘤细胞杀伤率随药物作用时间延长而增加。AnnexinV法、SubG1法、MTT比色法检测药物致细胞最大杀伤率差异无统计学意义(P>0.05)。AnnexinV法检测到药物最大杀伤率的有效时间点明显早于SubG1法MTT比色法,SubG1法检测的有效时间点略早于MTT比色法。结论流式细胞术的AnnexinV法和SubG1法可作为肿瘤药物敏感性有效的检测方法。AnnexinV法比经典MTT比色法具有更敏感、快速、简洁、可靠等优点,有临床应用价值。