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1.
将克隆到的中国狂犬病毒疫苗株(5aG)的糖蛋白基因重组到痘苗病毒TK区,并在痘苗病毒P11启动子的控制下,构建了狂犬-痘苗重组病毒(VVaG)。经间接免疫荧光和Western免疫印染证明,重组病毒VVaG能良好地表达狂犬病毒糖蛋白,其分子量约为6600。用VVaG免疫小鼠,7d便可诱生较高的狂犬病毒中和抗体,21d达4169,并能100%保护狂犬病毒本毒株和国际标准攻击毒(CVS)的致死量攻击。  相似文献   
2.
抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体在狂犬病街毒检测中的应用   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 测试抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体用于间接免疫荧光法检测已确认的狂犬病阳性及狂犬病阴性的动物脑组织标本的灵敏度和特异性。方法 将巴斯德研究所狂犬病参考中心保存的来自不同国家的 6 2份狂犬病街毒动物脑组织标本以及 2 71份法国境内收集的正常动物脑组织标本 ,用上述间接免疫荧光检测 ,并以巴斯德研究所狂犬病参考中心提供的狂犬病毒酶联免疫吸附法、组织细胞分离法及直接免疫荧光法等三个试验作确认试验 ,进行比较。结果 间接免疫荧光法可检测涵盖狂犬病毒 7个基因型在内的所有 6 2份街毒标本 ,对确认为狂犬病阴性的动物脑组织标本检测均为阴性 ,其特异性和灵敏度均达到 10 0 %。结论 抗狂犬病毒核蛋白单抗作为间接免疫荧光法检测狂犬病毒具有良好的应用前景。  相似文献   
3.
广西家犬携带狂犬病毒的实验研究   总被引:10,自引:0,他引:10  
目的:调查研究广西地区外观健康的家犬是否携带狂犬病毒。方法:从广西13个县(市收集了外观健康的家犬犬脑标本140份,采用小鼠颅内接种试验、间接免疫荧光技术、夹心ELISA试验、小鼠中和试验以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测脑标本中的狂犬病毒及共相应的抗原。结果:除RT-PCR的检出率稍低(2.86%,4/140)外,其余4种方法均获得3.57%(5/140)的检出率。而且,不同县(市)的检出率亦有所不同。结论:以实验室方法首次证实了广西外观健康的家犬确实携带有狂犬病毒,从而为过去的流行病学调查资料提供了科学的实验室依据,对进一步做好狂犬病的预防和控制有重要的意义。  相似文献   
4.
目的 应用基因工程技术表达和制备肺炎链球菌表面黏附素A(pneumococcal surface adhesin A,PsaA),并与细菌荚膜多糖耦联制备成多糖蛋白结合疫苗,探讨PsaA作为肺炎球菌蛋白载体在增强结合疫苗中其他细菌多糖抗原的免疫原性的同时,还能获得对肺炎球菌的抗体反应,从而达到用一种结合疫苗能诱导出针对两种细菌的抗体免疫应答的目的 .方法 从肺炎链球菌基因组中扩增psaA基因,将目的 基因插入原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET28a-psaA,通过转化进入大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,采用DEAE-阴离子交换层析法纯化基因重组rPsaA蛋白.将纯化到的rPsaA蛋白与A群脑膜炎荚膜多糖(group A meningococcal polysaccharide,GAMP)耦联成多糖蛋白结合疫苗后,用小鼠动物模型进行免疫实验,检测该疫苗的免疫原性,用ELISA法测定该疫苗在小鼠体内产生的针对肺炎球菌和脑膜炎球菌两种病原菌特异性抗原的抗体水平.结果 成功克隆基因重组表达质粒,而且表达的PsaA蛋白在载体上的组氨酸标签之前终止表达,不带有组氨酸标签,保证疫苗的安全性.SDS-PAGE技术分析表明:rPsaA蛋白高效表达,约为菌体蛋白的60%,蛋白质相对分子质量约为37×103,而且蛋白的可溶性好,不形成包涵体,用DEAE-阴离子交换层析法纯化其纯度可达80%以上.纯化到的PsaA蛋白与荚膜多糖耦联成功,应用于小鼠免疫实验,PsaA蛋白载体能显著增强A群脑膜炎荚膜多糖抗原的免疫原性,并同时产生针对肺炎球菌蛋白抗原和脑膜炎球菌多糖抗原的特异性抗体.结论 利用基因工程技术获得无组氨酸标签的PsaA蛋白,并将它与A群脑膜炎荚膜多糖耦联,可以在增强荚膜多糖抗原免疫原性的同时,提高疫苗的免疫保护效果,探讨了给儿童接种一种疫苗能同时预防肺炎和脑膜炎两种传染病的可能性.
Abstract:
Objective To express and purify the pneumococcal surface adhesin A(PsaA) protein,discuss its application as a protein carrier in conjugates vaccine. Methods The gene encoding for the PsaA protein was amplified from the genomic DNA of Streptococcus pneumoniae using PCR. The PCR product was then cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a and the recombinant was transformed into host cell E. coli BL21 (DE3). The expression of the recombinant protein(rPsaA) was induced by IPTG and purifled by using DEAE anion-exchange chromatography. The rPsaA was successfully conjugated with group A meningococcal polysaccharide(GAMP). The mice were immunized subcutaneously with the conjugate and the immune responses against GAMP and PsaA were detected by ELISA. Results The recombinant PsaA was expressed as a 37 × 103 soluble protein without His-Tag. The rPsaA was successfully conjugated with GAMP. In addition to the immune response against PsaA, The antibody response against GAMP was significant improved in the mice immunized with conjugate vaccine in comparison with those immunized with GAMP alone. Conclusion The recombinant protein PsaA without His-Tag was obtained and conjugated with GAMP. The strong antibody responses against PsaA and CAMP were obtained in the immunized mice at the same time which may provide the protection against pneumonia and meningitis simultaneously.  相似文献   
5.
多种方法对广西地区健康犬带狂犬病毒的调查   总被引:32,自引:3,他引:29  
近十几年来,随着我国人民生活水平的提高,养狗成为一种时尚,且数量越来越多,因此我国很多地区常有狂犬病散发和流行,我国狂犬病的主要宿主是犬,在人狂犬病的所有病例中,99%以上是由犬传播病毒引起的。国内曾有人对健康大脑中狂犬病毒带毒率情况作了调查',但仅采用免疫荧光法检测,未进一步应用其他手段验证。WHO指出:分离病毒对证实狂犬病毒抗原检测结果可能是必要的"'。本文中我们采用免疫荧光法、免疫荧光阻断法、夹心ELISA并结合小鼠颅内接种法对外观健康犬犬脑进行狂犬病毒的特异性检测及病毒分离,并验证我室研制的检…  相似文献   
6.
目的:鉴定1株在生物制品生产车间采集的菌株 wh01的种属。方法观察该菌株的形态,并用细菌鉴定仪进行检定。采用 PCR 法扩增菌株的16S rDNA 和甲醇脱氢酶大亚基的 mxaF 基因,用生物信息学软件进行分析。结果该菌株经细菌鉴定仪检定为沙门菌属,但其形态与沙门菌有很大差别,其16S rDNA 和 mxaF基因序列与甲基杆菌属序列的相似性高达99%。结论该菌株属于甲基杆菌属。  相似文献   
7.
目的  优化层析-比色法,并对该方法进行分析方法验证;比较优化层析-比色法和层析-积分法,评价两方法测定伤寒Vi精制多糖分子大小的适用性。方法  优化比色法O-乙酰基标准曲线浓度范围,对该方法进行准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性的验证;应用优化层析-比色法和层析-积分法检测多批次伤寒Vi精制多糖分子大小,对结果进行统计学分析。结果 优化层析-比色法准确度回收率均为100%;样品的重复性相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.4%和0.0%,中间精密度RSD均为3.4%,连续5次测定标准曲线,决定系数均大于0.999 0,耐用性RSD为4.6%。优化层析-比色法和层析-积分法在检测伤寒Vi精制多糖分子大小时,差异无统计学意义(t=-1.372,P>0.05)。结论  优化的比色法具有良好的准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性,两种方法均可用于检测伤寒Vi精制多糖分子大小。  相似文献   
8.
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗(group A meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,MenA-PS-TT)中的游离多糖含量.方法 采用1%脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)处理MenA-PS-TT分离游离PS.游离和结合PS经三氟乙酸水解后,用HPAEC-PAD检测水解产物,并将检测结果与改良钼酸铵分光光度法的检测结果进行比较.结果 1%DOC处理的样品的PS回收率为90%~104%,TT沉淀率为99%以上,说明1%DOC处理不会对游离和结合PS产生影响.HPAEC-PAD检测MenA-PS的重复性良好,3次MenA-PS标准品定位结果和3次MenA-PS-TT成品检测结果的相对标准偏差分别为1.7%和6.4%.HPAEC-PAD与改良钼酸铵分光光度法的检测结果相当.结论 HPAEC-PAD可用于MenA-PS-TT中的游离PS含量检测.  相似文献   
9.
人抗狂犬病免疫球蛋白(HRIG)因价格昂贵而在一些狂犬病流行的发展中国家得不到广泛应用。泰国红十字会国立血液中心(NBC)和Queen Saovabha Memorial研究所(QSMI)用进口组织培养狂犬病疫苗免疫志愿者,用其免疫血清生产了一批HRIG。其生产过程为:通过Cohn冷乙醇法从血浆中分离出球蛋白,再进行纯化和冻干浓缩。成品中狂犬病中和抗体滴度超过150IU/ml。这种  相似文献   
10.
作者将62名有接触狂犬病病毒职业危险的受试者随机分为四组,肌肉注射四种疫苗:法国Merieux研究所生产的人二倍体细胞疫苗(HDCV);德国Behringwerke生产的原代鸡胚细胞狂犬病疫苗(PCECV);瑞士血清和疫苗研究所生产的纯化的鸭胚狂犬病疫苗(PDEV);Merieux研究所生产的纯化的  相似文献   
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