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1.
2.
目的比较布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7后其凋亡相关因子的转录和表达。方法建立16M、M5-90侵染RAW264.7模型,采用CFU计数法比较16M、M5-90侵染RAW264.7 4、8、12、24h后的胞内生存情况;采用qRT-PCR检测AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl基因转录水平的变化;采用ELISA检测TNF-α和Cyt C在细胞内的表达;采用激光共聚焦检测Cyt C在细胞内共定位表达情况。结果布鲁氏菌16M在侵染后4h~24h胞内CFU呈增多趋势,而M5-90CFU先增多后减少。qRT-PCR显示AIF基因的转录水平在侵染后4h~24h内呈上升趋势,且M5-90侵染组与16M侵染组比较差异无统计学意义(P0.05);由M5-90侵染诱导的Apaf-1基因转录水平与16M侵染组比较有统计学意义(P0.05);Bcl-xl的转录量随着侵染时间增长而不断增加,且16M诱导组与M5-90组比较差异无统计学意义(P0.05);M5-90侵染组Bax和Bcl-2水平与16M组比较差异均有统计学意义(P均0.05);M5-90侵染组Bax/Bcl-2比值与16M侵染组比较差异无统计学意义(P0.05)。ELISA分析显示TNF-α、Cyt C分泌量随着时间增长而增加,且M5-90诱导组与16M组比较差异无统计学意义(P均0.05)。激光共聚焦显示Cyt C定位在RAW264.7内,属于胞浆表达,且M5-90诱导的表达量与16M组比较差异无统计学意义(P0.05),并随感染时间的延长不断增加。结论布鲁氏菌疫苗株M5-90侵染RAW264.7 4h~24h内,凋亡相关因子Cyt C、AIF、Bax/Bcl-2、Apaf-1的表达量高于强毒株16M侵染组,而Bcl-xl则相反,表明在此侵染阶段M5-90具有更强的促细胞凋亡作用。 相似文献
3.
目的建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法。方法利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性。结果以粒径为40nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.2,SPA蛋白最适标记量为6μg/ml。交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高。试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92%。结论制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用。 相似文献
4.
目的 构建绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。培养绵羊肺泡巨噬细胞,用绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊巨噬细胞,用试剂盒构建侵染后绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库,并对文库中的部分克隆进行测序。结果 表明,构建的绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊巨噬细胞cDNA文库达到建库要求;所测序列与牛的基因组编码序列同源性最高。在绵羊种布鲁氏菌019株侵染绵羊肺泡巨噬细胞过程中,以50∶1(细菌∶细胞)的个数比,侵染3.5h,能有效构建侵染后绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。 相似文献
5.
目的运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1、mpt64及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64的实时定量PCR方法,并应用此方法检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1、mpt64的mRNA表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株的表达水平为0.36±0.13,两者有显著性差异(t=5.683,P〈0.01)。耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株的表达水平为9.86±2.79,两者差异有统计学意义(t=3.869,P〈0.01)。耐异烟肼菌株的mpt64表达水平为5.89±3.22,敏感菌株的表达水平为7.67±4.52,差异无统计学意义(t=1.552,P〉0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的实时定量检测方法,检测显示耐异烟肼菌株的fbpB、psts1基因的mRNA表达水平显著高于敏感菌株,可能为耐异烟肼MTB的实验室诊断提供分子标识。 相似文献
6.
目的运用实时定量qPCR(quantitative real-ti me PCR)检测结核分支杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B和38 ku蛋白编码基因(fbpB、psts1)的表达水平,分析结核分支杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-Tsi mple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用实时定量PCR检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1的表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株fbpB表达水平为0.36±0.13,差异有统计学意义(t=5.683,P<0.01);耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株psts1表达水平为9.86±2.79,差异有统计学意义(t=3.869,P<0.01)。结论应用实时定量PCR检测耐异烟肼菌株的fbpB、psts1的表达水平显著高于敏感菌株,为耐药结核的实验室诊断提供分子标识。 相似文献
7.
不同途径注入大黄治疗急性重症胰腺炎 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:对比研究经胃管和鼻空肠管不同途径给予大黄治疗急性重症急性胰腺炎的治疗效果.方法:SAP患者43例随机分为A组(n=20)和B组(b=23).在综合治疗基础上A组给予胃管注入大黄,B组给予鼻空肠管注入大黄,观察患者住院7、14 d时APACHE-Ⅱ评分,Balthazar CT积分以及CRP及血淀粉酶,肠道功能恢复时间.结果:治疗7 d时B组APACHE-Ⅱ评分较A组有明显降低(3.76±2.82 vs 4.58±2.07,P<0.05),Balthazar CT积分无明显差别(P>0.05):治疗14 d时A组与B组APACHE-Ⅱ评分、Balthazar CT积分均无明显差别(P>0.05);B组CRP及肠功能恢复时间较A组有明显缩短(8.3±1.7 vs 9.1±3.6,P<0.05:6.2±2.9 vs 8.5±2.3.P<0.01).结论:鼻空肠管途径应用大黄能更有效的地控制急性重症胰腺炎的全身炎症反应,缩短病程. 相似文献
8.
目的通过实时定量PCR(real-ti me PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(si RNA)抑制目的基因表达的方法。方法化学设计合成对应于FTH1(ferritin heavy chain1,FTH1)基因表达mRNA的si RNA,经TurboFectTMin vitro Transfection Reagent转染小鼠RAW264.7巨噬细胞,48h后,提取总RNA,逆转录为cDNA。以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,定量检测FTH1的表达,比较干扰前后FTH1基因mRNA的量。结果 3种si RNA处理的小鼠巨噬细胞中FTH1基因的表达抑制率最高为97.60%。结论实时定量PCR方法的建立为研究布鲁氏菌在侵染巨噬细胞过程中FTH1的功能提供了有效途径。 相似文献
9.
10.
目的 探讨加巴喷丁胶囊联合小剂量泼尼松治疗对带状疱疹患者清神经肽Y(NPY)、P物质(SP)及T细胞亚群的影响及近期临床疗效。方法 选择海南省人民医院2015年1月-2016年12月期间收治的带状疱疹患者128例,随机数表法分为对照组与观察组,每组各64例。其中对照组患者给予小剂量泼尼松治疗,观察组患者给予加巴喷丁胶囊联合小剂量泼尼松治疗。比较两组患者近期疗效,治疗前后患者视觉模拟尺评分(VAS)、T淋巴细胞亚群变化情况(CD3+和CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及NPY和SP水平。结果 经不同方案治疗后,观察组的总有效率为95.31%,对照组总有效率为85.94%,两组相比差异显著且具有统计意义(χ2=8.67,P < 0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后的VAS评分显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P < 0.05);治疗后,观察组VAS评分显著低于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后T淋巴细胞亚群CD3+和CD4+、CD4+/CD8+明显增高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P < 0.05);观察组治疗后T淋巴细胞亚群CD3+和CD4+、CD4+/CD8+较对照组增加更显著,差异有统计学意义(P < 0.05)。两组NPY和SP水平较治疗前均显著下降,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P < 0.05);治疗后,观察组NPY和SP水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 加巴喷丁胶囊联合小剂量泼尼松治疗对带状疱疹患者能够有效改善患者临床症状,缓轻患者的神经疼痛,改善患者机体免疫功能功能,降低外周血NPY、SP水平,值得临床推广和应用。 相似文献