单克隆抗体3A3、2E7用于恶性疟Dipstick检测的初步研究

目的建立一种快速、简便,适用于基层的恶性疟免疫诊断方法.方法将抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ的单克隆抗体3A3、2E7纯化后经配对筛选,利用Dipstick-免疫胶体金技术,制成诊断恶性疟的Dipstick层析条.用该层析条对115份疟疾患者血样,20份非疟疾病人血样及10份正常人血样进行检测,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性、重复性等进行了初步研究.结果用该法检测145份血样,其对恶性疟的敏感性和特异性分别为83.1%及97.5%,已包被抗原、抗体的Dipstick条在4 C及室温下可保存3个月以上,对30份血样重复检测4次结果完全一致.结论Dipstick-免疫胶体金模式快速、简便,适用于基层应用,为疟疾的快速诊断提供了新的有效的手段.     

恶性疟原虫丝氨酸重复抗原部分基因的克隆及其鉴定

根据恶心疟原虫丝氨酸重复抗原基因的保守序列。设计并合成了一对寡核苷酸引物，用PCR方法扩增恶性疟原虫云南株(PFD-3／YN）与海南株(FCC-1／HN)丝氨酸重复抗原部分基因片段．经基因序列测定后，将该片段用SmaI SaⅡ双酶消化，克隆于表达载体pR1T2T，并转化大肠杆菌N4830-1，用PCR及酶切法鉴定pR1T2T-SERA重组质业，为丝氨酸重复抗原的表达奠定基础。     

恶性疟原虫云南株丝氨酸重复抗原部分基因的克隆和序列分析

用ＰＣＲ方法特异性扩增ＳＥＲＡ基因片段，并将该基因片段克隆于Ｍ１３噬菌体，用双脱氧链末端终止法进行测序，应用ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析，结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ，Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６∶１，符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守，我国ＰＦＤ－３／ＹＮ虫株ＳＥＲＡ基因片段仅与Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株在第６６７位氨基酸有不同，与ＦＣＲ３（冈比亚）、ＦＣＢＲ（哥化比亚）、及Ｓ１４、Ｓ１５（塞内加尔）等其它虫株ＳＥＲＡ基因序列完全一致。抗原表位预测分析显示该多肽Ｎ端和Ｃ端可能有抗原表位存在。     

在大肠杆菌中表达恶性疟原虫裂殖子表面抗原及一些异常现象的探讨

将我国恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＡ１第二区基因（ＭＳＡ１Ｒ２）和ＭＳＡ２全基因克隆入ｐＷＲ４５０－Ｉ表达载体中，在大肠杆菌中表达了ＭＳＡ１Ｒ２和ＭＳＡ２与β－半乳糖苷酶的融合蛋白，分子量分别为７２ｋＤ和９４ｋＤ，约占菌体蛋白总量的２５—３０％和５—８％。用兔抗恶性疟原虫血清进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，诱导的ｐＷＲ－ＭＳＡ１Ｒ２和ｐＷＲ－ＭＳＡ２工程菌分别在７２ｋＤ和９４ｋＤ处出现与抗恶性疟抗体反应的特异染色区带，而未经诱导的工程菌和ｐＷＲ４５０Ｉ转化菌则无反应。对ＭＳＡ２－ｐＷＲ工程菌在诱导后出现的工程菌生长缓慢、表达量低、表达产物分子量偏大等异常现象进行了分析。     

免疫层析试验与镜检法、聚合酶链反应诊断疟疾的比较

目的　评价免疫层析试验 (ICT)诊断疟疾的临床应用价值。方法　以镜检法和聚合酶链反应 (PCR)为对照 ,同时用ICT检测 89份门诊可疑疟疾感染患者的血标本。结果　ICT与镜检法和PCR比较 ,阳性检出符合率分别为 93 .4 %和 86.4 % ;敏感性分别为 90 .16%和 83 .3 3 % ;特异性分别为92 .86%和 91.3 0 %。当虫体密度 >10 0个 / μl时 ,ICT的敏感性为 10 0 % ,虫体密度 <10 0个 / μl时 ,敏感性为 72 .73 % ,虫体密度 <5 0个 / μl时 ,敏感性降低到 66.67%。 结论　ICT适用于疟疾检测的初筛 ,但尚不能完全替代镜检法     

华支睾吸虫对自然感染动物模型猫肝脏/胆管及生理生化指标的影响

目的 了解自然状态下猫感染华支睾吸虫的现状及该病对肝脏／胆管及生理生化指标的影响。方法 观察活猫的精神状态，处死后肝脏形态及切开后的眼观形态；通过病理切片观察肝脏、胆管及胆囊的病理变化；测定血常规及肝脏功能指标。结果 7.3％的肝脏（8／218，218为阳性猫）表面有明显的黄豆粒大小的肿瘤；94％（205／218）的肝脏质地变硬，结缔组织增生；29．8％（25／218）肝脓肿，肝色较黄，小叶结构模糊：54．1％（118／218）胆管内上皮细胞增生，淋巴细胞浸润；感染猫血红细胞显著降低（P〈0．01），血清丙氨酸氨基转移酶显著升高（P〈0．05）。结论 华支睾吸虫对肝脏、胆管及胆囊造成了严重伤害，很可能是肝癌、胆管癌的诱因之一。     

恶性疟原虫抗原—痘苗病毒重组活疫苗株的实验室评价

以恶性疟原虫保护性抗原复合基因—痘苗病毒重组活疫苗候选株为研究对象 ,探索其免疫血清及IgG的体外抗疟原虫能力、保护性细胞免疫反应及换人血猕猴模型动物抗攻击能力试验。结果表明 ,受检免疫血清及IgG具有一定的体外抑制恶性疟原虫增殖作用。家兔及大白鼠免疫后 4～ 6周血清中可产生明显的IL 2活性 ,免疫后 6周家兔、大白鼠及小白鼠血清IFN的活性水平比免疫前明显升高。免疫后 1个月攻虫 ,免疫猴从第 3天一直到第 12天血检中均未发现疟原虫 ;而非重组痘苗病毒免疫猴第 3天后原虫感染率上升 ,第 6天原虫感染率最高达到 6 0 % ,而后原虫感染率逐渐下降 ,持续 13d ;空白对照猴第 3天后原虫感染率也上升 ,第 8天原虫感染率最高达到 2 5 % ,而后原虫感染率逐渐下降 ,持续 12d。结果初步表明该候选疫苗株具有一定的诱发体液免疫、细胞免疫反应及抗虫体攻击能力 ,值得做进一步的研究。     

恶性疟原虫云南株富含组氨酸蛋白II部分基因的克隆和序列分析

目的：测定恶性疟原虫云南株富含组氨酸蛋白 Ｉ Ｉ部分序列,了解该虫株与其它虫株 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因序列的差异。方法：采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法特异性扩增 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因片段,并将该基因片段克隆于 Ｍ １３ 载体,用双脱氧链末端终止法进行测序,应用 Ｐ Ｃ Ｇ Ｅ Ｎ Ｅ软件对不同虫株恶性疟原虫 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ进行基因序列分析。结果：我国云南株恶性疟原虫与 ７ Ｇ８ 及 Ｄ１０ 虫株 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因有不同程度的差异,３ 虫株间 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ氨基酸序列同源性为７０．３％ ,核苷酸序列同源性为 ６８．６％ 。结论：云南株与７ Ｇ８ 及 Ｄ１０ 虫株 Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ基因存在差异。     

恶性疟Dipstick-免疫胶体金检测试纸条和ICT测试卡现场实验

目的 现场评价自制的恶性疟Dipstick-免疫胶体金检测试纸条和商品疟疾ICT测试卡的敏感性和特异性及稳定性。方法 以常规镜检法作为标准,用Dipstick条和ICT卡对镜检确认的疟疾和非疟发热病人血样平行检验。结果 Dipstick条恶性疟阳性的符合率为95％,特异性为100％,30％以上活性保持时间为45天左右;ICT卡的恶性疟(含混合感染)阳性符合率为100％,单纯间日疟符合率为97％,特异性为100％,不能区分混分感染,稳定性超过Dipstick条。结论 Dipstick条仍需改进完善。ICT卡敏感特异、简便快速,是替代传统镜检较好的一种方法。     

抗恶性疟HRP-11单链抗体的筛选和鉴定

目的　研究开发简便、快速和有效的疟疾诊断技术。方法　利用噬菌体抗体库技术 ,在构建抗恶性疟原虫红内期噬菌体抗体库的基础上 ,经 3轮“吸附 -洗脱 -扩增”的富集反应后 ,筛选抗HRPII阳性克隆株并进行可溶性诱导表达 ,最后用ELISA和Westernblot等进行鉴定。结果　筛选出 6株抗HRPII阳性克隆株 ,表达的单链抗体Mr 为 310 0 0左右 ,能与HRPII抗原起特异性结合反应。结论　本研究为研制疟疾快速诊断试剂盒奠定了基础