利用基因表达连续分析技术构建肝癌HepG2细胞文库

目的 采用基因表达连续分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)建立肝癌HepG2细胞标签文库.方法 提取肝癌HepG2细胞总RNA,分离纯化得到mRNA,利用改进后的M-MLV RTasecDNA合成试剂盒合成生物素标记的双链cDNA;得到全长cDNA后,根据SAGE技术流程后续步骤,建立肝癌HepG2细胞标签文库.结合GenBank、UniGene文库分析标签代表的转录本,最终通过SAGE软件分析标签丰度.结果 15 586个标签中有14 181个获得稳定有效的扩增,长度在200～3000 bp.将获得的长片段进行序列分析后,2023个特异基因被发现.结论 用改进后的逆转录试剂盒可以较好地获得全长cDNA,为SAGE技术构建文库提供可靠的原料.借助SAGE技术建立的肝癌HepG2细胞标签文库,容量大、效率高,为后续基因研究搭建了良好的平台.     

大鼠肝癌细胞与胚胎肝细胞microRNA差异表达谱的研究

目的 建立大鼠肝癌细胞与大鼠胚胎肝细胞microRNA(miRNA)表达的差异谱,为研究miRNA在肝细胞癌变发生机制中的作用提供新线索.方法 化学致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)建立近交系F334大鼠肝癌模型.体外原代培养大鼠肝癌细胞和正常F334大鼠胚胎肝细胞,Trlzol法抽提细胞总RNA,进一步制备Hy3荧光标记的miRNA;利用ExiqonmiRNA基因芯片技术.采用含2056条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析,其实验数据用SAM3.0软件进行差异显著性分析.结果 原代培养可获得稳定传代的肝癌细胞及胎肝细胞,两者在形态上无明显差异;miRNA芯片共获得78个差异表达的miRNAs,其中68个表达上调(foldchange>2),10个表达下调(foldchange<0.5),部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中has-miR-21为肝癌癌变相关miRNA.结论 正常肝细胞中存在着与肝细胞癌变及侵袭、转移相关的miRNAs,miRNAs的表达具有明显的时序性,其表达特征的改变可能导致了肝癌的发生.     

罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定

目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P＜0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.     

大鼠肝癌细胞与胎肝细胞间抑癌微小RNAs的表达差异

微小RNAs(miRNAs)是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小分子RNA[1],通过与其靶mRNA分子互补结合,在翻译水平上特异性抑制基因表达,参与调控生物生长和发育等许多复杂的生命过程[2,3],异常的miRNAs表达可能与人类许多疾病乃至肿瘤的发生和发展都密切相关[3,4].已知的miRNAs参与癌症发生的机制包括细胞黏附、血管生成、蛋白质水解、细胞信号系统、细胞增殖、侵袭转移和细胞死亡[5].miRNAs在肝癌组织中异常表达,它可能参与了肝细胞癌变及肝癌转移的病理过程[6].本研究应用Exiqon miRNA基因芯片技术,建立大鼠肝癌细胞和胎肝细胞之间miRNAs的差异表达谱,探索肝癌诊断和预后的新指标.DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2009.02.016     

252Cf中子腔内治疗复发性妇科恶性肿瘤五例分析

复发性妇科恶性肿瘤的治疗是一个非常棘手的问题,初次治疗时经过手术、放化疗的妇科恶性肿瘤患者出现肿瘤复发,大多数已经失去再次手术机会,再次放疗的效果也不甚理想.近年来,武装警察部队总医院肿瘤中心采用高线性能量传递(1inear energy transfer,LET)的252Cf中子腔内治疗复发性妇科恶性肿瘤,取得了一定的效果,现报道如下.     

重度肾积水外科方法保肾治疗的探讨

目的总结重度肾积水外科方法保肾治疗体会。方法选择本院泌尿科近6年重度肾积水保肾治疗患者34例，针对患者的治疗情况与预后情况进行分析。结果肾功能术后恢复的25例患者年龄（27．09±18．49）岁，未恢复的9例患者年龄（41．42±16．48）岁（P〈0．05）；22例手术为。肾盂或肾盂输尿管连接部的整形手术，Anderson—Hynes（A—H）手术患者恢复情况（14／17）明显优于其他手术（1／5）；2例特大肾积水患者经造瘘后成功恢复了肾功能。结论患者年龄与重度肾积水外科保肾治疗预后密切相关；在PUJ整形方面A-H手术更适合作为首选术式；特大肾积水行经皮肾盂穿刺造瘘术是可行的。     

直肠癌肝转移致胆道癌栓1例

1病例报告 患者男，汉族，51岁。主因“直肠癌根治术后3年，肝肺脑骨多发转移综合治疗后2月”于2007年9月8日收住入院。患者于2004年5月中旬无诱因出现大便次数增多，性状改变并时有血便。同年8月4日就诊于解放军总医院，行直肠镜检查，活检病理示：（直肠）中一低分化腺癌。     

体外琼脂克隆培养对胎肝干细胞分化的影响

目的 探讨和建立体外扩增胚胎肝干细胞并抑制其分化的培养条件及方法.方法 胶原酶结合机械消化法制备14 d胎龄大鼠胎肝干细胞悬液.将细胞随机分为两组.一组接种至Ⅰ型胶原包被的培养板中,常规贴壁培养.另一组细胞则接种至软琼脂培养基中进行悬浮培养.倒置显微镜下观察两组细胞的生长.培养2周后收集两组细胞,电镜观察两组细胞超微结构的差异,流式细胞仪检测其CD90.1+、CD49F+等干细胞标志物表达特征,碱性磷酸酶染色检测其分化状态的差异.结果 悬浮培养的胎肝干细胞具有高核浆比、胞浆内细胞器不发达等超微结构特征,并高表达CD90.1、CD49F等干细胞标志物,碱性磷酸酶染色阳性;而常规贴壁培养的胎肝干细胞则在培养过程中显示出显著的分化特征.结论 琼脂克隆培养的胎肝干细胞较有血清贴壁培养分化程度低,在琼脂克隆培养条件下能增殖形成具有显著干细胞特征的克隆球.