应用外显子结合目标区域捕获测序芯片对一回族先天性白内障家系致病基因的检测

背景 先天性白内障是造成儿童盲和弱视的重要原因,其中约50％的先天性白内障具有遗传性.目的 应用眼遗传病外显子结合目标区域捕获测序芯片检测一常染色体显性遗传先天性白内障家系的致病基因.方法 于2011年在宁夏眼科医院收集一回族常染色体显性遗传先天性白内障家系,采集家系中患者及表型正常成员的临床资料.对家系成员进行眼科检查,抽取患者、表型正常家系成员及300名正常对照者的外周静脉血各5 ml,提取DNA,利用眼遗传病外显子结合目标区域捕获测序芯片筛查和检测候选致病突变位点.采用PCR和直接测序法对家系成员和正常对照者进行突变位点验证,最终确定致病突变位点.结果 该家系共6代61名成员,均为回族,先天性白内障患者18例,为5代遗传,符合常染色体显性遗传特征.患者中合并眼球震颤和斜视者7例,合并高度近视者4例,来诊前均已实施白内障摘出术.利用眼遗传病外显子结合目标区域捕获测序芯片检测结合生物信息学方法筛查后共得到8个候选致病突变位点,其中5个在非编码区,3个在编码区,通过PCR和直接测序法验证确定CRYGD基因上的P24T突变是该家系的致病突变位点.该突变与家系内所有患者表型共分离,在家系表型正常者及300名正常对照者均未发现此突变.结论 外显子结合目标区域捕获测序技术快速检测CRYGD基因P24T突变为该先天性白内障家系致病突变,该技术为临床表型多样、致病基因众多的先天性白内障的致病基因检测提供新的手段.     

隐性乳腺癌1例

患者,女,36岁,因右侧腋窝肿块伴疼痛半月,加重5天入院。患者人院前半月出现右肩部沉重不适,右腋窝疼痛并触及一肿块,似小枣样大小,质地较硬,活动度差,明显触痛。患者以往健康,否认传染病及其他病史。     

铜绿假单胞菌在临床标本的分布及耐药性分析

铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)是医院感染中常见的非发酵的革兰氏阴性杆菌,分布广泛,空气、水内均有存在,寄居于正常人的体表、呼吸道等,在医院环境中可长期存活,是常见的条件致病菌。常引起危重患者伤口感染、肺部感染等。近年来,广谱抗菌药物的应用,导致多重耐药的菌株不断出现,给临床治疗带来困难。我们对铜绿假单胞菌的感染分布特征和耐药性进行分析。     

猪附红细胞体半巢式PCR诊断方法的建立

目的 为能够更加准确、敏感的检测出猪附红细胞体（Mycoplasma suis,M.suis）,本试验建立一种新的诊断方法 —半巢式聚合酶链反应（hemi-nested Polymerase Chain Reaction,hemi-nested PCR）。方法 利用Oligo 6.0和Primer 5.0软件设计筛选出合适的PCR引物,经酶切分析和半巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定。同时与普通PCR诊断方法 进行比较。结果 测得的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列（AJ504999）同源性为100%。特异性试验结果 表明本实验设计的PCR引物不能从弓形虫、链球菌、大肠杆菌、猪肺炎支原体和猪伪狂犬病病毒的基因组DNA中扩增出条带。通过敏感性试验,半巢式PCR诊断方法 最低能够检测出0.12fg的标准模板DNA。通过与普通PCR比较,证明本试验建立的半巢式PCR更具敏感性和实用性。结论 本试验建立的半巢式PCR诊断方法 具有特异、敏感、实用等特点,为猪附红细胞体的检测提供了一种可靠的诊断方法 。     

110例视网膜色素变性患者RP1基因突变的检测分析

背景视网膜色素变性（RP）是一组常见的单基因遗传性、致盲性眼底病变，目前尚无有效的治疗方法。目的研究RP1基因在宁夏地区RP患者中的突变频率及特征，进一步探讨其在RP发病机制中的潜在作用。方法收集宁夏回族自治区110例RP患者，其中包含35例常染色体显性遗传性RP（ADRP）患者和75例散发患者为RP患者组，同时收集100例健康成年人为正常对照组，2组均采集外周静脉血3～5ml，应用聚合酶链反应（PCR）和直接测序法进行RP1基因全编码区及邻近剪切位点内含子区域序列突变的检测。运用多因素Logistic回归方法和基于网络的评分软件PolyPhen、Sorting Intolerantfrom Tolerant（SIFT）对研究结果进行分析。结果RP患者组和正常对照组RPl基因共检测出11个变异位点，P．Lysll52Lys和C．＊247A〉C为新发现的突变。RP患者组第3内含子C．788—92T〉C的突变频率与正常对照组比较差异有统计学意义（χ2=9．12，P〈0．01）；3’-侧翼序列区c．＊247A〉C的突变频率高于正常对照组，差异有统计学意义（χ2=12．77，P〈0．01），且与RP发生呈显著正相关（r=1．11，P〈0．05），其余位点突变均证实为RPl基因的多态性。RP患者组P．Gln1725Gin的突变率显著高于正常对照组（χ2=42．09，P〈0．01），但其与RP的发生无关（r=1．74，P〉0．05）。1例散发患者发现了P．Lysll52Lys的突变。在83例RP患者中发现有P．Arg872His、P．Alal670Thr和P．Serl69lPro突变的同时出现，PolyPhen分析显示，三者均为保护性突变，评分分别为1．11、0．74、0．22；SIFT分析显示，这3个突变均对RP表现为保护作用，评分分别为0．07、0．60、0．22；携带这3个突变的RP患者夜盲出现的平均年龄为30．54岁，27例未携带这3个突变的RP患者夜盲出现的平均年龄为21．06岁；携带这3个突变的RP患者平均最佳矫正视力为0．50±0．38，未携带者的为0．40±0．33，差异有统计学意义（t=2．11，P〈0．05）。结论在宁夏回族自治区RP患者中，RPl基因的致病突变率低于中国其他地区的人群。P．Arg872His、P．Alal670Thr和P．Serl691Pro突变的协同出现可能对RP起到一定的保护作用，同时也可能降低了RPl基因致病突变的发生率。     

视网膜色素变性患者特异性光感受器细胞核受体基因突变检测分析

目的 观察特异性光感受器细胞核受体(NR2E3)基因在宁夏地区视网膜色素变性(RP)患者中的突变频率及特征，探讨其在RP发病机制中的作用。方法 经检查确诊的120例RP患者纳入研究。其中，常染色体显性遗传RP (ADRP)患者33例，来自18个家系；常染色体隐性遗传RP (ARRP)患者20例，来自15个家系；散发型RP(SRP)患者67例。选取100名健康成年人作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)和直接测序方法，检测NR2E3基因全编码区和邻近剪切位点的内含子区域序列突变。多因素分析研究NR2E3基因突变位点对RP的作用。结果 120例RP患者NR2E3基因检测出变异位点12个。其中，非编码区5个；第4、6、7外显子上7个。12个变异位点中，新发现变异位点6个。外显子上7个变异位点中，同义突变3个；错义突变4个。统计学分析结果显示，所有变异位点均为NR2E3基因多态性。多因素Logistic回归分析显示，变异位点均与RP发生无相关性。18例ADRP先证者、67例SRP患者和正常对照组中，分别有1、3、2例NR2E3基因第4外显子上发现p.Glu121Lys变异。发生该位点变异的ADRP患者家系（NXRP-1）另外8例患者中，出现p.Glu121Lys位点变异5例，未出现变异3例。出现变异的6例患者发病年龄较未出现p.Glu121Lys位点变异的3例患者早，且较早出现明显的中心视力损害。结论 宁夏地区RP患者NR2E3基因致病突变率小于1％，NR2E3基因的p.Glu121Lys变异发生率较低。     

宁夏回族自治区同心县50岁及以上农村人群屈光不正患病率调查

目的 调查宁夏回族自治区同心县50岁及以上农村人群屈光不正的患病情况,并了解屈光矫正前后,盲和低视力的患病情况.方法 调查研究.采用单纯随机抽样的方法对宁夏同心县50岁及以上的农村人群进行一般情况的问卷调查和视力、眼压、验光、裂隙灯显微镜、免散瞳数字眼底照相等眼部专科检查.采用卡方检验对数据进行分析.结果 共5 493例符合纳入标准,其中5 046例接受并完成了检查,应答率为91.86％,在受检的5 046例中,屈光不正2 116例,屈光不正患病率为41.93％.根据日常生活视力(PVA)标准和最佳矫正视力(BCVA)标准,盲的患病率分别为5.35％、2.02％,差异有统计学意义(x2=78.78,P＜0.01),低视力的患病率分别为15.28％、5.77％,差异有统计学意义(x2=244.54,P＜0.01).受教育程度小学以下、小学、初中、高中及以上屈光不正患病率分别为45.94％、36.42％、25.38％、33.79％,不同教育程度患病率差异有统计学意义(x2=97.89,P＜0.01);回族和汉族患病率分别为43.33％、35.92％,差异有统计学意义(x2=17.40,P＜0.01).结论 宁夏同心县50岁及以上农村人群屈光不正患病率为41.93％,根据不同标准,盲和低视力的患病率不同,不同年龄、教育程度、民族之间患病率也不同.通过屈光矫正,低视力患病率显著降低.     

血清VEGF、TK-1和T淋巴细胞亚群与乙型肝炎病毒相关性肝病发生和进展的关系

目的探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性胸苷激酶-1(TK-1)和T淋巴细胞亚群与乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝病的发生和进展的关系。方法选择HBV相关性肝病病人188例,其中单纯乙型肝炎(乙肝)52例,肝纤维化40例,肝硬化56例,肝癌40例。另选择30名健康体检者为对照组。采用PCR法检测HBV-DNA负荷量,常规生化法检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,ELISA法检测VEGF和TK-1水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分比和CD4+/CD8+。结果单纯乙肝组、肝纤维化组、肝硬化组、肝癌组的HBV-DNA负荷量及ALT、AST水平差异均无统计学意义(P>0.05)。肝癌组、肝硬化组、肝纤维化组、单纯乙肝组、对照组VEGF和TK-1、CD4+/CD8+水平逐渐降低;各组CD3+、CD4+和CD8+水平差异均无统计学意义(P>0.05)。HBV相关性肝病病人血清中VEGF与TK-1呈明显正相关关系(r=0.745,P<0.01),VEGF与CD4+/CD8+呈明显负相关关系(r=-0.217,P<0.01),TK-1与CD4+/CD8+呈明显负相关关系(r=-0.208,P<0.01)。结论HBV相关性肝病病人血清中VEGF、TK-1和CD4+/CD8+水平与疾病的发生和进展相关,VEGF和TK-1表达升高、CD4+/CD8+下降可能参与了乙肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌的发生和进展。     

对方剂配伍规律研究的几点认识

重点探讨方剂配伍规律研究中的几个重要概念问题,力图对这些概念的内涵进行诠释与升华,同时探讨方剂配伍规律研究中的难点问题,以期对相关研究工作有所裨益。