采用定点基因缺失突变技术在大肠杆菌中分泌鲑鱼生长激素

目的：为获得与天然鲑鱼生长激素一致的基因工程产物,对已构建的鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒ｐＯｓＧＨ１５３进行改造,删除所编码表达产物氨基端多余的９个碱基,方法：采用ＰＡＬＴＥＲ系统进行寡聚核苷酸指导下的基因定点缺失突变。突变质粒ｐＯｓＧＨ１５８经限制性酶切图谱及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析加以证,结果：含有表达质粒ｐＯｓＧＨ１５８的大肠杆菌株经ＩＰＴＧ诱导后提取周质帽白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫     

逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞

目的：以牛生长激素(bGH)为模型，建立逆转录病毒载体转移系统，体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS，以获得bGH表达。方法：将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLC-MDR相应酶切位点，获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转洒重组质粒进入包装细胞PA317，筛选长春新碱抗性克隆株，收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS，筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3／bGH和2BS／bGH。结果：RT－PCR分析表明基因转染组的3T3／bGH细胞和2BS／bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带，而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达，而作为对照的3T3／mdr细胞和NIH／3T3细胞均无此蛋白表达。结论：应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞，该系统易筛选，转染效率较高。     

临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌染色体oprD基因突变的检测

当前 ,铜绿假单胞菌耐亚胺培南的耐药机制研究多为实验菌株 ,主要涉及细菌外膜对药物的通透性降低或 (和 )细菌产生灭活药物的酶 ,使抗生素失效 ,而临床分离菌株的研究 ,国内外均鲜见报道。我们建立了检测编码细菌外膜蛋白ｏｐｒＤ2 的染色体基因突变的ＰＣＲ方法 ,探讨了临床分离的 18株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌外膜蛋白ｏｐｒＤ2与耐药的关系。材料与方法一、材料(一 )抗生素　亚胺培南纸片 (Ｉｍｉｐｅｎｅｍ 10 μｇ)系Ｂｅｃ ｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品。(二 )菌株　共计 18株耐亚胺培南铜绿假单胞菌 ,从门诊或住院患者分离而…     

手机乙肝感染的调查及消毒的评价

目的 观察口腔科牙钻手机乙肝污染情况及评价不同消毒方法的效果。方法 对使用中的门诊手机采用ELISA及PCR方法HBsAg及PCR方法检测手机污染情况。人工污染手机后，采用不同的消毒方法评价对乙肝的消毒效果。结果 门诊手机的检出率分别为21.1％的HBsAg和28．7％的HBV—DNA。消毒效果以蒸汽高压灭菌。2％戊二醛及2．5％的稳定二氧化氯为最佳。结论 门诊手机存在乙肝污染。稳定性二氧化氯浸入是高效消毒剂可替代。     

临床菌株耐药性产生和播散的机制

细菌的耐药性一般来源于多种途径，如药物作用靶位被修饰，药物被酶学失活，或同时伴有细菌外膜通透减少和外排泵出增强而使细菌内药物减少。临床菌株耐药往往有多种机制参与，一旦发生，能产生大量的子代耐药株。