小鼠严重急性呼吸综合征样模型相关肝脏损伤的研究

目的 通过动态监测小鼠严重急性呼吸综合征（SARS）样模型肝脏的组织病理学变化和病毒分布情况，进一步结合肝内凝血酶原酶（fg12）的表达和纤维素沉积现象来探讨SARS肝脏损伤的可能机制及其临床意义。方法实验组Balb／cJ近交系小鼠气管途径感染100PFU鼠肝炎3型病毒（MHV-3），平行设立0．9％氯化钠溶液对照组，动态观察感染后两组小鼠的一般情况、组织脏器的病理学改变和肝功能损伤情况。标准噬斑法和原位杂交技术检测实验组小鼠组织器官的病毒分布情况。结合感染后肝组织中纤维素的表达，分别从蛋白和基因转录水平探讨fg12作为一种促炎症因子在SARS肝损伤中的作用。结果实验组小鼠5d内死亡率高达100％，组织病理学观察发现病变可累及多个脏器，其中肝脏小叶结构基本完整，肝细胞弥漫混浊肿胀，大面积气球样变和水样变，汇管区少量淋巴细胞浸润，偶见中央静脉周围肝细胞的点灶状坏死；肺脏呈现典型间质性肺炎样改变伴透明膜、微小血栓形成；非特异性炎性改变亦见于脾脏、肾脏等其他脏器。噬斑试验和原位杂交显示病毒可侵犯所有收集的组织脏器。随着感染时间的延长，小鼠肝脏功能受损，fg12（mfg12）转录和表达可出现在感染肝脏的坏死区域，周围伴有纤维素沉积。对照组小鼠全部健康存活。结论利用MHV-3成功建立了小鼠SARS样模型，并提示其肝脏损伤在病理学改变和病变程度上均类似于人类SARS合并的非特异性肝炎，除病毒本身所致的肝细胞病变，mfg12在感染后肝组织中的特异性表达及其诱导的纤维素沉积可能是造成肝脏损伤的又一重要因素。     

肝脏自然杀伤细胞在小鼠急性肝衰竭中的作用

目的 探讨肝脏自然杀伤(NK)细胞在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠急性肝衰竭中的作用.方法 取6～8周龄雌性Balb/cJ小鼠,腹腔注射100 pfu MHV-3,采用流式细胞术检测感染MHV-3 0、24、48、70 h后的Balb/cJ小鼠肝脏、脾脏、外周血和骨髓中NK细胞的百分率及肝脏NK细胞表面活化分子CD69表达的百分率.细胞内细胞因子染色法检测肝脏NK细胞分泌干扰素γ的水平.非放射性细胞毒试验检测肝脏NK细胞的杀伤活性. 结果Balb/cJ小鼠感染MHV-3后,肝脏NK细胞的比例显著升高,在感染48 h后达到峰值(43.9%±2.3%),约为感染前的4倍,随后仍维持在较高水平至小鼠死亡;外周血NK细胞比例同样明显升高,在感染48 h后达到峰值(18.0%±5.4%),但随后显著同落,至70 h仅为1.3%±0.6%,脾脏和骨髓NK细胞比例均先明显减少后又有所上升.肝脏NK细胞在MHV-3感染48 h后其表面活化分子CD69表达明显上调,杀伤活性显著增强,同时分泌干扰素Y的水平也显著增加. 结论 Balb/cJ小鼠感染MHV-3后,来自骨髓和脾脏的NK细胞在肝脏迅速大量募集和活化,且杀伤活性显著增强,分泌干扰素Y水平也显著增加,表明肝脏NK细胞在MHV-3导致的急性肝衰竭中可能发挥着关键作用.     

MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏和慢加急性肝衰竭患者外周血单个核细胞 TLR2表达的变化

目的：研究慢性乙型肝炎患者和慢加急性乙型肝炎肝衰竭（HBV-ACLF）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll 样受体2（TLR2）表达,以及鼠三型肝炎病毒（MHV-3）诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏 TLR2表达的变化。方法收集慢性乙型肝炎和 HBV-ACLF 患者外周血,分离 PBMC,采用实时定量 PCR 法检测 PBMC 中 TLR2 mRNA;给 Balb/cJ 小鼠腹腔注射MHV-3（100 pfu）,建立小鼠暴发性肝炎模型,观察感染0、24、48和72 h 后肝脏TLR2水平变化。结果 BALB/cJ 小鼠在感染 MHV-3后,与0 h[（0.39±0.06）%]比,肝细胞 TLR2 mRNA 水平在感染48和72 h 均显著升高[分别为（9.06±1.60）%和（6.42±2.42）%,P＜0.05）],并于48 h 达最高水平,且两时间点细胞 TLR2 mRNA 水平均与血清 ALT 和 AST 水平呈正相关（r=0.804,P＜0.01;r=0.797,P＜0.01）;HBV-ACLF患者 PBMC 中 TLR2 mRNA 水平显著高于慢性乙型肝炎患者[（5.92±5.26）%对（1.15±1.59）%,P＜0.05）]。结论 TLR2参与了 MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠以及 HBV-ACLF 患者肝脏损伤的发病过程。     

免疫系统在病毒性肝炎肝脏损伤中的作用

在病毒性肝炎疾病中,免疫介导的肝损伤在肝脏损害初期起着主要作用。其介导肝损害的主要机制是细胞介导的细胞毒作用,后者主要通过颗粒胞吐作用和死亡受体两条途径杀伤靶细胞。细胞毒性淋巴细胞作用的时期及与之相关联的其他免疫反应的发生很可能在决定病毒性肝炎急性肝损伤的严重性中起着重要作用。本文就免疫系统在病毒性肝炎肝损伤中的作用及机制研究进展作一介绍。概述在急、慢性病毒性肝炎[1,2]的肝损害的研究中,国内外学者所观察到的炎性浸润和肝细胞损伤的模式强烈表明,免疫系统介导的肝脏损伤是首要机制。大部分肝炎病毒是非致细胞病变性病毒,它们并不直接诱导肝脏损伤,而是通过诱导宿主的细胞病变免疫反应杀伤病毒感染的肝细胞[3-5]。在病毒性肝炎免疫诱导肝损伤疾病中,针对病毒抗原的抗体反应是最易辨认的特征。然而涉及到病毒性肝炎中肝外免疫复合物介导的肝脏疾病时,这些抗体反应在相应肝损伤中的作用并不是十分显著。细胞因子则在针对病毒抗原的天然免疫和特异性免疫中起着重要作用。由于α、β型干扰素可以通过非细胞病变机制介导多种抗病毒效应,因此在急性病毒性肝炎中被视为最大的保护因素,它们可以先于或在细胞毒性T细胞发挥作用的同时降低病毒滴度[2]。其它的...     

生物纳米siRNA颗粒抑制丙型肝炎病毒复制的体外研究

目的研究携带针对丙型肝炎病毒（HcV）I洲A的小干扰RNA（siRNA）的生物可降解性纳米颗粒在体外对HCV复制的抑制作用。方法采用“一锅合成法”制备携带针对HCVRNA的siRNA的D－半乳糖－多聚乙酰亚胺－磷酸钙纳米颗粒,噻唑盐（MTT）法检测该纳米颗粒的细胞毒性,荧光分光光度法检测该siRNA纳米颗粒对HcV的抑制作用。结果该纳米siRNA颗粒对肝原代细胞无毒性作用,在HcV细胞培养系统中,可被肝肿瘤细胞（Huh7．5．1）摄取进入细胞内,抑制HcV病毒载量超过1log100。结论D－半乳糖－多聚乙酰亚胺－磷酸钙生物可降解性纳米siRNA颗粒为治疗HCV感染提供了新的手段,具有一定发展前景。     

紧密连接蛋白抗体抑制丙型肝炎病毒传播的体外研究

目的：研究紧密连接蛋白（claudin-1）抗体在体外阻断丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）传播的抑制效果。方法：应用HCV传播试验检测-claudin1抗体及丙型肝炎（HC）患者血清对HCV传播的抑制效果。结果：成功建立了HCV传播检测系统,结果表明,HCV感染患者血清和-claudin1抗体都可有效阻断HCV细胞外病毒传播;HC患者血清在体外不能有效抑制HCV细胞间传播,而-claudin1抗体可有效阻断HCV细胞间传播。结论：与其他研究者所发现相一致[1],HCV可以逃避来自患者血清中和抗体的中和效应,而-claudin1抗体可有效阻断HCV传播,为HCV防治提供了新的策略。     

pGC-FU-存活素慢病毒表达质粒的构建

目的 构建pGC-FU-survivin慢病毒质粒,旨在下一步实验中利用survivin蛋白的表达影响原代肝细胞的增殖.方法 从高表达survivin的小鼠淋巴瘤细胞株YAC-I中获取存活素(survivin)基因,连接到pcDNA3.1(+)质粒上,双酶切及双向测序鉴定.构建pGC-FU-survivin慢病毒载体,...     

慢性丙型肝炎患者PBMC TBK1s表达

目的探讨蛋白激酶TBK1s在慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达及其意义。方法采用实时荧光定量PCR法检测21例慢性丙型肝炎患者PBMC蛋白激酶TBK1、其剪接变体TBK1s和β-干扰素（IFN-β）水平。结果慢性丙型肝炎患者PBMC TBK1s水平显著性高于健康对照人群;经干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者PBMC TBK1s表达与健康人比无显著性差异。结论 TBK1s水平与慢性丙型肝炎病毒感染相关,TBK1s可能在慢性HCV感染发病过程中发挥某种调空作用     

暴发型病毒性肝炎小鼠模型的研究及应用

有关病毒诱导暴发型肝炎发病机制的研究主要存在两个障碍,一是尚无合适的细胞系进行人类肝炎病毒的体外培养,二是与人类暴发型肝衰竭临床综合症十分接近的较大实验动物不易获得。尽管如此,建立的两种病毒诱导的小型啮齿类动物模型为深入了解病毒诱导的暴发型     

华中地区神经管缺陷家庭叶酸代谢相关基因的单核苷酸多态性研究

目的 通过对叶酸代谢相关基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与环境危险因子交互作用的关联分析,寻找神经管缺陷(neural tube defects,NTD)致病基因及环境危险因素. 方法收集NTD流产胎儿组织标本或患儿血标本(n=278)及其正常双亲的血标本(n=478),记录母亲围孕期补充叶酸、糖尿病、服药史等情况.采用CEQ 8800系统进行多重SNP分析,对所有样本叶酸代谢相关的12个基因共28个SNP测序.通过病例-双亲对照研究及传递/不平衡检验,分析SNP与环境危险因子(孕期补充叶酸、母亲糖尿病、孕期服药史)的交互作用对NTD发病的影响. 结果 亚甲基四氢叶酸还原酶(基因为MTHFR)rs1801133与NTD的关联具有统计学意义,而且环境风险因子(未补充叶酸、母亲糖尿病)对NTD的发生起增效作用;而甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶(基因为BHMT)rs3733890仅在未补充叶酸层与NTD存在连锁不平衡,基因型本身并不能单独导致疾病;而其他基因的SNP与NTD的发生没有显著关联. 结论 MTHFRrs1801133是NTD的危险因子,而BHMT rs3733890不是NTD的独立危险因子.未来尚需要对更大的样本进行基因与基因、基因与环境交互作用的研究以探讨NTD的发病原因.