肝细胞核因子3结合位点的突变及对抑制乙型肝炎病毒复制的影响

目的 研究肝细胞核因子(HNF)3结合位点HNF3β对HBV转录和复制调节作用的机制.方法 通过分别位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和sp区上的HNF3结合位点,构建HBV基因组2个或3个位点的复合突变,获得4个复合突变型重组质粒;分别转染非肝源性细胞小鼠成纤维细胞株(NIH3T3),Northern印迹法检测3.5 kb、2.4 kb/2.1 kb、0.7 kb HBV RNA的转录水平,Southern印迹法检测HBV DNA复制中间体水平,观察上述突变是否会影响HNF3β对HBV转录和复制的抑制作用.结果 在被转染的非肝源性细胞3T3中,HNF3β仍能降低4个复合突变型HBV重组质粒3.5 kb HBV RNA的转录水平,抑制HBV DNA的复制;与未共转染HNF3β相比,转录水平下降50%～75%、复制水平下降80%～96%.结论 在位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和Sp区上的3个HNF3结合位点中,即使其中2个或3个结合位点同时联合突变,HNF3β仍能抑制HBV的转录和复制.Pp、PS1p和Sp区HNF3结合位点的突变不能阻断HNF3β对HBV复制的抑制作用.     

肝癌细胞p15基因CpG岛甲基化研究

目的通过检测肝癌细胞株HepG2的抑癌基因p15基因启动子区CpG岛的甲基化状态,探讨其与肿瘤发生的可能相关性。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对人肝癌细胞株HepG2的p15基因启动子区域CpG岛的甲基化状态进行检测,以人淋巴瘤细胞株Raji为阳性对照,以正常人外周血单核细胞(PBMC)和肝细胞为阴性对照。结果肝癌细胞HepG2中p15基因启动子区域CpG岛甲基化和非甲基化检测均呈阳性,正常人外周血单核细胞和肝细胞甲基化检测阴性。结论肝癌细胞株HepG2抑癌基因p15基因CpG岛存在高度甲基化,可能与肝癌的发生相关。     

利用高压注射体内转染法实现HBsAg在小鼠肝脏中的高效表达

目的：观察能否应用高压注射体内转染法实现外源DNA在肝脏中高效表达,为嗜肝病毒分子生物学研究奠定方法学基础.方法：将大容量乙肝病毒表面抗原表达质粒pVAX1/S DNA溶液,通过尾静脉快速注射入小鼠体内,用免疫组化检测小鼠心、肺、肝、脾、肾组织中HBsAg的表达情况.结果：经小鼠尾静脉高压注射pVAX1/S质粒DNA后,HBsAg主要在肝脏表达;且高压注射组明显强于缓慢注射组;高压注射5μg pVAX1/S质粒DNA后8小时,在肝脏观察到较强的HBsAg表达.结论：通过尾静脉高压注射,能实现HBsAg主要在肝脏高效表达.     

乙型、丙型肝炎DNA疫苗单次联合接种后小鼠的免疫应答

目的：观察由编码ＨＢｓＡｇ与ＨＣＶ－ＣＥ２抗原的两种重组真核细胞表达质粒制备的ＤＮＡ疫苗联合接种ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,其施生行异性免疫应答的规律和相互影响。方法：应用上述２种ＤＮＡ疫苗单次联合免疫小鼠,动态观察血中特生抗体水平;并完成稳定转染,表达相应抗原的ＳＰ２／０骨髓瘤细胞的建株,采用ＣＴＬ杀伤活性体内诱生实验的方法建立观察ＤＮＡ疫苗免疫保护与治疗泊动物模型。结果：两种ＤＮＡ疫苗单次联合免疫小鼠     

乙型肝炎病毒感染患者肝移植术后再感染及其机制

肝移植已成为终末期肝脏疾病的一个重要治疗手段。但是，乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝病患者肝移植术后，乙型肝炎的复发率达70％～80％，严重地影响了肝移植术的远期效果，成为亟待解决的一个问题。作者在对肝移植患者HBV再感染随访观察的基础上，采集外周血单个核淋巴细胞(PBMC)，进行HBV DNA定量检测和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的定性检测，对肝移植术后患者HBV再感染的状况及其机制进行了探讨。     

hnRNPB_1基因的RNA干扰抑制肺癌细胞A549增殖研究

目的 探讨特异性小分子干扰(small interference,siRNA)抑制肺癌A549细胞核内不均一核糖蛋白B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPB1)基因的表达后,对A549细胞增殖的影响. 方法构建hnRNPB1特异性的siRNA真核细胞表达载体并转染人肺癌细胞株A549,观察重组载体分别在第1、4及6周对A549细胞hnRNPB1基因的干扰效果以及对肺癌细胞周期及凋亡的影响.结果 特异性siRNA真核表达可显著抑制肺癌细胞hnRNPB1基因的表达,使hnRNPB1 mRNA的表达减少46%～73%,蛋白表达减少77.69%～83.04%,作用时间至少可维持克隆形成后4周,同时,hnRNPB1基因表达下调抑制了A549细胞在体外的增殖,促进了肺癌细胞的凋亡.结论 特异性siRNA能特异、高效地抑制肺癌细胞株A549细胞hnRNPB1基因的表达,RNAi可能为肺癌的基因治疗提供新策略.     

乳腺外科围术期抗菌药物应用管理策略

目的 探讨乳腺外科围术期抗菌药物合理应用方案和管理策略实施的可行性,以及对医疗质量指标和卫生经济学指标的综合影响.方法 以普外科乳腺手术病例为研究对象,分为干预组和对照组,每组各47例,共94例,采用1:1病例对照研究;干预组采用围手术期抗菌药物合理应用管理策略,对照组按照外科医师传统用药方法;比较两组住院天数、住院总费用、抗菌药物费用、用药合理性比例、医院感染率.结果 干预组患者住院时间为(7.28±2.16)d,较对照组的(9.19±2.04)d明显缩短(P=0.0000);干预组住院总费用、抗菌药物费用分别为(4222.59±1056.57)元、(685.82±299.94)元,较对照组的(5457.84±1768.18)元、(1049.50±453.05)元,显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05);干预组用药合理性为87.24％,而对照组为23.40％,二者差异有统计学意义(P＜0.01);两组患者均未发生医院感染.结论 围手术期抗菌药物合理应用管理策略实施后,乳腺手术围手术期抗菌药物的预防性使用更加合理,住院天数和药品费用明显减少;进而促进安全、有效、经济、合理地使用抗菌药物,为医院降低单病种费用提供了一种有效且可行的模式.     

体外检测近交系小鼠HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞方法的建立

通过磷酸钙法用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因—ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＳＶ２ｎｅｏ对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—Ｐ８１５细胞进行了质粒共转染，并经Ｇ４１８筛选得到了Ｇ４１８抗性细胞，即Ｐ８１５Ｓ细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实Ｐ８１５Ｓ细胞内有ＨＢＶＳ基因的存在；Ｐ８１５Ｓ细胞浆内和膜上有ＨＢｓＡｇ的表达。表明了Ｐ８１５Ｓ细胞可作为体外检测ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ的靶细胞。进一步对Ｐ８１５Ｓ细胞成功地进行５１Ｃｒ标记，以及标记靶细胞５１Ｃｒ最大释放值和自然释放值的测定表明：利用５１Ｃｒ释放法体外检测近交系小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ功能的方法被建立。     

嗜麦芽寡养单胞菌医院感染危险因素和临床分析

目的 调查我院院内嗜麦芽寡养单胞菌感染的临床特点、危险因素和药敏结果，以掌握其防治措施。方法 收集我院1998年1月-2000年l2月的3年间98883例出院患者中70例医院内嗜麦芽寡养单胞菌感染者的临床和检验资料，进行回顾性统计分析。结果嗜麦芽寡养单胞菌医院感染好发于下呼吸道(97．0％)，感染者均有严重基础疾病，l00．00％接受抗菌药物治疗，接受各种侵入性操作包括机械通气、气管切开、留置尿管、全麻手术等，0R值分别为18．45、25.45、10．56、5．39；嗜麦芽寡养单胞菌对多种抗菌药物耐药，对阿米卡星、头孢噻肟钠、亚胺培南、环丙沙星等的耐药率分别为：85．9％、92．0％、97．7％、46.3％；且病情重，死亡率高达39．7％。结论 严格掌握各种侵入性诊断、治疗指征，作好各种器械的消毒、灭菌工作，积极治疗基础疾病，掌握抗菌药物合理使用原则，根据药敏试验结果选用抗菌药物，有利于防治该类菌所致的医院感染。     

综合性医院抗菌药物应用管理成效

目的 通过综合干预促进抗菌药物的临床合理应用。方法 成立医院抗菌药物使用管理专家咨询组，制定各专业抗菌药物使用规范，进行抗菌药物应用培训和检查，统计病原菌分布及耐药性变迁；随后分别抽取2000、2002、2004年出院病历的10％，分析抗菌药物使用和病原菌送检率。结果 采用上述措施后，预防和治疗性使用指征的构成比明显提高（P〈0．01）；除内科外各科抗菌药物联用比例降低（P〈0．01）；病原菌送检率明显提高（P〈0．05）。结论 通过临床医师、药剂师、检验和感染管理人员等的共同参与，可以达到控制和合理使用抗菌药物的目的。