虎杖MYB转录因子PcMYB1的表达特性和功能研究

目的对虎杖中1个新的R2R3-MYB转录因子基因PcMYB1进行转录活性鉴定和表达特性分析,并在转基因拟南芥中进行功能研究。方法利用酵母单杂交实验分析PcMYB1的转录活性;荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测虎杖中PcMYB1的表达模式;利用Wiesner染色和溴乙酰法检测PcMYB1转基因拟南芥中的木质素含量;RT-PCR技术分析PcMYB1转基因拟南芥木质素合成相关基因的表达。结果酵母单杂实验结果表明,PcMYB1具有转录抑制活性;RT-PCR结果显示PcMYB1在虎杖根、茎、叶中均有表达,在叶中表达量最高,并且紫外照射处理可诱导叶片中PcMYB1的表达;与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥的株高降低了24.07%,木质部的细胞染色程度浅,转基因拟南芥木质素含量降低了14.81%,参与木质素合成的AtC4H、AtC3H、AtF5H、AtCOMT、AtCAD基因表达下调。结论 PcMYB1具有转录抑制活性,对植物木质素合成具有负调控作用。     

三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的影响＊

目的 探究三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的调控及胃黏膜细胞焦亡的影响。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三仁汤高、中、低剂量组，每组各10只。根据前期的研究方法，利用高脂、高糖、湿热的条件，复制脾胃湿热证的模型，给予三仁汤干预，高、中、低剂量分别为16.4 g/kg，8.2 g/kg，4.1 g/kg。HE染色观察胃黏膜病理变化，免疫印迹法检测大鼠胃黏膜细胞NLRP3、Caspase-1蛋白的表达。结果HE结果显示，三仁汤高、中、低剂量组均对胃黏膜细胞焦亡有所改善。免疫印迹的结果显示模型组大鼠NLRP3和Caspase-1高表达，三仁汤高、中、低剂量组下调NLRP3和Caspase-1蛋白的表达，具有统计学差异（P < 0.05）。结论 三仁汤可能通过降低脾胃湿热大鼠的NLRP3、Caspase-1蛋白的表达，减少胃粘膜细胞焦亡，抑制胃粘膜炎症的爆发，从而防治脾胃湿热证模型大鼠，为临床治疗脾胃湿热证的胃痛提供了理论依据。     

化妆品相关皮肤不良反应512例临床特点及致病成分分析

【摘要】 目的 分析化妆品相关皮肤不良反应的临床特点及主要致病成分，为化妆品不良反应起到预警作用并提供客观的风险评估依据。方法 收集2018年3月至2019年10月在重庆市中医院门诊就诊的512例化妆品不良反应可疑患者，男14例，女498例，通过填写统一制定的化妆品不良反应报告卡，记录患者的病史资料和所使用化妆品的相关信息；对其中103例（男3例，女100例）进行化妆品原物斑贴试验及化妆品成分斑贴试验，结合48和72 h斑贴试验结果综合判定并汇总分析。结果 512例可疑化妆品不良反应病例中，主要表现类型为接触性皮炎（495例，96.7%）。化妆品不良反应的皮损形态主要为红斑501例（97.9%）、丘疹313例（61.1%）、水肿249例（48.6%）、鳞屑166例（32.4%）；症状主要为瘙痒480例（93.8%），其次为灼热感359例（70.1%）和紧绷感297例（58.0%）。103例化妆品成分斑贴试验显示，阳性71例，最易引起化妆品不良反应的变应原分别为硫柳汞（31例，30.1%）、十二烷基硫酸钠（29例，28.2%）、秘鲁香脂（17例，16.5%）、布罗波尔（12例，11.7%）及三乙醇胺（10例，9.7%）。将化妆品变应原系列分为14个类别，阳性率前4位的类别分别为乳化剂54例（45.8%）、防腐剂47例（39.8%）、芳香剂17例（14.4%）和表面活性剂10例（8.5%）。2例男性和69例女性斑贴试验阳性，男女阳性率差异无统计学意义（2/3比69/100，χ2 = 0.01，P > 0.05）；18 ~ 29岁组、30 ~ 49岁组及50 ~ 70岁组阳性率分别是34%、34%、32.4%，各组间阳性率差异无统计学意义（χ2 = 0.693，P > 0.05）。结论 化妆品不良反应最常见的表现为接触性皮炎，致病成分具有多样性，最易引起化妆品皮肤不良反应的变应原分别为硫柳汞、十二烷基硫酸钠、秘鲁香脂、布罗波尔及三乙醇胺。     

外周血单个核细胞宫腔内灌注治疗对反复种植失败患者妊娠结局的影响

目的探讨自体外周血单个核细胞（PBMCs）宫腔内灌注治疗对反复种植失败（RIF）患者胚胎种植率和临床妊娠率的影响。方法按随机数字表法将纳入的39例拟行冷冻胚胎移植的RIF患者随机分为治疗组（20例）和对照组（19例）,治疗组在移植前3d抽取外周血20ml,应用淋巴细胞分离液分离PBMC后行宫腔灌注。对照组移植前未行自体PBMC宫腔灌注。结果两组患者年龄、血清卵泡刺激激素（FsH）、取卵周期数、移植周期数、移植胚胎数和单周期移植优质胚胎数均无统计学差异（P〉0．05）。两组胚胎种植率（22．8％VS．6．4％）和临床妊娠率（50．0％VS．17．6％）比较,治疗组均显著高于对照组（P％0．05）。两组单周期活婴出生率（45．0％VS．17．6％）比较无统计学差异（P〉0．05）。结论自体PBMC宫腔内灌注治疗可以提高RIF患者胚胎种植率和临床妊娠率,故可作为RIF患者胚胎移植前提供可选择的处理方案。     

拮抗剂方案中应用促性腺激素释放激素激动剂诱发卵母细胞成熟后不同黄体支持方案对妊娠结局的影响——一项提前终止的前瞻随机临床对照研究

目的 (1)在促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案中应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)诱发卵母细胞最终成熟后,在黄体支持方案中比较孕激素+人绒毛膜促性腺激素(HCG)和孕激素+雌激素两种不同的黄体支持方案对妊娠结局的影响;(2)在GnRH-ant方案中比较添加高纯度人绝经期促性腺激素(HP-HMG)和添加人重组黄体生成素(rLH)对妊娠结局的影响.方法 前瞻随机对照的临床实验.对照组32例,添加rLH,GnRH-a诱发卵母细胞最终成熟后12h添加1,000 IU、35 h添加500 IU HCG,取卵后应用孕激素;实验Ⅰ组37例,添加HP-HMG,黄体支持方案同对照组;实验Ⅱ组33例,添加HP-HMG,取卵后应用孕激素和雌激素.结果 对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的新鲜周期胚胎移植周期临床妊娠率分别是38.10％、23.08％和8.70％,实验Ⅱ组新鲜周期临床妊娠率明显低于本中心质控标准,该临床实验提前终止.对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组未妊娠者已有33例进行了冷冻胚胎移植周期,其临床妊娠率分别为50.00％,63.64％和57.14％.三组均无中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生.结论 拮抗剂方案中应用GnRH-a诱发卵母细胞成熟可以避免中重度OHSS的发生,且不影响胚胎质量.GnRH激动剂诱发卵母细胞成熟对黄体功能和内膜容受性存在不利影响,单纯补充雌孕激素无法替代HCG的作用.     

胶原海绵复合新生大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织

目的:探索以胶原海绵为支架、新生大鼠原代心肌细胞为种子细胞,于体外构建工程化心肌组织的方法。方法:实验于2005-12/2006-11在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成。Ⅰ型胶原海绵剪切成方形片状(2.0cm×1.4cm×0.2cm),经60Co照射消毒,于DMEM培养液中水化1h左右。另取1d龄SD大鼠心脏,剪成小碎块,然后用2.5g/L胰蛋白酶于37℃中消化,吸取上清至含胎牛血清的DMEM中,重复消化四五次,用差速贴壁法除去大部分成纤维细胞,将细胞沉淀用DMEM培养液以2×109L-1的密度悬浮备用。将上述的心肌细胞悬液1mL缓慢滴注于玻璃模型中的胶原海绵上,然后置于细胞培养中培养。肉眼及显微镜主要观察工程化心肌组织在培养期间的自发收缩情况,包括收缩的部位、强度、频率、一致性以及收缩随时间变化的情况。苏木精-伊红染色观察工程化心肌组织内胶原纤维的变化,细胞形态,胞核的形状及细胞之间的连接。免疫组织化学染色和透射电镜观察工程化心肌组织片的形态和功能。结果:①细胞接种于胶原海绵上1d后,细胞/胶原复合物的凝胶化过程基本完毕,体积保持恒定,维持至培养结束,第3天细胞/胶原复合物局部出现点片状自发收缩,第5天整个细胞/胶原复合物出现同步化自发收缩,收缩频率61～199次/min。2周后37.5%的工程化心肌组织的自发收缩活动减弱,但75%的工程化心肌组织的自发收缩活动持续至培养结束。②苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和透射电子显微镜显示,工程化心肌组织内细胞间连接广泛存在,细胞多呈纵向分布,胞核呈长圆形,胞浆内α-肌节肌动蛋白阳性,胞内肌原纤维排列整齐,可见到心肌特异性的肌小节结构和Z线,多数细胞具有分化的心肌细胞表型。结论:用新生大鼠原代心肌细胞为种子细胞、以Ⅰ型胶原海绵为支架材料,构建出的工程化心肌组织,于体外可长时间持续自发收缩,该细胞/胶原复合物的形态结构与生理功能均类似于成熟大鼠心肌组织。     

QUADAS的制定:用于系统评价中评价诊断性研究质量的工具

背景在以系统评价为基石的循证医学时代,需要有恰当的质量评价工具。对诊断性研究的评价目前尚缺乏系统开发且经过验证的评价工具。本研究的目的是采用共识决策法整合经验证据和专家意见,制定在系统评价时用于评价原始诊断性研究质量的工具。方法按照循证原则,我们在之前发表的3篇诊断性研究文献的综述的基础上,初选出一些条目形成列表,然后通过Delphi流程逐步调整列表,形成质量评价工具。参与Delphi流程的都是诊断性研究领域的专家。结果共有9位诊断学领域的专家参与Delphi流程。经过4轮Delphi流程后,专家们对哪些条目应纳入评价工具达成共识,我们把这个评价工具命名为QUADAS。纳入条目从最初的28个减少到14个,涵盖了疾病谱、金标准、疾病进展偏倚(disease progression bias)、证实偏倚(verification bias)、评价偏倚、临床评价偏倚、合并偏倚、试验的实施、病例退出以及不确定结果。QUADAS工具中的每个条目都配有评分细则。结论本研究项目开发出了用于诊断性试验系统评价的循证质量评价工具。下一步工作是确定其适用性和有效性。     

循证决策就是个体化的临床决策

1批评家认为循证医学忽视了临床的个体化特点对循证医学(EBM)持批评态度的人坚持认为EBM忽视了个体患者的多样性,这就是说EBM暗示医生可盲目地使用研究结果,尤其是用于个体患者,而无视其个体差异。这一观点与现实大相径庭。无论是来自基础还是应用研究的证据,生物变异的普遍性导致难以将     

健脾益肾方联用中药灌肠对改善慢性肾衰竭患者免疫功能的效果观察

目的:观察健脾益肾方联合中药灌肠对改善慢性肾衰竭患者免疫功能的效果。方法:将65例慢性肾衰竭患者随机分为两组,治疗组33例给予健脾益肾方和中药灌肠;对照组32例仅予中药灌肠。治疗前后检查患者肾功能三项、血红蛋白、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及血清补体C3、C4水平,并观察食欲、睡眠及二便情况等。结果:健脾益肾方与中药灌肠联用能更显著地降低肾功能三项,提升血红蛋白、血清补体C3及免疫球蛋白IgG、IgM水平,两组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论:健脾益肾方与中药灌肠联用能明显改善慢性肾衰竭患者的临床症状,保护肾功能,调节其免疫功能状态,从而治疗及延缓肾衰竭。